不同劑量葉酸對托吡酯致胚胎毒性作用的干預研究

鄭麗娜，蘆珊珊，謝 巍，王立娜，郭 麗

(1.河北省唐山市婦幼保健院藥劑科，河北 唐山 063000；2.河北醫科大學第四醫院藥品科，河北 石家莊 050011)

葉酸(folic acid，FA)是由蝶啶、對氨基苯甲酸和谷氨酸組成的一種B族維生素，是細胞生長和分裂不可缺少的重要物質[1]。FA參與體內一碳單位的轉移和代謝，對 DNA、RNA 的合成，細胞增殖和組織分化有重要意義[2]。以神經管畸形、唇腭裂等為主的多種出生缺陷與婦女懷孕早期體內缺乏FA存在病因學聯系[3]。托吡酯(topiramate，TPM)是一種新型的抗癲癇藥物，具有多重抗癲癇作用機制，但同時也有拮抗FA代謝的藥理作用[4]。FA誘導胚胎甲酰四氫葉酸水平下降，引起胚胎細胞分裂障礙，使胚胎細胞分裂異常、發育畸形，從而導致胚胎停止發育、宮內發育遲緩、流產、畸胎等異常妊娠情況[5]。本實驗以小鼠為研究對象，觀察TPM的致畸作用及不同劑量FA干預效應的差異，從而為臨床有效指導服用TPM的生育期婦女提供動物實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料：SPF級昆明種小鼠，雌性體質量(21.8±1.7)g，雄性體質量(22.6±1.8)g，北京華阜康生物科技股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SCXK(京)2009-0004。自然光照，自由飲水進食，適應性飼養1周。FA(北京北大藥業有限公司，每片0.4mg，批號S090528)，托吡酯(西安楊森制藥有限公司，每片25mg，批號090724035),上述所用藥物均用蒸餾水配制成所需濃度。

1.2 動物分組及給藥：按雌雄比例2∶1合籠交配，次日清晨定時檢查雌鼠陰栓，以查見陰栓者為妊娠零天，并隨機分為5組，每組20只孕鼠。①空白對照組，每天灌胃蒸餾水，容量為10mL·kg-1·d-1；② TPM劑量組，60mg·kg-1·d-1經口灌胃；③TPM+低劑量FA組，TPM經口灌胃劑量同②，同時添加0.07mg·kg-1·d-1FA；④TPM+中劑量FA組，TPM經口灌胃劑量同②，同時添加0.35mg·kg-1·d-1FA；⑤TPM+高劑量FA組，TPM經口灌胃劑量同②，同時添加0.7mg·kg-1·d-1FA。各組給藥劑量均相當于成人等效劑量的10倍。上述各組小鼠于分組后次日，雌性鼠開始灌胃各藥物，按上述方法給藥，直至妊娠結束。

1.3 觀察指標：觀察小鼠給藥后狀態，孕鼠于妊娠第22天處死,檢查子宮內胚胎數及其發育狀況。記錄孕鼠體質量、著床數、活胎數、死胎數、吸收胎數。測量仔鼠的體質量、身長、尾長等。

2 結 果

2.1 對孕鼠生殖能力的影響：與空白對照組相比較，各組著床數差異無統計學意義。TPM組、TPM+低劑量FA組、TPM+中劑量FA組活胎率、吸收胎率和死胎率與空白對照組比較差異無統計學意義，TPM+高劑量FA組與空白對照組比較差異無統計學意義。TPM+FA高劑量組與TPM組比較活胎率顯著升高、吸收胎率和死胎率明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

2.2 對胎鼠生長發育的影響：與空白對照組比較，TPM組與TPM+低劑量FA組胎鼠體質量、身長、尾長均顯著降低，差異有統計學意義(P<0.01)，TPM+中劑量FA組與TPM+高劑量FA組差異無統計學意義。TPM+中劑量FA組、TPM+高劑量FA組與TPM組相比較，胎鼠體質量、身長、尾長差異均有統計學意義(P<0.01)。見表2。

2.3 對胎鼠畸形方面的影響：與空白對照組比較，TPM組、TPM+低劑量FA組和TPM+中劑量FA組畸形數明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)。TPM+高劑量FA組與TPM組相比較畸形數差異有統計學意義(P<0.01)，畸形類型主要表現為唇腭裂(cheilopalatognathus)、小頭(microcephaly)、脊膜膨出(meningocele)、短肢(micromelia)等。見表3。

表1 藥物對孕鼠生殖能力的影響Table 1 Effects of drugs on reproductive ability of pregnant mice (n，%)

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group by χ2test

TPM：topiramate；FA：folic acid

GroupsLive birth numberWeight of fetal mice(g)Length of fetal mice(cm)Tail length of fetal mice(cm)Control group2231.57±0.082.39±0.131.17±0.06TPM group1971.09±0.05?1.86±0.27?0.99±0.05?TPM+FA low-dose group1981.21±0.07?1.98±0.20?1.02±0.07?TPM+FA mid-dose group2031.42±0.06#2.15±0.17#1.09±0.04#TPM+FA high-dose group2111.48±0.09#2.24±0.27#1.10±0.05#

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group byANOVA

TPM：topiramate；FA：folic acid

表3 藥物對胎鼠畸形方面的影響Table 3 Effects of drugs on deformity of pregnant mice

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group by χ2test

TPM：topiramate；FA：folic acid

3 討 論

本研究結果顯示，TPM對小鼠的生殖能力、胎鼠的生長發育及致畸方面有明顯影響，補充低劑量FA并不能有效拮抗這種毒性作用，而中劑量FA僅在胎鼠生長發育方面有一定的干預效應，高劑量FA干預TPM毒性作用的效果更明顯。

FA又稱蝶酰谷氨酸，是細胞生長和分裂所必需的物質，在人體合成代謝中發揮著重要作用[6]。人類自身不能合成FA，必須依賴食物供給。若孕婦缺乏FA，便會引起胚胎細胞分裂障礙，導致胚胎細胞分裂異常和胚胎細胞發育畸形[7]。有研究表明，孕婦缺乏FA會導致胎兒先天性異常，特別是神經管畸形的發生[8]。正常妊娠期婦女為滿足胎兒生長發育每天需要FA量為400～500μg[9]。我國從20世紀80年代末期開始，在全國各地區推廣服用FA增補劑，已經有效地降低了神經管畸形的發生，使高發地區預防率達到85%，低發地區預防率達到40%[10]。但對服用抗癲癇藥物孕婦的用量尚無報道。本研究證實低劑量FA拮抗TPM的毒性作用不明顯，這可能與TPM使血清FA水平降低有關。因此，對應用TPM治療的癲癇妊娠婦女應早期、足量補充FA，以預防畸形的發生。

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