正交試驗法優選黃精加壓酒蒸工藝研究

張 婕，金傳山，吳德玲，張 偉

（安徽中醫藥大學藥學院 現代中藥安徽省重點實驗室，安徽合肥 230031）

正交試驗法優選黃精加壓酒蒸工藝研究

張 婕，金傳山，吳德玲，張 偉

（安徽中醫藥大學藥學院 現代中藥安徽省重點實驗室，安徽合肥 230031）

目的 優選黃精加壓酒蒸的最佳工藝。方法 以外觀性狀和黃精多糖為指標，采用正交試驗法考察蒸制時間、蒸制溫度、加酒量、蒸制次數4個因素，優選黃精的炮制工藝。結果 黃精加壓酒蒸最佳工藝為黃精100g，10％黃酒悶潤，120℃高壓蒸60min，取出，切3mm厚片，干燥。結論 優選得到的黃精炮制工藝穩定，可為黃精飲片的工業化生產提供參考依據。

黃精；多糖；加壓酒蒸；正交試驗

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianumColl.et Hemsl、黃精P.sibiricumRed.或多花黃精P.cyrtonema Hua的干燥根莖。按形狀不同，習稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”。黃精具有補氣養陰、健脾、潤肺、益腎的功效［1］，主要含有多糖、蒽醌、皂苷以及氨基酸等成分。黃精多糖具有調節免疫、延緩衰老、降血糖、降血脂等藥理作用［2－4］。生黃精具有麻味，易刺激咽喉，蒸制可使黃精去除原有的麻味，同時使其外觀顏色由淡黃色或黃棕色轉變為棕褐色或黑色。酒制能助藥勢，使之更好地發揮補益作用，故臨床上選用酒制黃精。由于2010版《中華人民共和國藥典》對黃精炮制工藝的規定較為籠統，且缺乏穩定可控的工藝參數，導致黃精飲片的質量參差不齊。故本試驗采用L9（34）正交試驗法，考察蒸制時間、蒸制溫度、加酒量、蒸制次數4個因素，優選黃精的炮制工藝，為黃精飲片的生產提供參考依據。

1 材料

1.1 儀器 UV－1600紫外可見分光光度計：上海美普達儀器有限公司；AS3120型超聲清洗儀：加拿大Autoscience公司；CP225D型十萬分之一電子天平：德國Sartorius公司；WL－100型打粉機：浙江省瑞安市威力制藥機械廠；HHS111－2型電熱恒溫水浴鍋：北京長安科學儀器廠；立式壓力蒸汽滅菌器：上海博迅實業有限公司醫療設備廠。

1.2 試藥 黃精藥材經安徽中醫藥大學藥學院金傳山教授鑒定為百合科植物多花黃精P.cyrtonema Hua的干燥根莖。無水葡萄糖：上海潤捷化學試劑有限公司（批號20100726）；海神黃酒：安徽海神黃酒集團有限公司；硫酸、0.2％蒽酮－硫酸試液等均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃精多糖的測定

2.1.1 對照品溶液的制備：取經105℃干燥至恒質量的葡萄糖對照品3.32mg，精密稱定，置于10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成0.332 mg／ml的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備：精密稱取黃精樣品0.5g，置于250ml圓底燒瓶中，加80％乙醇150ml回流提取1h，趁熱過濾，用熱的80％乙醇洗滌燒瓶及殘渣3次，每次10ml。然后將濾紙及殘渣放回燒瓶中，加水150ml回流提取1h，趁熱過濾，熱水洗滌燒瓶及殘渣4次，每次10ml，合并濾液和洗滌液，轉移至250ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得［1］。

2.1.3 線性關系考察：精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，分別置于10ml具塞刻度試管中，各加水至2ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2％蒽酮－硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應試劑為空白。在582nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，葡萄糖濃度（c）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程為：A＝0.335 2 c＋0.060 1，r＝0.998，線性范圍為0.33～1.98mg／ml。

2.1.4 精密度試驗：精密吸取葡萄糖對照品溶液1.0ml，置具塞試管中，按照“2.1.3”項下方法操作，在波長582nm波長處測定吸光度，連續測定5次，測得RSD為1.94％，結果表明儀器精密度良好，符合要求。

2.1.5 重復性試驗：精密稱取黃精樣品6份，約0.5g，制備6份供試品，按“2.1.2”項下方法制備，測定吸光度，計算樣品中黃精多糖的平均百分含量為5.38％，RSD＝1.92％。

2.1.6 穩定性試驗：取黃精樣品，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液，每隔10min測定1次吸光度，連續測定9次，RSD＝1.91％，結果表明樣品液顯色后在90min內基本穩定。

2.1.7 加樣回收率試驗：取已知黃精多糖含量的黃精樣品0.5g，共6份，精密稱定，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液，精密移取1ml，再加入葡萄糖對照品0.1ml，置10ml具塞刻度試管中，各加水至2ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2％蒽酮－硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，以相應試劑為空白。在582nm波長處測定吸光度，計算平均回收率為99.88％，RSD＝1.83％。

2.2 黃精加壓酒蒸工藝的正交試驗 以文獻查閱及單因素考察為基礎，采用L9（34）正交設計，考察蒸制時間（A）、蒸制溫度（B）、加酒量（C）、蒸制次數（D）4個因素，每個因素3個水平，以性狀、黃精多糖為評價指標，加黃酒悶潤，置高壓蒸汽滅菌鍋內蒸制，優選加壓酒蒸黃精的工藝。因素水平見表1。

2.2.1 加壓酒蒸黃精外觀性狀評分標準：參照2010版《中華人民共和國藥典》黃精性狀項下規定，確定評分。黑色，計1.0分；棕褐色，計0.8分；棕色，計0.5分。味甜、無口舌麻木感，計1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，計0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，計0.5分。嚼之黏性足，計1.0分；嚼之有黏性，計0.8分；嚼之無黏性，計0.5分。

表1 正交試驗因素水平表

2.2.2 綜合評分標準：為客觀反映加壓酒蒸黃精工藝中各因素對黃精質量的影響，本試驗將外觀性狀及與黃精功效相關成分（黃精多糖）作為評定指標，采用綜合評分法評定。因黃精多糖是黃精的有效成分，且為2010版《中華人民共和國藥典》規定的黃精的指標成分，又因外觀性狀和黃精多糖的含量對酒蒸黃精的質量評價有同等重要意義，故外觀性狀加權系數定為0.5，黃精多糖含量的加權系數為0.5。外觀性狀加權評分＝（外觀性狀評分／9個樣品中最高外觀性狀評分）×5，黃精多糖含量加權評分＝（黃精多糖含量／9個樣品中黃精多糖最高含量）×5。綜合評分＝外觀性狀加權評分＋黃精多糖含量加權評分。結果分別見表2、表3。

表2 黃精加壓酒蒸工藝的L9（34）正交試驗結果（n＝3）

表3 方差分析表

由表2中極差R值可知，各因素的作用為：B＞ A＞D＞C，A因素（蒸制時間）和B因素（蒸制溫度）對試驗結果有顯著性影響。由于C因素（加酒量）和D因素（蒸制次數）對實驗結果無顯著性影響，從工業化生產節約能耗、便于操作等角度綜合考慮，酒蒸黃精最佳炮制工藝為A2B3C1D1，即黃精100g，10％黃酒悶潤，120℃高壓蒸60min，取出，切3mm厚片，干燥。

2.3 驗證試驗 按照上述黃精的最佳炮制工藝，取黃精100g，加入10％黃酒悶潤，120℃高壓蒸60 min，取出，切3mm厚片，干燥，制備黃精樣品3份。取樣測定蒸制品中黃精多糖的量。3批試驗得到的樣品均為黑色，味甜，嚼之黏性足。黃精多糖的含量分別為7.87％、8.05％、8.17％，表明工藝操作簡便，合理可控。

2.4 傳統蒸制和加壓蒸制黃精質量比較

2.4.1 傳統蒸制：參考前期試驗優選出的黃精傳統炮制工藝，即取黃精100g，20％黃酒悶潤，大火蒸2h，反復6次，取出，切3mm厚片，干燥。

2.4.2 加壓蒸制：取黃精100g，10％黃酒悶潤，120℃高壓蒸60min，取出，切3mm厚片，干燥。

2.4.3 不同炮制方法所得黃精質量比較：方法同前，研究結果表明，加壓蒸制黃精的質量優于傳統蒸制黃精。見表4。

表4 傳統蒸制、加壓蒸制黃精質量比較（n＝3）

3 討論

文獻報道及臨床實踐表明，黃精生用會產生口舌麻木、刺激咽喉的不良反應，炮制后既能消除不良反應又能增強補脾、益腎的功效［5］。本研究結果表明，黃精炮制后無口舌麻木感，色黑味甜，質地柔軟，與文獻報道相符。

外觀質量評價是傳統意義上的中藥飲片質量標準，同時是目前單一化學成分和化學部位不能替代的評價標準［6］，故將其作為正交試驗的評價指標之一。黃精多糖是黃精的主要有效成分，具有調節免疫、延緩衰老、降血糖等作用，故選其作為評價指標。試驗結果表明，加壓蒸制黃精的黃精多糖含量高于傳統蒸制黃精，且外觀質量較優。

黃精傳統的炮制方法費工耗時，隨常壓蒸制時間的延長，藥液損失增多，且易導致其內部纖維化，影響飲片質量。采用加壓蒸制法蒸制黃精，便于控制時間、溫度等影響因素，又能夠縮短炮制時間，減少有效成分的流失。與常壓蒸制黃精相比，加壓蒸制黃精工藝合理，穩定可行，故可為黃精的產業化生產提供參考依據。

本實驗僅從外觀性狀和化學成分的角度優選黃精炮制工藝，還應將化學成分、藥效等多指標綜合評價炮制工藝。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：288.

［2］陳立娜，高艷坤，都述虎.黃精質量標準的研究［J］.中藥材，2006，29（12）：1367－1369.

［3］賀海花，楊云，王爽，等.不同蒸制方法和時間對黃精中多糖含量的影響［J］.中藥材，2009，32（6）：861－862.

［4］張瑩，鐘凌云.炮制對黃精化學成分和藥理作用影響研究［J］.江西中醫學院學報，2010，22（4）：77－79.

［5］鐘凌云，周燁，龔千鋒.炮制對黃精薯蕷皂苷元影響的研究［J］.中華中醫藥學刊，2009，27（3）：538－540.

［6］李群，王瑾，張會敏.正交試驗法優選桑白皮蜜炙工藝［J］.中草藥，2013，44（3）：286－290.

Optimization of Pressurized Wine－steaming Process for Rhizoma Polygonati by Orthogonal Test

ZHANG Jie，JIN Chuan－shan，WU De－ling，ZHANG Wei
（School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine ＆Anhui Key Laboratory of Modern Chinese Materia Medica，Anhui Hefei 230031，China）

Objective To optimize the pressurized wine－steaming process for Rhizoma Polygonati.Methods The orthogonal test was used to investigate the effects of steaming time，steaming temperature，wine volume，and steaming times on the appearance and polysaccharides，and the steaming process was optimized accordingly.Results The optimal pressurized wine－steaming process for Rhizoma Polygonati was as follows：Rhizoma Polygonati（100g）was subjected to covered moistening with 10％yellow wine and high－pressure steaming at 120℃for 60min and was then taken out，cut into 3mm thick slices，and dried.Conclusion The optimized pressurized wine－steaming process is feasible and reliable and provides guidance for the industrial production of Rhizoma Polygonati decoction pieces.

Rhizoma Polygonati；polysaccharides；pressurized wine－steaming；orthogonal test

R283

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.01.025

2013－07－26）

國際科技合作計劃項目（2011DFA31950）

張婕（1987－），女，碩士研究生

金傳山，jcs4＠sohu.com