脈管復(fù)康片抗凝、鎮(zhèn)痛及抗炎作用研究

周劍宇，王瑞清，王林元，馬曉君，黃銀峰，屈勝勝，朱映黎，周恬恬

·藥理毒理·

脈管復(fù)康片抗凝、鎮(zhèn)痛及抗炎作用研究

周劍宇1，王瑞清3，王林元2，馬曉君3，黃銀峰2，屈勝勝2，朱映黎2，周恬恬2

目的：觀察脈管復(fù)康片抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用。方法：分別采用抗凝血實(shí)驗(yàn)、醋酸扭體實(shí)驗(yàn)、二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)，觀察脈管復(fù)康片的活血，鎮(zhèn)痛以及抗炎作用。結(jié)果：2g/kg脈管復(fù)康片的凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異顯著（P＜0.05）；2g/kg脈管復(fù)康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異非常顯著（P＜0.01）；1g/kg與0.5g/kg脈管復(fù)康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異顯著（P＜0.05）；2g/kg脈管復(fù)康片小鼠耳腫脹度明顯降低，差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論：脈管復(fù)康片具有抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用。

脈管復(fù)康片；脈管炎；抗凝；鎮(zhèn)痛；抗炎

血栓閉塞性脈管炎及深部靜脈血栓形成屬于中醫(yī)“脈痹”、“脫疽”范疇，其病機(jī)特點(diǎn)是在臟腑功能失調(diào)的基礎(chǔ)上感受寒濕或濕熱蘊(yùn)結(jié)至痹阻脈絡(luò)，氣血不暢，陽(yáng)氣不能到達(dá)肢端而致壞疽。中醫(yī)目前治療該病以活血祛瘀中藥為主[1]。脈管復(fù)康片是由乳香、沒(méi)藥、郁金、丹參、雞血藤等中藥制備而成，功效活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)，止痛生肌，臨床用于瘀血阻滯，血脈不暢引起的脈管炎、硬皮病、動(dòng)脈硬化性下肢血管閉塞癥[2～4]。本研究旨在通過(guò)抗凝、鎮(zhèn)痛、抗炎實(shí)驗(yàn)研究脈管復(fù)康片活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、止痛生肌的功效。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠，雄性，18-22g，由斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK（京）2011-0004。

1.2 受試藥

脈管復(fù)康片：由天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司提供，批號(hào)C90031，生產(chǎn)日期2013020。

阿司匹林片：拜耳醫(yī)藥保健有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20080078，批號(hào)BJ04335，有效期至2016.7.10，有效期60個(gè)月。

1.3 試劑

冰醋酸，分析純（500mL/瓶），北京化工廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)20130108。

1.4 儀器用品

計(jì)數(shù)器；計(jì)時(shí)器；電子天平；7mm打孔器；微量移液器；1mL注射器；載玻片；4號(hào)注射針頭。

2 方法

2.1 抗凝實(shí)驗(yàn)

取ICR小鼠，按隨機(jī)數(shù)表方法將動(dòng)物分為5組，分別為溶液對(duì)照組，阿司匹林組20mg/kg，脈管復(fù)康片2g成藥/kg，脈管復(fù)康片1g成藥/kg，脈管復(fù)康片0.5g成藥/kg。動(dòng)物在22±0.5℃恒溫條件，12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲水和飲食。適應(yīng)飼養(yǎng)5天后，灌胃給藥，灌胃劑量為0.2mL/10g，每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度，溶液對(duì)照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥5天，于第5天給藥60min后，用毛細(xì)管眼眶取血，滴于載玻片上，血滴直徑約0.5mm，立即用秒表記時(shí)，每隔10s用清潔的4號(hào)注射針頭自血滴邊緣向里輕輕撥動(dòng)，觀察有無(wú)血絲挑起。從采血開(kāi)始至挑起血絲止即為凝血時(shí)間。記錄凝血時(shí)間[5]。

2.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

取ICR小鼠，按隨機(jī)數(shù)表方法將動(dòng)物分為5組，分別為溶液對(duì)照組，阿司匹林組200mg/kg，脈管復(fù)康片2g成藥/kg，脈管復(fù)康片1g成藥/kg，脈管復(fù)康片0.5g成藥/kg。動(dòng)物在22±0.5℃恒溫條件，12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲水和飲食。適應(yīng)飼養(yǎng)5天后，灌胃給藥，灌胃劑量為0.2mL/10g，每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度，溶液對(duì)照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥3天，于第3天給藥90min后，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.1mL/10g，i.p.，醋酸溶液臨用前配制），立即將小鼠放入觀察箱中觀察。觀察標(biāo)準(zhǔn)：腹部?jī)?nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高計(jì)算為一次數(shù)。記錄小鼠15min內(nèi)的扭體次數(shù)[5,6]。

2.3 抗炎實(shí)驗(yàn)

取ICR小鼠，按隨機(jī)數(shù)表方法將動(dòng)物分為5組，分別為溶液對(duì)照組，阿司匹林組200mg/kg，脈管復(fù)康片2g成藥/kg，脈管復(fù)康片1g成藥/kg，脈管復(fù)康片0.5g成藥/kg。動(dòng)物在22±0.5℃恒溫條件，12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲水和飲食。適應(yīng)飼養(yǎng)5天后，灌胃給藥，灌胃劑量為0.2mL/10g，每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度，溶液對(duì)照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥7天，于第7天給藥60min后，將二甲苯滴于小鼠右耳正反面，0.02mL/只，20min后將小鼠脫頸處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用7mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片，電子天平稱重，以左右耳片重量之差為小鼠耳腫脹度（mg），表示炎癥反應(yīng)強(qiáng)度，并計(jì)算腫脹抑制率[5]。

耳腫脹度(mg) = 右耳重量－左耳重量

腫脹抑制率(%) = (溶液對(duì)照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度) / 溶液對(duì)照組平均腫脹度×100%。

3 數(shù)據(jù)分析

4 結(jié)果

4.1 脈管復(fù)康片對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響

與溶液對(duì)照組比較阿司匹林組的凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異顯著（P＜0.05）； 2g/kg脈管復(fù)康片的凝血時(shí)間明顯延長(zhǎng)，差異顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 脈管復(fù)康片對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響（n=10）

4.2 脈管復(fù)康片對(duì)小鼠醋酸致痛模型扭體次數(shù)的影響

與模型組比較阿司匹林組的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異非常顯著（P＜0.01）；2g/kg脈管復(fù)康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異非常顯著（P＜0.01）；1g/kg脈管復(fù)康片與0.5g/kg脈管復(fù)康片的15min扭體次數(shù)明顯減少，差異顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 脈管復(fù)康片對(duì)小鼠醋酸致痛模型扭體次數(shù)的影響（n=15）

4.3 脈管復(fù)康片對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與溶液對(duì)照組比較阿司匹林組小鼠耳腫脹度明顯降低，差異顯著（P＜0.05）；2g/kg脈管復(fù)康片小鼠耳腫脹度明顯降低，差異顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 脈管復(fù)康片對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（n=12）

5 討論與分析

血栓閉塞性脈管炎與血管內(nèi)皮損傷、血流動(dòng)力學(xué)改變及血液凝固性增高等因素密切相關(guān)，這些因素導(dǎo)致微循環(huán)障礙及組織的缺血、缺氧而發(fā)病。疼痛是該病最突出的癥狀，開(kāi)始時(shí)疼痛源自動(dòng)脈痙攣，常因血管壁與周圍組織中的末梢感受器受刺激引起。當(dāng)動(dòng)脈內(nèi)膜發(fā)生炎癥并因血栓引起動(dòng)脈閉塞后，即可產(chǎn)生缺血性疼痛。血栓閉塞性脈管炎受損血管呈一種非動(dòng)脈粥樣硬化、非化膿性炎癥狀態(tài)。研究顯示[7]血栓閉塞性脈管炎患者內(nèi)皮依賴性血管舒張功能減弱，炎性介質(zhì)水平明顯升高，在疾病急性期，血管損傷以血栓形成和炎性反應(yīng)為主。Halacheva K[8]等研究證實(shí)血栓性脈管炎患者血管壁中白細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間粘附分子-1、血管細(xì)胞粘附分子-1和E選擇素明顯升高，TNF-α在單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞頂部呈陽(yáng)性。

脈管復(fù)康片組方由丹參、雞血藤、郁金、乳香、沒(méi)藥五味中藥組成。本藥組方中丹參活血祛瘀、涼血消癰，既針對(duì)血瘀的病因，又針對(duì)脈管炎易引起感染而涼血消癰以抗炎；雞血藤行血補(bǔ)血、舒筋活絡(luò)；郁金活血、止痛、行氣既針對(duì)病因又針對(duì)疼痛癥狀；乳香、沒(méi)藥消腫生肌、活血止痛，起到對(duì)證及促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)作用。全方共奏活血化瘀，痛經(jīng)活絡(luò)，止痛生肌之效。有研究報(bào)道[9,10]丹參具有降低血小板聚集，抗凝血、抑制纖維細(xì)胞增殖的作用，丹參還可通過(guò)抑制細(xì)胞對(duì)IL-1、IL-6和TNF-α等炎癥介質(zhì)的釋放環(huán)節(jié)使機(jī)體產(chǎn)生明顯抗炎作用。Li等[11]研究9種藤本植物的抗炎作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，雞血藤乙醇提取物（除去多酚類化合物）對(duì)除COX-2以外的與抗炎作用有關(guān)的酶均具有抑制作用，表明雞血藤具有一定的抗炎作用。有研究[12,13]表明郁金提取物具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與降低炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，參與抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。鄭杭生等[14]研究表明乳香、沒(méi)藥提取物中揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛作用，醇提部分則可以明顯增強(qiáng)揮發(fā)油的鎮(zhèn)痛效果。陳婷等[15]實(shí)驗(yàn)證實(shí)乳香和沒(méi)藥配伍可增強(qiáng)抗炎效應(yīng)。

凝血時(shí)間主要反映凝血因子被激活至纖維蛋白形成所需的時(shí)間。抗凝血實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示脈管復(fù)康片可以延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間的作用，說(shuō)明脈管復(fù)康片可影響小鼠內(nèi)源性凝血途徑產(chǎn)生抗凝作用，具有活血化瘀功效。腹腔注射醋酸可刺激小鼠腹膜引起持久的疼痛反應(yīng)，致使小鼠出現(xiàn)“扭體反應(yīng)”，醋酸扭體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脈管復(fù)康片可減少小鼠扭體次數(shù)，具有明顯的外周鎮(zhèn)痛作用。二甲苯涂抹于小鼠耳廓兩面后，由于其刺激作用，可引起鼠耳局部毛細(xì)血管充血，通透性增加，滲出增多，發(fā)生水腫，表現(xiàn)出紅、腫、熱、痛等炎性癥狀，二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脈管復(fù)康片可降低鼠耳腫脹度，具有明顯的抗炎作用。本研究顯示脈管復(fù)康片具有抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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（責(zé)任編輯：陳思敏）

Study on the anticoagulant, analgesic and anti-inflammatory effects of Maiguan Fukang Tablets

ZHOU Jian-yu1, WANG Rui-qing3, WANG Lin-yuan2, MA Xiao-jun3, HUANG Yin-feng2, QU Sheng-sheng2, ZHU Ying-li2, ZHOU Tian-tian2//(1. Chengde Medical University,Chengde 067000,Beijing 100029,China; 2.China Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029;3. Tianjin Tongrentang Group by Share Ltd,Tianjin,300385.)

Objective:To study the anticoagulant, analgesic and anti- infammatory effects of Maiguan Fukang Tablets on mice.Method:The anti- coagulation experiments, acetic acid writhing test, xylene-induced mouse ear swelling experiment were used to observe the blood circulation-promoting, analgesic and anti- infammatory effects of Maiguan Fukang Tablets.Result:Compared with the control group, the coagulation time of 2g/kg Maiguan Fukang Tablets(P ＜0.05) group was prolonged obviously. The mice writhing times within 15min of 2g/kg(P ＜0.01),1g/ kg(P ＜0.05) and 0.5g/kg (P ＜0.05)Maiguan Fukang Tablets group were reduced obviously. The ear swelling of mice in 2g/kg Maiguan Fukang Tablets group (P＜0.05) were decreased obviously.Conclusion:Maiguan Fukang Tablets has anticoagulant, analgesic, anti-infammatory effects.

Maiguan Fukang Tablets; vasculitis; anticoagulation; analgesia; anti-Infammation

R 285

A

1674-926X(2014)03-008-03

1.承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029 3.天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司，天津 300385

周劍宇，男，助教，在讀博士，研究方向：中藥藥理 Tel:18810951597 Email:zhoujianyu1@163.com

王林元，男，副教授，研究方向：中藥產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用Tel:64287912 Email:wanglinyuan110@vip.163.com

2013-09-09