氯苯氧異丁酸甲氧基苯丙烯酸酯衍生物對高脂血癥模型大鼠的降血脂及抗氧化作用研究Δ

梁觀明，許 軍，謝燕飛，黃黎敏，劉燕華，唐 禎（江西中醫藥大學藥物化學學科組，南昌 330004）

隨著生活水平的提高，由高脂血癥導致的動脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病發病率逐年升高，并伴有年輕化趨勢，尋找低毒有效的新降血脂藥物已成為藥物研究的重點之一[1]。氯苯氧異丁酸甲氧基苯丙烯酸酯{（E）-3-[4-[2-（4-chlorophenoxy）-2-methylpropanoyloxy]-3-methoxyphenyl]acrylic acid，AZ}系將化學成分阿魏酸為母核通過化學結構篩選及結構改造所得的有降血脂活性的全新化合物[2]；而AZ衍生物是以AZ為先導化合物，經過結構改造篩選，通過化學結構修飾，所設計合成的一系列全新化合物，對開發新的降血脂藥物有重大意義。通過臨床前動物實驗研究發現，AZ能較好地從胃腸道吸收，進入血液后代謝為氯苯氧異丁酸[3]。通過對其藥效學的深入研究，已證明AZ為一種有效的降血脂候選藥物[4]，對高脂飼料所致大鼠高脂血癥有著顯著的改善作用[5]。本實驗篩選出5個AZ衍生物（AZ甲醇酯、AZ乙醇酯、AZ苯酚酯、AZ對氯苯酚酯、AZ對甲基苯酚酯），通過觀察其對高脂血癥模型大鼠的血清生化指標和超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、過氧化氫酶（CAT）活性的影響，研究AZ衍生物的降血脂及抗氧化作用，為系統研究AZ 及其衍生物藥效提供數據參考，為進一步尋找更加穩定有效的AZ衍生物奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器

Dimension RXL Max 全自動生化分析儀（德國Siemens 公司）；XL2100K 制備型超速離心機（美國Beck-Coulter Optima公司）；酶標儀（美國Biotek公司）。

1.2 藥品與試劑

AZ、AZ 甲醇酯、AZ 乙醇酯、AZ 苯酚酯、AZ 對氯苯酚酯、AZ 對甲基苯酚酯（江西中醫藥大學藥物化學學科組提供，批號：20121208、20121225、20121230、20130110、20130112、20130120，純度：均大于99%）；非諾貝特片（上海黃海制藥有限責任公司，批號：20110921，規格：每片0.1 g）；血清總膽固醇（TC）、高脂血癥（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測定試劑盒（美國Siemens公司）；SOD測定試劑盒（批號：20120917）、MDA 測定試劑盒（批號：20120920）、CAT 測定試劑盒（批號：20120920）均購自南京建成生物研究所。

1.3 動物

SD大鼠90只，♀♂各半，體質量180～220 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2009-0004。

1.4 飼料

高脂飼料的配方：基礎飼料87.3%（由江西中醫藥大學動物中心提供），豬油10%、膽固醇2%、膽鹽0.5%、丙基硫氧嘧啶0.2%（上海藍季科技有限公司）。

2 方法

2.1 建模與分組[6-8]

取大鼠90只，實驗前適應性飼養1周，隨機取10只作為空白對照組，♀♂分籠飼養，每籠5 只，給予普通飼料喂養；剩余80只大鼠給予高脂飼料喂養4周，禁食12 h（不禁水）后靜脈取血分離血清，于自動生化分析儀上測定血清生化指標（TC、TG、LDL-C、HDL-C），根據血脂水平將大鼠隨機分為模型組、AZ（83 mg/kg）組、AZ 甲醇酯（86.3 mg/kg）組、AZ 乙醇酯（89.3 mg/kg）組、AZ 苯酚酯（99.5 mg/kg）組、AZ 對氯苯酚酯（106.8 mg/kg）組、AZ對甲基苯酚酯（102.5 mg/kg）組和陽性對照（非諾貝特100 mg/kg）組，每組10只，♀♂分籠飼養，每籠5只。

2.2 給藥

空白對照組大鼠一直灌胃給予普通飼料，從第5周開始在其他組大鼠給藥時灌胃給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉生理氯化鈉溶液；其余各組大鼠持續給予高脂飼料，從第5 周（29 d）開始，各給藥組大鼠分別灌胃給予相應藥物，模型組大鼠灌胃給予等體積0.5%羧甲基纖維素鈉生理氯化鈉溶液。給藥周期為2周（第5、6周），每日1次，自由攝食飲水。每周稱體質量2次，根據體質量調整給藥劑量。

2.3 指標檢測

給藥期間，密切觀察記錄各組大鼠的行為活動、飲食、排便和排尿情況。末次給藥后禁食12 h 靜脈取血，采用自動生化分析儀測定血清生化指標，測定試劑盒測定血清中SOD、MDA、CAT活性變化。

2.4 統計學分析

3 結果

3.1 大鼠高脂血癥模型的鑒定

與空白對照組比較，高脂飼料飼養的大鼠血清中TC、TG、LDL-C 含量均明顯升高，HDL-C 含量明顯降低（P＜0.01），表明大鼠高脂模型建立成功。

3.2 AZ衍生物對高脂血癥大鼠基本情況和體質量的影響

給藥期間，各組大鼠毛色光潔、行為活動、食欲及二便情況均正常，未出現異常體征，未發生自然死亡。與空白對照組比較，其余各組大鼠體質量差異均無統計學意義（P＞0.05），具體結果見表1。

表1 各組大鼠體質量變化（，g，n＝10）Tab 1 The changes of body weight of rats in each group（，g，n＝10）

表1 各組大鼠體質量變化（，g，n＝10）Tab 1 The changes of body weight of rats in each group（，g，n＝10）

3.3 AZ衍生物對高脂血癥大鼠血清生化指標的影響

與模型組比較，AZ 組、AZ 甲醇酯組、AZ 乙醇酯組、AZ 苯酚酯組、AZ對氯苯酚酯組、AZ對甲基苯酚酯組、陽性對照組大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量均降低，差異具有統計學意義（P＜0.01）；各AZ 組大鼠血清中HDL-C 含量差異無統計學意義（P＞0.05），陽性對照組大鼠血清中HDL-C 含量明顯增加，差異具有統計學意義（P＜0.01）。結果表明，AZ、AZ 甲醇酯、AZ乙醇酯、AZ苯酚酯、AZ對氯苯酚酯和AZ對甲基苯酚酯對高脂血癥模型大鼠有降低血清TC、TG和LDL-C含量的作用，但對增加血清HDL-C 的效果不明顯。AZ 降低大鼠血清TC、TG和LDL-C含量的作用與非諾貝特相當，差異無統計學意義（P＞0.05）。AZ衍生物降低大鼠血清TC、TG和LDL-C含量的作用與AZ相當，差異無統計學意義（P＞0.05）。各組大鼠血清生化指標的比較見表2。

3.4 AZ 衍生物對高脂血癥大鼠血清中SOD、MDA、CAT 活性的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠血清中SOD、CAT活性均降低，MDA 活性升高，差異具有統計學意義（P＜0.01）。與模型組比較，各AZ 組和陽性對照組大鼠血清中SOD、CAT 活性均升高，差異具有統計學意義（P＜0.01）；各AZ組大鼠血清中MDA 活性均降低，差異具有統計學意義（P＜0.01）；陽性對照組大鼠血清中MDA 活性差異無統計學意義（P＞0.05）。各組大鼠血清中SOD、MDA和CAT活性比較見表3。

表2 各組大鼠血清生化指標的比較（，n＝10）Tab 2 Comparison of biochemical indicators of rats in each grou（，n＝10）

表2 各組大鼠血清生化指標的比較（，n＝10）Tab 2 Comparison of biochemical indicators of rats in each grou（，n＝10）

與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

表3 各組大鼠血清中SOD、MDA 和CAT 活性比較（，n＝10）Tab 3 Comparison of SOD，MDA and CAT activity in serum of rats in each grou（，n＝10）

表3 各組大鼠血清中SOD、MDA 和CAT 活性比較（，n＝10）Tab 3 Comparison of SOD，MDA and CAT activity in serum of rats in each grou（，n＝10）

與空白對照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

4 討論

心腦血管疾病及高血脂是近年來威脅人類生命的主要疾患，預防心腦血管疾病及降血脂藥物的研制一直是醫藥科技工作者關注的熱點，大量流行病學、病理學觀察及臨床干預研究表明，血脂水平升高是心腦血管疾病的主要獨立危險因素。高脂血癥是誘發心血管病和動脈粥樣硬化的重要因素之一，而動脈粥樣硬化和高血黏度是腦血管病和冠心病的首要誘因。當血清LDL-C 濃度升高時，動脈壁內脂質特別是膽固醇酯增多，沉積到一定程度時可引起中膜平滑肌組織大量增殖，促進動脈粥樣硬化的發生、發展[9]。而HDL-C被稱為血管清道夫，能將外圍組織和血液中的膽固醇運送至肝臟進行代謝，具有抗動脈粥樣硬化作用。

對于本文各衍生物的給藥劑量的確認：首先AZ作為全新結構的先導化合物，亦可看作對氯苯氧異丁酸結構改造而來，故選用藥物對氯苯氧異丁酸衍生物氯貝特為標準等摩爾質量換算出給藥劑量；其次前期實驗證明AZ的給藥劑量83 mg/kg（擬定臨床給藥劑量的10 倍）也有較好的降血脂活性，其各衍生物則也以這個劑量等摩爾質量換算出來[4]。本實驗結果表明，AZ、AZ 甲醇酯、AZ 乙醇酯、AZ 苯酚酯、AZ 對氯苯酚酯、AZ 對甲基苯酚酯能顯著降低高脂血癥模型大鼠的血清TC、TG和LDL-C含量水平，但對增加血清HDL-C的效果不明顯，原因可能為需要更高劑量和（或）更長的實驗周期才能明顯增加血清HDL-C含量。

SOD 是體內最重要的抗氧化酶之一，被譽為自由基的清除劑，其通過抑制過氧化脂質反應，減少MDA 和自由基的產生。MDA 為氧自由基氧化細胞膜上磷脂形成的脂質過氧化物的穩定存在形式，可反映機體內脂質過氧化的程度。當血脂升高時，氧自由基生成增加，脂質過氧化作用增強，MDA產生增多，SOD 消耗增多，活力降低，造成氧自由基堆積。CAT是清除H2O2的主要酶，減少自由基的生成。其與SOD 發生協同作用減少氧自由基的產生，防止脂質過氧化對機體造成的損害。而本實驗中5 個AZ 衍生物能顯著升高血清SOD、CAT活性，顯著降低MDA 活性，由此可見，AZ 衍生物可增強機體抗氧化能力，其進一步提示AZ衍生物的降血脂作用可能與其增強抗氧化活力、預防脂質過氧化有關。

[1]趙士魁，周偉澄.降血脂藥物研究進展[J].中國醫藥工業雜志，2009，40（7）：536.

[2]Chen XB，Xu J，Zhao P，et al.Lipid lowering activity of（E）-3-[4-[2-（4-chlorophenoxy）-2-methylpropanoyloxy]-3-methoxyphenl]acrylic acid（AZ）in hyperlipidemic rats[C].The International Conference on Bioengineering：Chemistry and Environment Science，2011：7 664.

[3]汪鳳華，許軍，唐禎，等.氯苯氧異丁酸甲氧基苯丙烯酸酯代謝物在大鼠體內的藥動學[J].中國醫院藥學雜志，2012，32（11）：844.

[4]趙坡，許軍，陳小兵，等.對氯苯氧異丁酸甲氧基苯丙烯酸酯的小鼠急性毒性和大鼠長期毒性[J].中國藥理學與毒理學雜志，2011，25（4）：391.

[5]唐禎，許軍，徐彭，等.阿魏酸結構改造新化合物對大鼠高脂血癥的影響及機制[J].時珍國醫國藥，2013，24（6）：1 369.

[6]吳栩，韋偉標，劉少斌.高脂血癥大鼠模型4 種造模方法的篩選及優化[J].動物醫學進展，2013，34（9）：75.

[7]朱竟赫，趙金明，秦文艷，等.高脂血癥實驗動物模型研究概述[J].實驗動物科學，2012，29（2）：48.

[8]劉雪梅，吳符火.幾類高脂血癥動物模型的比較[J].中西醫結合學報，2004，2（2）：132.

[9]傅穎，梅松，陳建國，等.茶多酚對高脂大鼠體重及血清中脂代謝水平的影響[J].中國衛生檢驗雜志，2009，19（11）：2 506.