結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在胃癌中的臨床病理分析※

毛正發(fā) 黨勝春 范 昕 朱 霆 瞿建國(guó) 王旭青

胃癌是最常見(jiàn)的消化系腫瘤之一，其在腫瘤引起的死亡中居第2位[1]。但是約有65%的患者在確診時(shí)有局部及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，減少了根治性切除的機(jī)會(huì)，其5年生存率依然很低，尤其是進(jìn)展期胃癌，只有5%～15%[2]。

雖然胃癌的治療手段有了很大的進(jìn)步，但是胃癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移似乎是不可避免的。胃癌術(shù)后的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移是患者主要的致死原因，傳統(tǒng)的治療方法效果十分有限。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的病變過(guò)程，涉及多個(gè)基因的改變。有研究顯示[3]，在復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的胃癌病灶組織中，多種基因表達(dá)異常，結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）是其中一種。CTGF是CCN蛋白家族成員之一，CTGF的表達(dá)水平與人類多種組織的惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及其預(yù)后密切相關(guān)。近年來(lái)其在腫瘤細(xì)胞增殖，遷移、凋亡及化療耐藥性中的作用逐漸被重視。

本研究中檢測(cè)CTGF在胃癌中表達(dá)并且分析了其與臨床病理參數(shù)及患者預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 CTGF抗體購(gòu)自美國(guó)Santan Cruz公司，β- actin購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，收集江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院2009年～2011年病理診斷為胃癌的手術(shù)切除標(biāo)本73例，其中男45例，女28例，年齡43～73歲。距腫瘤5 cm以上正組織取為對(duì)照組織（病理證實(shí)非腫瘤組織）。所有患者術(shù)前均未行放、化療。將本組胃癌按大小分為＜5 cm和≥5 cm。胃癌組織學(xué)類型按Lauren 類型分為腸型和彌漫型；癌細(xì)胞分化為高、中、低，胃癌的臨床分期根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）的TNM分期為Ⅰ～Ⅳ期。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)：胃癌組織和正常胃組織固定脫水石蠟包埋后4 μm厚的連續(xù)石蠟切片。采用ABC法進(jìn)行免疫組織化學(xué)的檢測(cè)，蘇木精復(fù)染核。免疫球蛋白G（IgG）代替CTGF做一抗，檢測(cè)CTGF的特異性。陽(yáng)性定位于胃癌細(xì)胞胞漿或胞膜，細(xì)顆粒狀。胃癌細(xì)胞CTGF表達(dá)強(qiáng)度判斷：染色陽(yáng)性細(xì)胞＜5%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度淡黃為1分，黃為2分，棕黃為3分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與染色強(qiáng)度相乘，≤6分低表達(dá)，＞6 分為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中CTGF的表達(dá)檢測(cè)及其臨床意義 胃癌組織中免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，與對(duì)照的正常組織相比，腫瘤組織中的免疫染色強(qiáng)度更強(qiáng)。在73例胃癌標(biāo)本中，CTGF的高表達(dá)39例，低表達(dá)34例，高表達(dá)率53.4%。CTGF在胃癌中高表達(dá)與腫瘤組織分化、Lauren分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性（P＜0.05）。但是其表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期及轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 CTGF的表達(dá)與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n=73)

2.2 Kaplan-Meier生存分析 CTGF高表達(dá)的患者共39例，平均生存時(shí)間（33±4）個(gè)月，五年生存率28.2%（11/39），CTGF低表達(dá)患者34例，平均生存時(shí)間（42±4）個(gè)月，五年生存率52.9%（18/34）。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.035）。

3 討論

CTGF是一個(gè)富含半胱氨酸的蛋白，屬于CCN蛋白家族。雖然CTGF的特異性的受體未被證實(shí)，有報(bào)道[4]CTGF參與了多個(gè)生長(zhǎng)因子信號(hào)通路，包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGFβ）、成骨因子（BMP）及分泌性糖蛋白（wnt）。CTGF也可以與細(xì)胞表面的整合素相結(jié)合。其參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、粘附、遷移、血管形成及轉(zhuǎn)移。越來(lái)越多的證據(jù)顯示CTGF在腫瘤形成中發(fā)揮重要的作用。在乳腺癌及食管癌中均發(fā)現(xiàn)其表達(dá)增高，相反的，在結(jié)腸癌中其表達(dá)下降，并且在此腫 瘤細(xì)胞中，通過(guò)表達(dá)CTGF可抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。這種在不同的腫瘤中CTGF表達(dá)的差異性可能是由于CTGF表達(dá)調(diào)控是細(xì)胞類型特異性的并且在不同的腫瘤環(huán)境中CTGF有不同的功能。

本研究中結(jié)果顯示，與正常的胃組織相比，胃癌組織CTGF的表達(dá)水平明顯增加，提示CTGF的高表達(dá)與胃癌中的惡性表型相關(guān)。進(jìn)一步的分析顯示高表達(dá)的CTGF與腫瘤組織的分化、Lauren分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，提示其可能參與了的胃癌的分化過(guò)程及轉(zhuǎn)移。生存分析顯示，CTGF高表達(dá)組與低表達(dá)組的生存率之間有明顯差異性。CTGF的高表達(dá)與生存率呈負(fù)相關(guān)。但是在結(jié)腸癌中，有結(jié)果顯示在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或Ⅲ/Ⅳ腫瘤患者標(biāo)本中，其表達(dá)下降；高表達(dá)的CTGF的患者比低表達(dá)的患者5年生存率要高，提示CTGF的表達(dá)與生存率呈正相關(guān)。進(jìn)一步說(shuō)明了CTGF在不同腫瘤環(huán)境中的功能的差異。

綜上所述，CTGF在胃癌組織表達(dá)升高并且與患者的不良預(yù)后相關(guān)。但是CTGF促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1] Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2013,63(1):11-30.

[2] Correa P. Gastric cancer: overview[J].Gastroenterol Clin North Am, 2013,42(2):211-217.

[3] Ren W,Sun X,Wang K,Feng H,et al. BMP9 inhibits the bone metastasis of breast cancer cells by downregulating CCN2 (connective tissue growth factor,CTGF) expression[J].Mol Biol Rep,2014,41(3): 1373-1383.

[4] Deng YZ, Chen PP, Wang Y,et al. Connective tissue growth factor is overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma and promotes tumorigenicity through beta-catenin-T-cell factor/Lef signaling[J].J Biol Chem,2007,282(50):36571-36581.

[5] Sun Z,Yang P,Liang LY,et al.Expression of connective tissue growth factor in colorectal cancer and its association with prognosis[J]. Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi,2012,15(11): 1166-1170.