復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中鹽酸異丙嗪和氯氮的有關(guān)物質(zhì)分析

陳曉英（福建生物工程職業(yè)技術(shù)學院，福州 350002）

復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊為復方降壓藥，是多組分復方制劑，其主藥成分為：地巴唑、鹽酸異丙嗪、磷酸氯喹、硫酸胍生、維生素B6、氯化鉀、利血平、氯氮、氫氯噻嗪、乳酸鈣、維生素B1、三硅酸鎂。國內(nèi)文獻多見其各主成分的含量測定[1-5]，而未見對其有關(guān)物質(zhì)的分析。筆者對該制劑的有關(guān)物質(zhì)進行了初步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與高慧欽[5]報道相似，鹽酸異丙嗪和氯氮?性質(zhì)不太穩(wěn)定。為此，本研究采用高效液相色譜（HPLC）法對該制劑中鹽酸異丙嗪和氯氮產(chǎn)生的雜質(zhì)進行了分析，并對市售的不同企業(yè)的51批產(chǎn)品進行了分析檢測，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

1100型液相色譜儀、6400 LC/MS（液質(zhì)聯(lián)用）儀（美國Agilent公司）。

1.2 藥品與試劑

市售復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊（廠家及批號見表1，規(guī)格：均為每粒0.25 g）；鹽酸異丙嗪原料藥（批號：090214，純度：99.2%）、氯氮原料藥（批號：171229-200603，純度：99.92%）均由福建省藥品檢驗所提供；磷酸二氫銨、磷酸、鹽酸均為分析純，甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A：0.05 mol/L磷酸二氫銨（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.2），流動相B：甲醇（梯度洗脫，0～20 min，60%A；20～50 min，60%A漸降至15%A；50～55 min，15%A；56～60 min，60%A），流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫；進樣量：10 μl。

2.2 專屬性試驗

鹽酸異丙嗪結(jié)構(gòu)中含有吩噻嗪環(huán)，容易被氧化成醌型化合物，對光敏感，光照下吩噻嗪類化合物更易被氧化。根據(jù)此特性，將鹽酸異丙嗪原料藥同時進行光照（4 500 lx）和高溫（60 ℃）處理，處理后的樣品用0.1 mol/L鹽酸（以下簡稱鹽酸）溶解，制成0.5 mg/ml的溶液（a）。

取約2粒膠囊樣品（批號：20111204）細粉于90 ℃加熱處理后，置于25 ml棕色量瓶中用鹽酸溶解并稀釋至刻度，微孔濾膜濾過，作為破壞后供試品溶液（c）。

取約2粒膠囊樣品（批號：20111204）細粉置于25 ml棕色量瓶中，用鹽酸溶解并稀釋至刻度，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液（d）。

取上述溶液進樣，記錄色譜圖見圖1。

根據(jù)圖1可知，在破壞試驗中，無論是鹽酸異丙嗪原料藥還是膠囊樣品，均存在1個保留時間約為5.4 min的雜質(zhì)及主峰異丙嗪后面的2個雜質(zhì)峰。

2.3 空白干擾試驗

圖1 高效液相色譜圖A.溶液a；B.溶液b；C.溶液c；D.溶液d；E.溶液e；1.異丙嗪；2.氯氮?；3.異丙嗪雜質(zhì)Ⅰ；4.異丙嗪雜質(zhì)Ⅱ；5.異丙嗪雜質(zhì)Ⅲ；6.化合物Ⅱ；7.化合物ⅠFig 1 HPLC chromatogramsA.solution a；B.solution b；C.solution c；D.solution d；E.solution e；1.promethazine；2.chlordiazepoxide；3.promethazine impurity Ⅰ；4.promethazine impurity Ⅱ；5.promethazine impurity Ⅲ；6.compoundⅡ；7.compound Ⅰ

圖2 化合物Ⅱ的液相-質(zhì)譜圖（ESI負離子）Fig 2 LC/MS spectrum of compound Ⅱ（ESI negative ion）

經(jīng)調(diào)查，各不同廠家生產(chǎn)的該制劑的配方和工藝基本相似，按照該品配方制備缺主藥成分鹽酸異丙嗪和氯氮的陰性樣品，按照與制備供試品溶液相同的方法制備成溶液e，進樣后記錄色譜圖。結(jié)果表明，在該色譜條件下陰性樣品對主成分測定未見干擾，見圖1E。

2.4 檢測限與精密度試驗

2.4.2 精密度：取溶液d連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果鹽酸異丙嗪和氯氮主峰峰面積的RSD分別為0.73%、0.52%（n＝6）。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取溶液d在室溫下放置，分別在0、2、4、6、8 h取樣測定，記錄峰面積。結(jié)果鹽酸異丙嗪和氯氮主峰峰面積的RSD分別為1.69%、1.09%（n＝5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 有關(guān)物質(zhì)檢查方法與結(jié)果

取膠囊2粒，除去囊殼，細粉置于25 ml棕色量瓶中用鹽酸溶解并稀釋至刻度，微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。按“2.1”項色譜條件，進樣10μl，記錄色譜圖，采用雜質(zhì)與各自主成分面積歸一化法計算雜質(zhì)的量。

10個企業(yè)51批市售膠囊樣品經(jīng)上述方法測定，其結(jié)果顯示，鹽酸異丙嗪的雜質(zhì)含量均在1%以下，且各廠家的產(chǎn)品中該雜質(zhì)的量都相對比較穩(wěn)定；而氯氮的雜質(zhì)即化合物Ⅱ的量普遍偏高，在1%以下的約占22%、1%～3%約占33%、3%以上的約占45%，最高的一批次甚至接近8%，詳見表1。

表1 51批市售膠囊樣品雜質(zhì)檢查結(jié)果Tab 1 Results of impurity detection in 51 batches of commercially available capsule

續(xù)表1Contined tab 1

3 討論

市售復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中鹽酸異丙嗪所產(chǎn)生的雜質(zhì)，未見有文獻報道其歸屬，而且在《中國藥典》[6]以及《美國藥典》[8]的鹽酸異丙嗪的質(zhì)量標準中均采用薄層色譜自身對照法進行有關(guān)物質(zhì)檢查，同時也未指明雜質(zhì)歸屬。因此，復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中鹽酸異丙嗪所產(chǎn)生的雜質(zhì)歸屬有待進一步研究。

根據(jù)初步原因排查，氯氮?的雜質(zhì)量普遍偏高可能與原料藥的質(zhì)量有關(guān)，但具體原因有待進一步研究。另外，氯氮如何轉(zhuǎn)化成其氧化物（化合物Ⅱ）也未見報道，需要進一步探討。

綜上，本方法可用于分析復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中鹽酸異丙嗪和氯氮產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)。

[1]鄧富良，饒均明，周平，等.HPLC測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中五種成分的含量[J].中國藥科大學學報，2004，35（5）：446.

[2]修虹.HPLC法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中利血平的含量[J].海峽藥學，2011，23（12）：63.

[3]陳秀琳.HPLC法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中硫酸胍生、磷酸氯喹、維生素B1和維生素B6的含量[J].中國藥品標準，2010，11（6）：453.

[4]田寶勇，劉英華，楊曉華，等.火焰原子吸收法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中氯化鉀含量[J].河北科技大學學報，2010，31（5）：406.

[5]高慧欽.復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊工藝改進和質(zhì)量研究[D].天津：天津大學，2009：1-53.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1 026.

[8]The United States Pharmacopeial Convention.USP32/NF27[S].Washington D.C.：The United States Pharmacopeial Convention，Inc.，2009：3 405.