雙波長分光光度法測定非等比例多組分制劑中的間苯二酚含量Δ

金 銳，曾蔚欣，楊 平，段松冷，劉俊麗，田佳懿，孫路路（首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院藥劑科，北京 100038）

間苯二酚是臨床常用的殺菌止癢藥物，具有一定毒性，常與苯酚、水楊酸、苯甲酸等藥物聯合制成外用洗劑，例如復方間苯二酚洗劑、復方薄荷腦洗劑、復方水楊酸擦劑等。2010年版《中國藥典》收載間苯二酚的含量測定方法為溴量法[1]，其也成為《中國醫院制劑規范》收錄的復方間苯二酚洗劑的質量控制方法。但該法操作煩瑣，溴滴定液因穩定性差也較少使用，且該法最終只能得到間苯二酚與水楊酸的總量[2]，故不適合醫院制劑準確、快速、高效檢驗的要求。近幾年，雙波長分光光度法、高效液相色譜法等新方法逐漸用于含間苯二酚的多組分復方制劑的含量測定與質量控制[3-5]，并取得了良好效果。但是，此類研究大多涉及2種等比例物質的同時測定，目前缺少針對非等比例情況的研究。本研究選擇北京市《醫療單位制劑規程》收錄的復方間苯二酚洗劑（處方組成：間苯二酚50 g、水楊酸10 g、蓖麻油50 ml，加乙醇至1 000 ml）[6]，采用雙波長分光光度法，對其中的主要成分間苯二酚進行含量測定研究，并探討非等比例情況下的一些特殊問題。

1 材料

1.1 儀器

8453E紫外-可見分光光度計（美國惠普公司）。

1.2 藥品與試劑

復方間苯二酚洗劑（本院制劑室，批號：20130723、20130724、20130725，含5%間苯二酚、1%水楊酸，包裝規格：每瓶30 ml，密封避光）；間苯二酚（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20120427，分析純）；水楊酸（鎮江前進化工廠，批號：121003，藥用級）；蓖麻油（湖南爾康制藥股份有限公司，批號：000220121101，藥用級）；95%乙醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 各組分吸收光譜的測定及波長選擇

依照處方比例[間苯二酚-水楊酸（5 ∶1）]，分別精密稱取間苯二酚、水楊酸，用95%乙醇分別配制成質量濃度為25、5 μg/ml的純標準品液；精密量取蓖麻油，依照處方組成等比例稀釋，配制含量為5%的純品液并稀釋2 000倍。在190～400 nm波長范圍內掃描，得紫外吸收光譜圖。結果，間苯二酚在276、282 nm波長處具有最大吸收，水楊酸在303 nm波長處具有最大吸收，而蓖麻油成分則對以上波長范圍內兩者的測定影響極小。由于水楊酸在282 nm波長處的吸光度值相對較大，且與320 nm波長處的吸光度值形成良好的對稱關系，故選擇282 nm作為間苯二酚的測定波長，選擇320 nm作為參比波長。光譜圖見圖1。

圖1 紫外吸收光譜圖Tab 1 UV absorption spectrum

2.2 標準曲線的制備

精密稱取間苯二酚0.500 g、水楊酸0.100 g，置于100 ml量瓶中，加95%乙醇適量溶解，繼續加至刻度，搖勻，制成對照品初液。分別精密量取此液0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 ml，置于100 ml量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻，制成含間苯二酚分別為15、20、25、30、35、40 μg/ml的對照品液。依照《中國藥典》紫外-可見分光光度法[1]，以空白溶劑（95%乙醇）為對照，分別在282、320 nm波長處測定吸光度，計算間苯二酚吸光度差值ΔA＝A282－A320。以此吸光度差值為橫坐標（x），以間苯二酚質量濃度為縱坐標（y）作標準曲線，得到線性回歸方程為：y＝68.726 8x－2.992 9（r＝0.999 2）。結果表明，間苯二酚檢測質量濃度范圍為15～40 μg/ml。

2.3 回收率試驗

依照處方比例，精密稱取間苯二酚0.500 g、水楊酸0.100 g，精密量取蓖麻油0.5 ml，置于100 ml量瓶中制成供試品溶液。精密量取此溶液并稀釋至間苯二酚在20～30 μg/ml范圍內（標準含量的80%、100%和120%）。以空白溶劑為對照，分別在282、320 nm波長處測定吸光度，計算吸光度差值。將吸光度差值數據代入標準曲線，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝3）Tab 1 Results of recovery tests（n＝3）

2.4 精密度試驗

依照處方比例，精密稱取并配制間苯二酚占標示量100%的供試品溶液，平行取6份溶液，以空白溶劑為對照，分別在282、320 nm波長處測定吸光度，計算間苯二酚含量。結果顯示，間苯二酚含量變化很小，RSD＝0.46%（n＝6）。

2.5 穩定性試驗

依照處方比例，精密稱取并分別配制間苯二酚占標示量80%、100%和120%的供試品溶液，密閉，陰涼避光處保存。以空白溶劑為對照，分別在保存1、2、4、8、12、24 h后于282、320 nm波長處測定吸光度，計算間苯二酚含量。結果顯示，間苯二酚含量值變化很小，RSD＝0.61%（n＝6）。

2.6 樣品含量測定

精密量取3個不同批次的復方間苯二酚洗劑1 ml，置于100 ml量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻。精密量取此液5 ml，置于100 ml量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻，制成供試品溶液。同時，采用相同溶劑，配制含間苯二酚25 μg/ml、水楊酸5 μg/ml的對照品溶液。以空白溶劑為對照，分別在282、320 nm波長處測定供試品溶液吸光度AS282、AS320和對照品溶液吸光度AR282、AR320，計算吸光度差值ΔAS＝AS282－AS320和ΔAR＝AR282－AR320，按公式c＝ΔAS/ΔAR×5.0計算間苯二酚含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（%）Tab 2 Results of content determination of samples（%）

3 討論

雙波長分光光度法是藥品檢驗和環境分析中常用的定量分析方法，具有簡便、靈敏、準確的特點，常用于同時測定兩種物質的含量。有文獻顯示，該方法已經用于含等摩爾比間苯二酚與水楊酸（1 ∶1）制劑的定量分析[3]。但是，本研究涉及的制劑中，間苯二酚與水楊酸的摩爾比為5 ∶1，其定量分析存在特殊性：其一，由于2010年版《中國藥典》推薦的最佳吸光度值范圍為0.3～0.7，試驗證明難以將兩者的吸光度值同時調整至最佳范圍。例如，以間苯二酚的最大吸收波長276 nm和水楊酸的最大吸收波長303 nm為例，當間苯二酚（30 μg/ml）吸光度值為0.57時，水楊酸（6 μg/ml）吸光度值僅有0.17；而增大質量濃度并使水楊酸（12 μg/ml）吸光度值為0.33時，間苯二酚（60 μg/ml）的吸光度值就超過了1.11；而二者疊加后的吸光度值會更大。因此難以同時對本制劑濃度配比下的間苯二酚與水楊酸進行測定。其二，當水楊酸吸光度值達到0.3以上時，5倍于其的間苯二酚吸收光譜產生了一定的拉伸效應，并在303 nm波長處保持著大于0.01且波動增長的吸光度值，可能對水楊酸的測定產生影響。其三，間苯二酚具有一定毒性，可經皮膚吸收而中毒，需要在使用過程中進行含量控制。因此，一般選擇間苯二酚作為復方間苯二酚洗劑的含量測定成分。

在測定波長的選擇方面，276 nm與282 nm均為間苯二酚的最大吸收波長，均可作為測定波長。但是，由于水楊酸濃度較低且其最大吸收波長在303 nm附近，若選擇282 nm會使得水楊酸的吸光度值更大且更接近對稱中心（303 nm），而減小隨機誤差帶來的影響并增加對稱參比的可信度。故選擇282 nm作為測定波長、320 nm為參比波長，試驗證明兩者吸光度差值與間苯二酚質量濃度的線性關系良好。理論上，在保證間苯二酚吸光度值在0.3～0.7內的基礎上，任何增加水楊酸吸光度值的方法均可以提高測定的準確率，包括調整測定波長、按比例提高整體濃度等。本試驗結果顯示，選擇間苯二酚在282、320 nm波長處采用雙波長分光光度法進行復方間苯二酚洗劑（外用制劑）的含量測定，操作簡單，結果滿意。

另外需要注意的是，《中國醫院制劑規范》和北京市《醫療單位制劑規程》中均收載有“復方間苯二酚洗劑”，但是二者的處方組成卻不相同。前者主要由間苯二酚、苯酚和硼酸等組成，已有采用分光光度法進行含量測定的報道[5，7]；而后者則由間苯二酚、水楊酸等組成，尚缺少相關研究。因此，本研究對此是一個有益的補充。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：370、附錄Ⅵ.

[2]顧麗紅，孔祥瑞，華拯敏，等.復方間苯二酚搽劑的制備及應用[J].中國藥房，2002，13（9）：531.

[3]方維軍，陳堅，吳芳.雙波長分光光度法測定復方薄荷腦洗劑的含量[J].中國醫院藥學雜志，2001，21（12）：727.

[4]商國美，俞佳.反相高效液相色譜法同時測定復方水楊酸洗劑中水楊酸和間苯二酚的含量[J].中國現代應用藥學雜志，2005，22（1）：74.

[5]沈德榮.雙波長分光光度法測定復方間苯二酚洗劑中間苯二酚的含量[J].中國現代醫生，2008，46（34）：85.

[6]北京市衛生局.醫療單位制劑規程[S].1984：104.

[7]陳軍，陳燕華，刁雨輝，等.雙波長分光光度法測定復方間苯二酚洗劑中間苯二酚的含量[J].中國藥房，2003，14（6）：362.