銀花清咽片的穩定性研究

孫 艷，徐風華，王歡歡（解放軍總醫院藥品保障中心，北京 100853）

銀花清咽方是解放軍總醫院臨床應用的經驗方，處方含有連翹、金銀花、射干、玄參等8味中藥[1]，主治急、慢性咽炎。多年的臨床應用表明，該方起效快、療效確切，能明顯改善急、慢性咽炎的癥狀，縮短治療周期，并且無毒副作用[1]。為方便該方的臨床應用，我院制劑室將其制成薄膜衣片，前期已完成本品提取工藝、制備工藝和質量標準的初步研究，建立了君藥金銀花中綠原酸、木犀草苷和連翹中連翹苷、連翹酯苷A的含量測定方法。現根據2010年版《中國藥典》（二部）附錄中對薄膜衣片穩定性試驗的有關要求，對銀花清咽片在不同條件下的性狀、崩解時間和主要成分的含量變化進行考察，以期為確定銀花清咽片的有效期提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；AR2140型分析天平（美國Adventure 公司）；KQ 5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）；DP/30單沖壓片機（北京國藥龍立科技有限公司）；隔水式培養箱（上海一恒科學儀器有限公司）；SGSP-02型電熱恒溫隔水式培養箱（黃石恒豐醫療器械有限公司）

1.2 藥品與試劑

銀花清咽片（解放軍總醫院，批號：20130128、20130129、20130130，規格：0.5g/片）；綠原酸、木犀草苷、連翹苷、連翹酯苷A 對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110753-200413、111720-201106、110821-201112、111810-201304）；中性氧化鋁（國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20100511），乙腈（美國Fisher 公司，批號：1002041）；甲醇（美國Fisher 公司，批號：1001419）；冰醋酸（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20120808）均為分析純；水為重蒸去離子水。

2 方法與結果

2.1 含量測定

色譜條件和樣品制備方法參照文獻[2]。

2.1.1 色譜條件與系統適用性試驗（1）綠原酸。色譜柱：Venusil MP C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.4%磷酸（10∶90，V/V）；檢測波長：327nm；柱溫：25℃；流速：1ml/min。理論板數按綠原酸峰計算應不低于1000。（2）木犀草苷。色譜柱：ZorbaxSB（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈（A）-0.5%冰醋酸（B），梯度洗脫（0～15min，10%→18%A；＞15～30min，18%A；＞30～40min，18%→30%A；＞40～45min，30%→40%A）；檢測波長：350nm；柱溫：30℃；流速：1ml/min。理論板數按木犀草苷峰計算應不低于20000。（3）連翹苷。色譜柱：Agilent ZORBAX ODS（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（24∶76，V/V）；檢測波長：277nm；柱溫：30℃；流速：1ml/min。理論板數按連翹苷峰計算應不低于3000。（4）連翹酯苷A。色譜柱：AgilentZORBAXODS（250 mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.2%冰醋酸（15∶85，V/V）；檢測波長：330nm；柱溫：30℃；流速：1ml/min。理論板數按連翹酯苷A計算應不低于5000。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸、木犀草苷、連翹苷、連翹酯苷A對照品各適量，分別置于25ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解，定容，分別制成質量濃度依次為0.300、0.012、0.260和0.171mg/ml 的綠原酸、木犀草苷、連翹苷和連翹酯苷A對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備（1）綠原酸。取銀花清咽片30片，研細，精密稱取2.0g，置于50ml磨口三角瓶中，精密加入流動相[乙腈-0.4%磷酸（10∶90，V/V）]30ml，稱定質量，超聲處理（功率：250W，頻率：40kHz）30min，放冷，再次精密稱定，用流動相補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液過0.45μm微孔濾膜，即得。（2）木犀草苷。取樣品適量，研細，精密稱取2.0g，置于100ml磨口三角瓶中，精密加入70%乙醇50ml，稱定質量，超聲處理（功率：250W，頻率：40kHz）45min，放冷，再次精密稱定，用70%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液20 ml，蒸干，殘渣加70%乙醇定容至5ml量瓶中，經0.45μm微孔濾膜濾過，即得。（3）連翹苷。取樣品適量，研細，精密稱取4.0 g，置于100ml磨口三角瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定質量，超聲處理（功率：250W，頻率：40kHz）45min，放冷，再次精密稱定，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液30 ml，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5g 拌勻，加在中性氧化鋁柱（100～120目，3.0g，內徑：1cm）上，用70%乙醇100ml 洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用50%甲醇溶解，轉移至5ml 量瓶中，搖勻，經0.45μm 微孔濾膜濾過，即得。（4）連翹酯苷A。取樣品適量，研細，精密稱取4.0g，置于50ml 磨口三角瓶中，精密加入甲醇30ml，稱定質量，超聲處理（功率：250W，頻率：40kHz）30min，放冷，再次精密稱定，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液過0.45μm微孔濾膜，即得。

2.2 影響因素試驗[3-5]

2.2.1 高溫試驗 取樣品（批號：20130128，泡罩包裝）適量，置適宜的潔凈容器中，于60℃下放置10d，于第5天和第10天取樣，按穩定性重點考察項目（包括性狀，崩解時間，綠原酸、木犀草苷、連翹苷和連翹酯苷A的含量）進行檢測，結果見表1。

2.2.2 高濕試驗 取樣品（批號：20130128，泡罩包裝）適量，置恒濕密閉容器中，在25℃、相對濕度（90±5）%的條件下放置10d，于第5天和第10天取樣，按穩定性重點考察項目進行檢測，結果見表1。

2.2.3 強光照射試驗 取樣品（批號：20130128，泡罩包裝）適量，置裝有日光燈的光照箱或其他適宜的光照箱內，在照度（4500±500）lx 條件下放置10d，于第5天和第10天取樣，按穩定性重點考察項目進行檢測，結果見表1。

2.3 加速試驗

分別取3批樣品（批號：20130128、20130129、20130130，市售包裝）各適量，在（40±2）℃、相對濕度（75±5）%的條件下放置6個月，分別于0、1、2、3、6個月時取樣，按穩定性重點考察項目進行檢測，結果見表2。

表1 影響因素試驗結果Tab 1 Results of influential factor test

表2 加速試驗結果Tab 2 Results of accelerated test

2.4 長期試驗

分別取3批樣品（批號：20130128、20130129、20130130，市售包裝）各適量，在（25±2）℃、相對濕度（60±10）%的條件下放置12個月，每3個月取樣一次，分別于0、3、6、9、12個月時取樣，按穩定性重點考察項目進行檢測，結果見表3。

3 討論

由本試驗結果可見，樣品在高溫、高濕、強光照射條件下，且經加速試驗和長期試驗考察，各項指標均未見顯著變化，符合2010年版《中國藥典》（二部）中的質量標準規定。

處方中金銀花和連翹為君藥，由于金銀花中綠原酸不穩定，因此其含量可作為考察制劑穩定性的重要指標。在本品的研發過程中，筆者發現連翹藥材的主要成分連翹苷和連翹酯苷A 在許多情況下含量偏低，不能達到2010年版《中國藥典》（一部）的規定，因此有必要將連翹苷和連翹酯苷A的含量測定作為該制劑質量控制的指標。

表3 長期試驗結果Tab 3 Results of long-term test

中藥制劑的穩定性對產品質量至關重要。由于中藥制劑成分復雜且具有不確定性，往往含有較多的易吸濕成分，因此中藥制劑常具有較強的吸濕性，影響其質量穩定。為此，筆者在劑型研究時將本品設計為薄膜包衣片，并采用鋁塑泡罩包裝，外包復合鋁箔袋。本試驗結果表明，該制劑在現有工藝和包裝條件下，穩定性良好。

綜上所述，根據本試驗的穩定性考察結果，筆者建議可將銀花清咽片的有效期暫定為1年，貯藏條件為密閉，室溫保存。目前，室溫留樣考察仍在進行中。

[1]王歡歡，徐風華.HPLC 法測定銀花清咽含片中綠原酸、木樨草苷、連翹苷含量[J].解放軍藥學學報，2013，29（1）：49.

[2]王歡歡，徐風華.綜合評分法優選銀花清咽片處方[J].中國藥房，2012，23（19）：1762.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄199.

[4]朱興年，王震，景榮芳.復方替硝唑栓劑的穩定性研究[J].藥物鑒定，2007，16（21）：27.

[5]樊春艷.市售復方甘草酸苷注射液的穩定性重復試驗[J].實用醫藥雜志，2011，28（07）：610.