急性腦梗死患者血清VEGF 與bFGF 水平的動態變化

王翠蘭，石秋艷，孫 原，范亞霞，張春陽

急性腦梗死病灶由中心壞死區和周圍的缺血半暗帶組成，壞死區腦細胞死亡不能再生，但缺血半暗帶尚存在大量神經元，通過側支循環能夠減輕缺血缺氧損傷、恢復神經細胞功能。因此側支循環和新生血管的建立和開放是影響梗死面積及預后的重要因素。而血管內皮細胞生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是血管新生最重要的刺激因子。目前，國內有關腦梗死患者血清中VEGF或bFGF 的相關性研究較多，但對腦梗死不同梗死面積患者血清中VEGF 與bFGF 水平的動態變化的相關研究較少，且與腦卒中后患者的神經功能恢復狀況的關系尚缺乏系統研究。

本研究通過ELISA 方法觀察急性腦梗死患者血清VEGF 和bFGF 在不同時間點的動態變化，探討二者在急性腦梗死發病中的作用及與梗死面積、預后及可能的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象 腦梗死組:收集2012 年2 月～2013 年10 月我院神經內科住院的急性腦梗死患者120 例，其中男68 例，女52 例，年齡53～80 歲，平均(69.5 ±7.23)歲。診斷符合1995 年第四屆全國腦血管病會議修訂的標準，并經頭部CT 或MRI證實。排除標準:既往有腦卒中病史、近3 個月有腦部外傷史、患有嚴重心、腦、肝、腎疾病的患者。根據頭部CT 或MRI 測量梗死灶的最大直徑，將患者分為3 組:小梗死組28 例(最大直徑＜1.5 cm);中梗死組44 例(5 cm ＞最大直徑≥1.5 cm);大梗死組48 例(最大直徑≥5 cm)。依據改良的Rankin 量表(mRS)［1］評價發病3 個月后(病房評價、電話隨訪或門診評價)患者的神經功能恢復情況，并分為兩組:預后較好組(0～4 分)82 例;預后較差組(5～6分)38 例。以上各組性別、年齡差異均無統計學意義。對照組:選擇年齡和性別相匹配的門診健康查體者60 例，其中男32 例，女28 例，平均年齡(70.8±7.77)歲。

1.2 標本采集 采取腦梗死組發病2 d 內、7 d、14 d 清晨空腹靜脈血3 ml，于室溫2 h 內3500 r/min 離心10 min，提取血清于-80 ℃冰箱保存待測。對照組空腹采血一次，標本處理同上。

1.3 測量方法 雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清VEGF 和bFGF 含量。人重組VEGF ELISA 試劑盒和人重組bFGF ELISA 試劑盒購于欣博盛生物科技有限公司。實驗按試劑盒說明書操作。

1.4 使用儀器 美國MD 公司的SpectraMax全波長讀數儀和Wellwash4 MK2 洗板機。

1.5 統計學處理 應用SPSS13.0 統計軟件，兩樣本之間比較采用t 檢驗，多組間比較采用重復測量的方差分析，數據均采用均數±標準差()表示，以P ＜0.01 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 腦梗死組與對照組血清VEGF 和bFGF水平比較 腦梗死組患者發病后2 d 內、7 d、14 d的平均血清VEGF 和bFGF 水平均高于對照組(P ＜0.01)，且在急性期VEGF 水平持續升高，高峰發生在7 d，以后逐漸下降，至14 d 仍維持在較高水平;血清bFGF 水平在發病后2 d 內達高峰，發病7 d 呈逐漸下降趨勢，14 d 仍高于正常(P ＜0.01)(見表1)。

2.2 不同梗死面積患者血清VEGF 和bFGF水平比較 3 種梗死面積患者血清VEGF 和bFGF水平在發病后各時點有顯著性差異(P ＜0.01)。同一時點，大梗死組患者在發病后2 d 內、7 d、14 d 血清VEGF 和bFGF 水平顯著高于中、小梗死組患者(P ＜0.01);中梗死組患者血清VEGF 和bFGF 水平顯著高于小梗死組患者(P ＜0.01)(見表2)。

2.3 不同預后的腦梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平比較 預后較好組患者各時間點血清VEGF 和bFGF 水平均明顯高于預后較差組，差異有統計學意義(P ＜0.01)(見表3)。

表1 不同時間點腦梗死組與對照組血清VEGF 和bFGF 水平比較(，pg/ml)

表1 不同時間點腦梗死組與對照組血清VEGF 和bFGF 水平比較(，pg/ml)

與對照組比較* P ＜0.01

表2 不同梗死面積患者血清VEGF 和bFGF 水平比較(，pg/ml)

表2 不同梗死面積患者血清VEGF 和bFGF 水平比較(，pg/ml)

與中、小梗死組比較△P ＜0.01;與小梗死組比較* P ＜0.01

表3 不同預后的腦梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平比較(，pg/ml)

表3 不同預后的腦梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平比較(，pg/ml)

與預后較差組比較△P ＜0.01

3 討論

腦梗死后缺血區毛細血管增生的范圍與程度直接關系到缺血邊緣區血流的改善，與神經生理功能的恢復關系密切。所以，通過血管新生啟動梗死區微血管網重建是腦組織修復的重要過程，新生的血管網可能為損傷神經元的修復、突觸連接和神經發生創造良好的微環境，為腦梗死后神經功能的恢復奠定基礎。VEGF、bFGF 是重要的血管生成因子，在血管新生過程中發揮了重要作用。

VEGF 是最早被用于腦缺血疾病研究的血管生長因子。VEGF 不僅是調節腦血管發生的一個關鍵因子，而且還具有神經營養和保護作用，這種神經保護作用獨立于血管生成［2，3］。Hayashi 發現在大腦中動脈缺血后12～24 h 沿著梗死灶周圍的血管即出現內皮細胞增殖［4］。有學者研究發現［5］腦梗死后移植VEGF 基因，7 d 后可見梗死側腦組織有明顯的血管新生。最近有研究表明［6］，VEGF 在各種病理過程中參與血管和神經的重塑。由此可見，當腦組織發生缺血、缺氧時，VEGF 在促進血管新生、改善缺血半暗帶血供方面發揮重要作用。

bFGF 是一種多效能的細胞生長因子，具有促進血管新生、營養神經、促進軟骨生長和組織修復的功能［7，8］。正常情況下，只以極低濃度存在于血液中，腦梗死一旦發生，在發病2 d 內血清bFGF 水平較正常情況下明顯增高，之后逐漸降低至恢復期仍高于正常水平［9］。還有學者發現，bFGF 通過誘導MAP-2及NTP 蛋白的表達來促進神經功能恢復［10］。有人認為，bFGF 在體外與VEGF 聯合誘導外周單個核細胞，可定向分化為血管內皮細胞。最近的動物實驗發現［11，12］，bFGF 在正常情況下有一定表達，而在缺血模型中表達明顯增加，說明其參與了腦損傷后一系列細胞反應及神經系統功能恢復過程。

本研究結果提示，腦梗死組患者發病后各時點平均血清VEGF 和bFGF 水平均高于對照組(P ＜0.01)。在急性期VEGF 水平持續升高，水腫高發期(梗死后7 d)達高峰，之后逐漸下降，至恢復期仍維持在較高水平。這與最近的一些研究結果［13，14］類似。本實驗顯示，血清bFGF 水平于梗死后2 d 內達高峰，之后呈下降趨勢。根據腦梗死早期血清VEGF和bFGF 水平的急劇升高不難看出二者共同參與了缺血再灌注的早期病理生理過程，并發揮了重要作用，至恢復期其水平仍高于正常水平，表明二者可能協同參與了腦梗死的修復過程。

另一方面，本研究進一步分析了急性腦梗死患者血清VEGF 和bFGF 水平與大、中、小梗死面積的關系，發現3 組之間比較差異均有統計學意義，VEGF 和bFGF 水平與腦梗死的病情輕重有關，即腦損傷越重、梗死灶越大，兩者的水平越高。另外，對120 例腦卒中后患者的神經功能恢復分析發現，預后較好組在發病后各時點血清VEGF 和bFGF 水平均高于預后較差組，可能與VEGF 和bFGF 促進血管新生有關。

綜上所述，急性腦梗死患者血清VEGF 和bFGF水平在發病早期明顯升高，且呈動態變化。這一方面提示VEGF 和bFGF 在參與新生血管形成及腦神經功能恢復方面發揮重要作用;在另一方面也提示二者與梗死面積及腦神經功能恢復關系密切，在一定程度上可能作為判斷梗死面積與預后的新外周指標。

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