歙白術與其他產地白術中白術內酯類成分含量比較

楊 潔，林 薔，李立華，孟 楣，方成武

（1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院 國家中醫藥管理局中藥藥劑科研三級實驗室，安徽合肥 230031；2.安徽省立兒童醫院，安徽合肥 230051；3.亳州職業技術學院，安徽亳州 236000）

歙白術與其他產地白術中白術內酯類成分含量比較

楊 潔1，林 薔2，李立華1，孟 楣1，方成武3

（1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院 國家中醫藥管理局中藥藥劑科研三級實驗室，安徽合肥 230031；2.安徽省立兒童醫院，安徽合肥 230051；3.亳州職業技術學院，安徽亳州 236000）

目的 以白術內酯類成分為評價指標，比較歙白術與其他產地白術的質量差異。方法 采用高效液相色譜法同時測定安徽、浙江5個產地白術藥材中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。色譜柱：Agilent TC－C18（4.6 mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇－水（70∶30）；檢測波長：白術內酯Ⅰ、Ⅲ的檢測波長為220nm，白術內酯Ⅱ的檢測波長為276nm；流速：1.0ml／min；柱溫：室溫；進樣量：20μl。結果 歙白術中白術內酯Ⅱ的含量顯著高于其他產地白術。結論 白術內酯類成分可作為不同產地白術質量的評價指標。

歙白術；高效液相色譜法；白術內酯；含量測定

白術為菊科蒼術屬植物白術（Atractylodes macrocephala Koidz.）的干燥根莖，素有“十方九用”“南術北參”之稱［1］，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎之功效［2］。白術內酯類成分是白術中重要的活性成分，主要包括白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ、白術內酯Ⅳ、白術內酯Ⅴ、白術內酯Ⅵ、白術內酯Ⅶ以及雙白術內酯等［3］。現代藥理研究表明，白術內酯類成分是白術抗炎、抗癌的有效成分，還具有調節胃腸道功能和促進營養物質吸收的功能［4］。白術的道地藥材有于術、浙東術、歙術、祁術、舒州術、江西術和平江術［5］，其中安徽歙縣產白術，歷史悠久，是安徽著名的藥材之一。《本草蒙筌》記載：“歙術，產深谷……仍覓歙為優。”古代醫家普遍認為歙白術品質優于浙白術［6］。目前，對于白術的化學成分、藥理、臨床應用等方面已有深入研究和大量報道［7－13］，但有關歙白術的質量評價研究甚少。本研究應用高效液相色譜法同時測定安徽、浙江5個產地白術中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量，比較歙白術與其他產地白術之間3種白術內酯的差異，為歙白術質量評價指標提供理論依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 600高效液相色譜系統：美國產，包括Waters 2487型紫外檢測器、Millennium 32色譜工作站；WL－100型高速中草藥粉碎機：浙江省瑞安市威力制藥機械廠；KQ3200DB型數控超聲波清洗器：江蘇省昆山市超聲儀器有限公司；SYZ－B型石英亞沸高純水蒸餾器：江蘇金壇市環宇科學儀器廠；賽多利斯BS200S電子天平：德國Sartorious公司；80－Z離心沉淀器：上海手術器械廠；GZX－9240 MBE數顯鼓風干燥箱：上海博訊實業有限公司醫療設備廠。

1.2 試藥 白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品由中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心提供，批號分別為1017－080819、1018－081209、1019－080820，純度≥98％；藥材樣品采于安徽歙縣、亳州、寧國、霍山和浙江于潛等地，見表1。藥材經安徽中醫藥大學中藥資源與中藥學教研室劉守金教授鑒定為白術Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖。甲醇為色譜純，水為重蒸水（自制），其余試劑為分析純。

表1 白術藥材樣品采集信息

2 方法

2.1 色譜條件及系統適用性試驗 色譜柱：Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇－水（70∶30）；檢測波長：白術內酯Ⅰ、Ⅲ檢測波長為220nm，白術內酯Ⅱ檢測波長為276nm；流速：1.0ml／min；進樣量：20μl；柱溫：室溫。

按照上述色譜條件分別注入白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的混合對照品溶液及樣品進行測定，結果表明，在該色譜條件下，理論板數以白術內酯Ⅰ的色譜峰計算應不低于3 000，主峰與相鄰其他色譜峰的分離度均不小于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。對照品與樣品的高效液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 白術內酯Ⅱ對照品（A）及歙白術樣品（B）的高效液相色譜圖（276nm，峰1為白術內酯Ⅱ）

圖2 白術內酯Ⅰ、Ⅲ對照品（C）及歙白術樣品（D）的高效液相色譜圖（220nm，峰2為白術內酯Ⅲ，峰3為白術內酯Ⅰ）

2.2 對照品溶液的制備 分別稱取白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品適量，加甲醇稀釋至刻度，制成含有白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品分別為2.56、3.22、3.24 mg／ml的混標儲備液。

2.3 供試品溶液制備 稱取藥材粉末（過40目篩）約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液10ml，超聲處理30min，3 000r／min離心10 min，靜置，取上清液，置于容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，溶液過0.45μm微孔濾膜，制得供試品溶液。2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察：分別精密吸取白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品儲備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于10ml容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下進行分析，分別以對照品溶液濃度為橫坐標（x），色譜峰面積為縱坐標（y），繪制標準曲線，得白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的回歸方程分別為：y1＝69 890 x1＋257 610，r1＝0.999 3；y2＝629 96 x2＋264 427，r2＝0.999 6；y3＝100 435 x3＋333 372，r3＝0.999 6。結果表明，白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別在25.6～128.0μg／ml、32.2～161.0μg／ml、32.4～162μg／ml的濃度范圍內峰面積與濃度呈良好的線性關系。

2.4.2 精密度試驗：精密吸取白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品溶液，濃度分別為2.56、3.22、3.24mg／ml，重復進樣6次，以峰面積計算白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的精密度，RSD分別為1.033％、1.498％、0.953 1％。

2.4.3 穩定性試驗：取同一供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10、24h在上述色譜條件下進行分析。白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的RSD分別為1.368％、1.443％、1.859％。

2.4.4 重復性試驗：取同一批藥材樣品粉末5份各1.0g，精密稱定，按“2.3”項下方法操作，測定，白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的RSD分別為1.189％、1.171％、0.358 2％。

2.4.5 加樣回收試驗：稱取已測定含量的樣品粉末0.5g，共6份，精密稱定，分別加入白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混標溶液，其中白術內酯Ⅰ（0.120mg／ml）0.55 ml、白術內酯Ⅱ（0.090mg／ml）0.60ml、白術內酯Ⅲ（0.120mg／ml）0.55ml，按“2.3”項下方法操作，在上述色譜條件下進樣分析，白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的平均回收率分別為98.52％、97.88％、98.28％，RSD分別為0.732 9％、0.701 4％、0.576 8％。

2.5 含量測定 按上述方法分別測定不同產地白術樣品中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。方差分析結果顯示，其他4種產地白術中白術內酯Ⅱ含量顯著低于歙縣產白術（P＜0.05）。見表2。

3 討論

本實驗以白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ為指標性成分，采用高效液相色譜法同時測定白術藥材中這3種成分的含量，方法簡便、準確，重現性好，可為進一步有效控制白術質量提供依據。

結果表明，安徽、浙江5個產地白術中白術內酯Ⅱ的含量差異具有統計學意義，以歙縣產白術中白術內酯Ⅱ含量最高。另外，歙白術中白術內酯Ⅰ、白術內酯Ⅲ的含量與其他產地差異均無統計學意義。

表2 白術樣品中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量比較（±s）

表2 白術樣品中白術內酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量比較（±s）

注：與安徽省歙縣長陔鄉白術比較，＊P＜0.05。

白術產地n白術內酯Ⅰ／（mg／g）白術內酯Ⅱ／（mg／g）白術內酯Ⅲ／（mg／g）安徽省歙縣長陔鄉10 0.096±0.031 0.152±0.022 0.122±0.018安徽省亳州市譙城區觀堂鎮李糊村10 0.123±0.037 0.091±0.008＊0.104±0.013安徽省寧國市云梯鄉10 0.083±0.015 0.087±0.011＊0.145±0.028浙江省臨安市于潛鎮西天目鄉后院村10 0.072±0.026 0.064±0.009＊0.139±0.021安徽省霍山縣太平畈鄉王家店村10 0.091±0.004 0.075±0.008＊0.128±0.008

安徽歙縣一直是白術的地道產區之一，在實地采樣中發現，歙白術多種植在海拔500m以上的陰坡上，且坡較陡（坡角＞30°），根狀莖大，其頂端有較為明顯的鶴頸，下端膨大形似如意，栽培多年者根莖不腐爛。歙白術的栽培方式與其他產地白術有所不同，現在大部分白術栽培種植都是用種子直播，先育苗，然后移栽1年后采收，而歙縣則采用芽頭繁殖，一般3～5年后采收，藥農在采收白術的同時直接將同一地點白術根莖上的芽頭切下埋在地里種植。李偉等［14］報道，歙白術中白術內酯Ⅱ含量明顯高于浙江、四川及安徽其他產地所產白術。這是否與當地的生態環境、栽培方式密切相關？不同年限的歙白術中白術內酯Ⅱ含量有何變化規律？歙白術與其他產地白術的質量差異對臨床療效有何影響？這些問題還有待于今后深入研究與探討。

（在本課題研究中，得到了安徽省“115”產業創新團隊——新安醫藥研究與開發創新團隊成員的大力支持與幫助，特此致謝。）

［1］神農本草經［M］.孫星衍，孫馮翼，輯.北京：人民衛生出版社，1984：13.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：95－96.

［3］楊娥，鐘艷梅，馮毅凡.白術化學成分和藥理作用的研究進展［J］.廣東藥學院學報，2012，28（2）：218－221.

［4］李偉，文紅梅，張愛華，等.白術質量標準研究Ⅰ：HPLC法測定2種白術內酯的含量［J］.藥物分析雜志，2001，21（3）：170－172.

［5］彭華勝，王德群.白術道地藥材的形成與變遷［J］.中國中藥雜志，2004，29（12）：1133－1135.

［6］陳嘉謨.本草蒙筌［M］.北京：華夏出版社，1998：82.

［7］張程榮，曹崗，叢曉東，等.白術化學成分和質量控制研究進展［J］.中華中醫藥雜志，2011，26（10）：2328－2331.

［8］趙桂芝，洪學智，戴詩文，等.白術內酯的藥理學研究進展［J］.中國藥事，2009，20（3）：230－231.

［9］劉玉強，才謙.50批不同來源白術藥材及飲片中白術內酯Ⅰ和白術內酯Ⅲ含量的HPLC法測定［J］.藥物分析雜志，2012，32（7）：1249－1252.

［10］祁銀濤，楊杰，李建娟，等.白術藥材質量標準研究［J］.時珍國醫國藥，2012，23（5）：1260－1262.

［11］劉玉強，甄畢賢，才謙.不同地區白術藥材及飲片中白術內酯Ⅱ的含量測定［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（4）：120－122.

［12］王瑤，田薇，王舒琳，等.浙江不同產區白術質量評價研究［J］.中草藥，2012，43（8）：1615－1620.

［13］劉青青，金傳山，吳德玲，等.不同加工工藝對白術中白術內酯Ⅰ和白術內酯Ⅲ含量的影響［J］.安徽中醫學院學報，2012，31（1）：58－61.

［14］李偉，文紅梅，崔小兵，等.HPLC法測定白術中白術內酯Ⅱ的含量［J］.現代中藥研究與實踐，2005，19（5）：35－36.

Content of Atractylenolides in AtractylodesmacrocephalaKoidz.from She County and Other Places：A Comparative Study

YANG Jie1，LIN Qiang2，LI Li－hua1，MENG Mei1，FANG Cheng－wu3
（1.The First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine ＆The Third Grade Lab for Scientific Research of Chinese Drugs Agentia，State Administration of Traditional Chinese Medicine，Anhui Hefei 230031，China；2.Anhui Provincial Children's Hospital，Anhui Hefei 230051，China；3.Bozhou Vocational and Technical College，Anhui Bozhou 236000，China）

Objective To compare the quality between Atractylodes macrocephala Koidz.from She County and those from other places based on the content of atractylenolides.Methods The content of atractylenolidesⅠ，Ⅱ，andⅢin Atractylodes macrocephala Koidz.from five places in Anhui and Zhejiang provinces，China was determined by high－performance liquid chromatography（HPLC）.HPLC was performed on an Agilent TC－C18column（4.6mm×250mm，5μm）with a mobile phase of methanol－water（70∶30）at a detection wavelength of 220nm（for atractylenolidesⅠandⅢ）or 276nm（for atractylenolideⅡ），a flow rate of 1.0ml／min，a column temperature of room temperature，and a sample size of 20μl.Results Atractylodes macrocephala Koidz.from She County had significantly higher content of atractylenolideⅡthan those from other places.Conclusion Atractylenolides can be used as an evaluation index for the quality of Atractylodes macrocephala Koidz.from different places.

Atractylodes macrocephala Koidz.from She County；high－performance liquid chromatography；atractylenolide；content determination

R927.2

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.01.026

2013－08－19）

美國許氏基金會合作研究項目（K200334）

楊潔（1985－），碩士，中藥師

方成武，cwfang1961＠sina.com