羧甲基玉米朊阿司匹林腸溶微丸的制備及體外釋放度考察

張 祥，孫亞楠，丁 啟，劉 力，魯傳華（安徽中醫藥大學藥學院，合肥 230031）

溶材料有蟲膠、鄰苯二甲酸乙酸纖維素、丙烯酸樹脂等[2]。阿司匹林通過抑制花生四烯酸代謝過程中的環氧化酶，使前列腺素合成減少而產生強大的解熱鎮痛抗炎作用，但其最大的缺點是對胃黏膜有刺激作用，常使患者出現惡心、嘔吐，甚至

腸溶制劑是利用腸溶材料在低pH下不溶、在高pH下可溶的特性建立的一種給藥系統[1]，通常是在口服制劑外部包裹腸溶性材料制得。腸溶制劑能防止某些藥物對胃黏膜的刺激，增加酸敏感藥物的穩定性，延緩藥物吸收時間等。常用的腸潰瘍、出血的副作用[3]。為了克服這一缺點，阿司匹林通常制成腸溶制劑[4]。玉米朊（Zein）或稱玉米醇溶蛋白，是一種天然的生物可降解材料，在酸和弱堿環境下均不溶解。羧甲基玉米朊（CM-Zein）是筆者用羧甲基對Zein結構進行修飾后制得的產品，其可在pH＞4.5的水中溶解，符合腸溶材料的特點。本研究利用自制羧甲基玉米朊的腸溶性質，探索采用擠壓滾圓法制備阿司匹林腸溶微丸，并與自制阿司匹林微丸作比較，考察其體外釋放行為；同時以大鼠為實驗動物，以阿司匹林微丸為參比制劑，考察其體內藥動學特征。

1 材料

1.1 儀器

ALC-210.4分析天平（德國Sartorius公司）；擠出滾圓機（重慶英格制藥機械有限公司）；ZRS-8G智能溶出儀（天津大學無線電廠）；LC-20A型高效液相色譜（HPLC）儀（日本島津公司）；TGL-16C高速離心機（上海安亭科學儀器廠，離心半徑：6.2 cm）；WH-3微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；金尼克超聲清洗器（合肥金尼克機械制造有限公司）。

1.2 藥品與試劑

阿司匹林原料藥（批號：09112025，純度：99.5%）和阿司匹林對照品（批號：20120616，純度：99.9%）均由山東新華制藥廠提供；水楊酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：20120713，純度：＞99%）；羧甲基玉米朊、阿司匹林腸溶微丸（批號：20130301，規格：每丸3 mg）、阿司匹林微丸（淀粉微丸，批號：20130401，規格：每丸3 mg）均由安徽中醫藥大學藥劑實驗室自制；甲醇為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

1.3 動物

2 方法與結果

2.1 微丸的制備

先將過100目的阿司匹林原料藥粉末和羧甲基玉米朊的粉末按1 ∶2質量比混合，加入適量的4%的乙醇溶液為黏合劑，充分攪拌均勻制成軟材；將混合好的軟材倒入擠出機中，在擠出螺桿推力作用下濕料經孔板孔徑擠出，此時軟材呈直徑均勻的細條狀；將擠出的條狀軟材倒入滾圓機中，在高速（1 100 r/min）旋轉的齒板上，條狀顆粒滾圓成圓球；將制備好的濕顆粒在60 ℃下干燥，分篩，直至獲得粒徑約1 mm的微丸，即阿司匹林腸溶微丸[5]。另以淀粉代替羧甲基玉米朊按上述方法制備阿司匹林微丸。

2.2 體外分析方法[6]

采用HPLC法。色譜條件：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（50 ∶50），流速為1.0 ml/min；測定波長為276 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為20 μl。該色譜條件下，阿司匹林峰面積（A）對質量濃度（c）的標準曲線方程為：A＝8 711.8c－2 167.2（r＝0.999 9，n＝7），阿司匹林檢測質量濃度的線性范圍為1.0～100 μg/ml。

2.3 體外釋放度的測定

2.3.1 釋放介質的選擇。參照2010年版《中國藥典》二部附錄ⅩD第二法腸溶制劑中的（二）法[7]，選擇0.1 mol/L鹽酸溶液（即人工胃液）900 ml為前2 h的釋放介質，pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液（即人工腸液）900 ml為2 h后的釋放介質，可滿足漏槽條件。

2.3.2 測定條件。采用溶出度測定法（2010年版《中國藥典》二部附錄ⅩC第二法）測定阿司匹林腸溶微丸和阿司匹林微丸的體外釋放度[7]，轉速為100 r/min，溫度為（37±0.5）℃。分別于0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h取樣5 ml，同時在溶出杯中補入同溫同體積的新鮮介質。取樣液經0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液20 μl進樣測定其中藥物含量，計算累積釋放度。

2.3.3 體外釋放度測定結果。阿司匹林腸溶微丸在人工胃液中幾乎都不釋放，而在人工腸液中立即開始釋放且2 h內都能釋放完全。阿司匹林微丸在人工胃液中就開始釋放。2種制劑的體外釋放試驗結果見表1。

表1 2種制劑的體外釋放試驗結果（%）Tab 1 Results ofin vitro release test of 2 kinds of preparations（%）

2.4 血漿中水楊酸含量測定方法

由于阿司匹林口服后在體內很快轉化為其活性代謝產物水楊酸，故在進行阿司匹林的血藥濃度研究時大多測定血漿中水楊酸的濃度[8]。

2.4.1 色譜條件。色譜柱：Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm）（加C18保護柱）；流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（50∶50），流速：1.0 ml/min；測定波長：303 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μl。在該色譜條件下，理論板數以水楊酸峰計應不低于2 000。

2.4.2 血漿樣品的處理。精密量取大鼠血漿0.2 ml，置于2.0 ml具塞離心管中，加入0.6 ml甲醇沉淀蛋白，渦旋3 min，10 000 r/min離心10 min，取上清液置于1.5 ml具塞離心管中，12 000 r/min離心10 min，取上清液，進樣20 μl，記錄色譜。

2.4.3 方法專屬性考察。精密稱取水楊酸對照品10 mg，用1%冰醋酸甲醇溶液溶解，配成100 μg/ml水楊酸對照品溶液。取對照品溶液、空白血漿、空白血漿+對照品（50 μg/ml）、血漿樣品（釋放4 h后），處理后進樣測定，記錄色譜。結果顯示，水楊酸的保留時間為8.7 min左右，分離度滿足測定要求，血漿中的內源性物質對水楊酸的測定無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.空白血漿；C.空白血漿+對照品；D.血漿樣品；1.水楊酸Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.blank plasma；C.blank plasma+substance control；D.plasma sample；1.hydroxybenzoic acid

2.4.4 線性關系與定量限考察。精密稱取水楊酸對照品適量，用甲醇溶解后定容，配制成一定質量濃度的貯備液。取貯備液稀釋制成質量濃度分別為0.2、1.0、2.0、10.0、20.0、100.0、200.0 μg/ml的對照品系列溶液。精密量取空白血漿100 μl，共計7份，分別置于2.0 ml的具塞離心管中，依次加入水楊酸對照品系列溶液100 μl，使水楊酸的血藥濃度分別為0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0 μg/ml，處理后進樣測定，記錄色譜。以峰面積（A）為縱坐標、質量濃度（c）為橫坐標，進行線性回歸分析，得標準曲線方程為：A＝8 167.8c+2 439.6（r＝0.999 9）。結果表明，血漿溶液中水楊酸檢測質量濃度的線性范圍為0.1～100.0 μg/ml，定量限為0.05 μg/ml。

2.4.5 回收率試驗。方法回收率：取大鼠空白血漿100 μl，加入水楊酸對照品系列溶液100 μl，制成水楊酸質量濃度分別為0.5、5.0、50.0 μg/ml的樣品溶液，每一質量濃度配制5份，處理后進樣測定，記錄峰面積，以測得值與實際值之比計算方法回收率，以測得值與相同質量濃度對照品測得值之比計算提取回收率。結果方法回收率平均值為（100.71±0.74）%，RSD＝1.49%（n＝3）；提取回收率平均值為（98.28±0.55）%，RSD＝1.58%（n＝3）。

2.5 藥動學考察

取大鼠隨機分為受試制劑（阿司匹林腸溶微丸）組和參比制劑（阿司匹林微丸）組，每組5只，服藥前禁食12 h，稱質量后根據人臨床常用劑量換算動物給藥劑量，以15 mg/kg灌胃給予相應藥物。于給藥前和給藥后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、18.0、24.0、36.0、48.0 h眼眶取血0.4 ml，置于1.5 ml肝素化EP管內，3 000 r/min離心15 min，取上層澄清血漿，－20 ℃冷凍放置，分別按“2.4.2”項下方法處理后，進樣測定，計算血藥濃度，繪制藥-時曲線，見圖2。

圖2 2種制劑在大鼠體內的藥-時曲線（n＝5）Fig 2 Drug concentration-time curves of 2 kinds of preparations in rats（n＝5）

利用3p97軟件對血藥濃度數據進行分析，經自動擬合后，受試制劑和參比制劑均以二室模型擬合最佳，選擇權重均為1/C2。進行權重房室模型擬合，計算藥動學參數，并用SPSS 17.0統計學軟件進行t檢驗，藥動學參數結果見表2。

經計算，阿司匹林腸溶微丸的相對生物利用度為111.41%，表明阿司匹林腸溶微丸生物利用度與參比制劑相當。

3 討論

市售腸溶片均是采用腸溶薄膜包衣來實現其腸溶性。本研究采用擠壓滾圓法制備微丸，最終在體外釋放試驗中達到腸溶制劑的要求。另外羧甲基玉米朊不會吸水膨脹而崩解，在胃內會保持原微丸的形狀，在腸內可因堿性環境而緩慢溶解釋放藥物。

表2 2種制劑在大鼠體內的藥動學參數（，n＝5）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in rats（，n＝5）

表2 2種制劑在大鼠體內的藥動學參數（，n＝5）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in rats（，n＝5）

與參比制劑比較：＊P＜0.05vs.reference preparation：＊P＜0.05

由圖2可知，參比制劑在灌胃后很快就釋放藥物，0.5 h在血液中即測到較高濃度的藥物，4 h左右達到最高，之后血藥濃度開始降低，表明阿司匹林微丸灌胃后基本在胃和小腸中被吸收。受試制劑在灌胃后4 h內釋放很少，4 h后才開始緩慢釋放，并在12 h左右達到最高血藥濃度，之后血藥濃度緩慢降低；整個血藥濃度上升和降低的過程比參比制劑緩慢，且最高血藥濃度低于參比制劑，表明阿司匹林腸溶微丸在胃里釋放很少，幾乎不釋放，而在腸道內能較快釋放，相對于參比制劑有一定緩釋性。

從藥動學參數結果來看，與參比制劑比較，受試制劑的t1/2β、tmax、AUC0-∞均明顯增加，cmax明顯減小（P＜0.05），再次表明阿司匹林腸溶微丸具有一定緩釋性。綜上說明，本實驗室研發的羧甲基玉米朊可以作為腸溶性輔料，具有一定的開發價值。

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