正交設計試驗優選腺苷鈷胺片處方

楊桂英，宮曉平，張彥鵬，黃立紅（.張家口市食品藥品檢驗中心，河北張家口 075000；.華北制藥股份有限公司，石家莊 05005）

腺苷鈷胺（Cobamamide）片為維生素類藥，是維生素B12的活性輔酶形式之一，用于維生素B12缺乏所致的疾病，如妊娠期貧血、營養不良性貧血，也可用于神經根炎、多發性神經炎、末梢神經炎等[1]，現收載于2010年版《中國藥典》（二部）[2]，為糖衣片。標準中未對溶出度加以規定，按現行標準進行檢驗得到的結果不能完全真實地反映藥品的質量。溶出度用于表征體外藥品的生物利用度，是口服固體制劑質量評價的重要指標之一[3-4]。為制備合格的腺苷鈷胺片，本文以溶出度為主要考察指標，采用正交設計試驗優化腺苷鈷胺片處方組成。

1 材料

1.1 儀器

Agilent1260 高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；沸騰制粒機（德國格拉特公司）；P2020 壓片機（德國菲特公司）；ML204電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；RC806智能溶出儀（天津大學無線電廠）；LDB-300包衣機（哈爾濱納諾醫藥化工設備有限公司）。

1.2 藥品與試劑

腺苷鈷胺原料藥（華北制藥股份有限公司，批號：30019913100001，純度：98.5%）；腺苷鈷胺標準品（中國食品藥品檢定研究院，批號：140658-200501，純度：98.5%）；腺苷鈷胺片（華北制藥股份有限公司，批號：131206、131207、131208，規格：每片含腺苷鈷胺0.25 mg）；羧甲基淀粉鈉（批號：130110）、微粉硅膠（批號：131103）、硬脂酸鎂（批號：20130412）均來自安徽山河藥用輔料股份有限公司；其余輔料均為藥用規格，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 處方初步篩選

根據華北制藥股份有限公司多年的片劑生產實踐經驗，選擇國內常用輔料，先對腺苷鈷胺片輔料進行單因素篩選。羧甲基淀粉鈉作為崩解劑具有良好的吸水性和膨脹性，從而實現片劑的崩解，促進藥物的溶出，其用量為1%～3%；微粉硅膠有很好的助流作用，確保物料的可壓性，其用量為0.1%～0.3%；硬脂酸鎂的潤滑作用可以確保壓片時片子的脫模性，確保壓片的順利進行，其用量為0.5%～1.5%。

2.2 溶出度考察

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗[5]。色譜柱：YMC C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節pH 為3.2）-乙腈（85 ∶15），流速：1 ml/min；紫外檢測器；檢測波長：260 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：50 μl。該色譜條件下，腺苷鈷胺與相鄰峰的分離度符合要求。

2.2.2 溶液的制備。對照品溶液：精密稱取經60 ℃減壓干燥4 h的腺苷鈷胺對照品適量，加水溶解，并用水稀釋成每1 ml中約含1.25 μg的溶液，搖勻，即得。溶出溶液：取片劑，照溶出度測定法[2010 年版《中國藥典》（二部）附錄ⅩC 小杯法][2]，以水200 ml為溶出介質，轉速75 r/min，依法操作。在30 min時，取溶液10 ml，用微孔濾膜（0.45 μm）迅速濾過，取續濾液，即得。以上溶液的制備均避光操作。

2.2.3 溶出度測定。取對照品溶液和溶出溶液各50 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜。按外標法以峰面積分別計算每片樣品在30 min時的溶出度。限度為標示量的70%。

2.3 正交設計試驗

通過初步篩選處方，確定以淀粉和糊精用一步制粒的生產工藝制作空白顆粒。確定影響腺苷鈷胺片質量的因素主要包括崩解劑、助流劑、潤滑劑的用量，每個因素分別選定3個水平，以30 min溶出度為主要考察指標，采用L9（34）正交試驗表[6]，對試驗方案進行設計，進一步考察腺苷鈷胺片（片質量約0.061 6 g）中羧甲基淀粉鈉用量（A）、微粉硅膠用量（B）、硬脂酸鎂用量（C）的影響。正交設計試驗因素與水平取值見表1。

表1 正交設計試驗因素與水平取值（g/10 000片）Tab 1 Factors and levels of orthogonal design experiment（g/10 000 tablets）

2.4 腺苷鈷胺片的制備

將處方量的腺苷鈷胺原料藥和制備的空白顆粒等量遞加2次，把等量遞加后的物料和剩余的空白顆粒按表1處方量羧甲基淀粉鈉、微粉硅膠混合30 min，再加入處方量的硬脂酸鎂混合5 min，即得腺苷鈷胺片的中間體顆粒。按中間體檢驗標準檢測中間體顆粒，確定片質量并壓片，然后進行包衣。按相同方法制得另外8 組不同的腺苷鈷胺片，測定所制片劑的30 min 溶出度。正交試驗設計與極差分析結果見表2，方差分析結果見表3。

表2 正交設計試驗與極差分析結果Tab 2 Results of orthogonal design experiment and range analysis

由表2、表3 可知，影響腺苷鈷胺片溶出度的主要因素是A，其次為B，C 因素無顯著影響，即A＞B＞C。根據溶出度綜合平均值結果，結合極差分析，確定最優處方組成為A3B3C1。

2.5 驗證試驗

表3 正交設計試驗方差分析結果Tab 3 Results of variance analysis of orthogonal design experiment

按照“2.3”項下最優處方，制備3批腺苷鈷胺片，批號分別為131206、131207、131208，檢測3批樣品30 min的溶出度，并按《中國藥典》中對腺苷鈷胺片的質量控制要求，對所制片劑中羥鈷胺素在460、352 nm波長處吸光度比值、崩解時限和含量進行檢測。結果各項指標均符合標準規定，詳見表4。

表4 3批腺苷鈷胺片的驗證試驗結果（n＝6）Tab 4 Results of validation test of 3 batches of Cobamamide tablets（n＝6）

2.6 穩定性試驗

將“2.4”項下制備的3 批樣品進行鋁塑包裝，在加速試驗條件[溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%]下放置1、2、3、6個月[2]，然后按“2.4”項下指標進行檢測。結果各項指標均符合標準規定，詳見表5。

表5 穩定性試驗結果Tab 5 Results of stability test

3 討論

腺苷鈷胺片為糖衣片，原料為暗紅色結晶或非結晶性粉末，見光易分解[7]，在生產和檢驗的過程要避光操作。現行標準2010 年版《中國藥典》（二部）無溶出度檢測項，只控制崩解時限。溶出度檢測是評價制劑處方、生產工藝、制劑生物利用度的重要指標，目前已成為制藥工業必設的一個質量控制項目。關于腺苷鈷胺片溶出度方法的建立與研究，筆者已進行過報道[5]。

考慮到藥物的溶出度與制劑的處方、工藝直接相關，筆者在多年生產實踐的基礎上，對生產處方進行了正交試驗優化。正交試驗結果顯示，崩解劑羧甲基淀粉鈉對腺苷鈷胺片的溶出度有顯著影響，故在保證產品質量的前提下，應采用適量崩解劑。本研究用正交試驗優選出的處方工藝制備的腺苷鈷胺片，產品質量穩定，各項指標均符合要求。該制備工藝簡單易行，適合工業化大生產，可為藥品生產企業研制腺苷鈷胺口服固體制劑提供參考和借鑒。

[1]王志良，冷健，催紅燕.腺苷鈷胺的臨床應用進展[J].中國藥事，2006，20（2）：122.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：1 086、附錄85、附錄199.

[3]姜建國，張西如，宋更申，等.枸櫞酸噴托維林制劑的溶出度試驗方法的建立及42 廠家樣品考察[J].中國藥房，2013，24（17）：1 593.

[4]劉春平，陳耀娣，王超，等.國產馬來酸依那普利與進口片劑體外溶出度比較[J].中國藥房，2013，24（21）：1 991.

[5]楊桂英，董琨，宮曉平，等.腺苷鈷胺片溶出度試驗方法的建立[J].中國藥房，2014，25（25）：2 376.

[6]劉東，陳乃富，陳乃東，等.地拉羅斯分散片的處方篩選研究[J].中國藥房，2013，24（45）：4 282.

[7]陳學軍，李振東.腺苷鈷胺原料藥的穩定性研究[J].黑龍江醫藥，2011，24（1）：82.