藏藥“俄色”的薄層色譜研究

夏冬梅，李敏，王道清，楊冰月，盧道會(huì)

·品種品質(zhì)·

藏藥“俄色”的薄層色譜研究

夏冬梅，李敏，王道清，楊冰月，盧道會(huì)

目的：建立藏藥“俄色”的薄層色譜鑒別方法。方法：通過(guò)對(duì)提取試劑及展開(kāi)系統(tǒng)進(jìn)行系統(tǒng)的考察，建立以根皮素對(duì)照品為對(duì)照、以氯仿-甲醇-甲酸(8:2:0.1)為展開(kāi)系統(tǒng)的薄層色譜鑒別方法。結(jié)果：不同批次俄色藥材在與對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，能夠有效的對(duì)“俄色”進(jìn)行鑒別。結(jié)論：首次建立了藏藥“俄色”的薄層鑒別方法，該方法的Rf值適中，斑點(diǎn)清晰，具有較好的適應(yīng)性，重現(xiàn)性好，為完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)。

]俄色；根皮素；薄層色譜

藏藥“俄色”，來(lái)源于薔薇科蘋(píng)果屬隴東海棠系植物變?nèi)~海棠 Malus toringoides ( Rehd.) Hughes 或花葉海棠Malus transitoria ( Batal.) Schneid 的干燥葉，始載于《晶鏡本草》，具有保肝利膽、除膩滌滯、攻堅(jiān)化積等功效，現(xiàn)代研究表明，“俄色”具有降血脂、降血壓、降血糖的功效[5～8]。分布于我國(guó)西藏、四川、青海、甘肅等地。金強(qiáng)[9]等人，通過(guò)對(duì)四川阿壩州蘋(píng)果屬植物野生資源調(diào)查，發(fā)現(xiàn)變?nèi)~海棠和花葉海棠在阿壩州均有分布。2012年全國(guó)第四次中藥資源普查發(fā)現(xiàn)，變?nèi)~海棠和花葉海棠在甘孜州資源分布也十分廣泛。

在前期，通過(guò)對(duì)其化學(xué)成分分析，分離出根皮素單體化合物，現(xiàn)代藥理研究表明，根皮素具有抗癌、保護(hù)心血管、抗氧化、抑制骨質(zhì)疏松等活性[10～14]。因此，本文以根皮素為對(duì)照品，對(duì)“俄色”進(jìn)行了系統(tǒng)的薄層色譜研究，以便為該民族藥的科學(xué)鑒定、質(zhì)量控制以及合理開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 材料來(lái)源

藥材樣品均為2011年從四川省甘孜州收集而得，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李敏教授鑒定為薔薇科蘋(píng)果屬植物變?nèi)~海棠 Malus toringoides (Rehd.) Hughes 和花葉海棠Malus transitoria (Batal.) Schneid的干燥葉 。具體情況見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)樣品來(lái)源表

BY-6 2011/07/30 甘孜州爐霍縣仁達(dá)鄉(xiāng)BY-7 2011/08/15 甘孜州爐霍縣仁達(dá)鄉(xiāng)BY-8 2011/08/30 甘孜州爐霍縣仁達(dá)鄉(xiāng)BY-9 2011/09/8 甘孜州爐霍縣仁達(dá)鄉(xiāng)BY-10 2011/09/28 甘孜州爐霍縣仁達(dá)鄉(xiāng)花葉海棠 HY-1 2011/05/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-2 2011/05/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-3 2011/06/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-4 2011/06/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-5 2011/07/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-6 2011/07/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-7 2011/08/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-8 2011/08/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-9 2011/09/3 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)HY-10 2011/09/28 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉(xiāng)

1.2 試藥與試劑

根皮素對(duì)照品（自制對(duì)照品，純度99.7%），硅膠G(青島海洋化工廠)，羧甲基纖維素鈉（成都市科龍化工試劑廠），其余試劑均為分析純。

2 試驗(yàn)方法

2.1 提取溶劑及制樣方法的考察

①稱(chēng)取變?nèi)~海棠葉粉末3 g，加水50 mL，超聲提取30 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?mL甲醇溶解。

②稱(chēng)取變?nèi)~海棠葉粉末3 g，加40%乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?mL甲醇溶解。

③稱(chēng)取變?nèi)~海棠葉粉末3 g，加60%乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?mL甲醇溶解。

④稱(chēng)取變?nèi)~海棠葉粉末3 g，加80%乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解。

⑤稱(chēng)取變?nèi)~海棠葉粉末3 g，加無(wú)水乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解。

⑥稱(chēng)取3 g變?nèi)~海棠粉末，加40%乙醇50 mL超聲提取1 h，過(guò)濾，濾液蒸干后加水10 mL溶解，水液加乙酸乙酯振搖提取兩次，每次20 mL，合并乙酸乙酯，蒸干，用2 mL甲醇溶解。

⑦稱(chēng)取3 g變?nèi)~海棠粉末，加40%乙醇50 mL超聲提取30 min，過(guò)濾，濾液蒸干后加水10 mL溶解，石油醚（60～90℃）洗滌兩次，每次20 mL，棄去石油醚液，水液加乙酸乙酯振搖萃取兩次，每次20 mL，合并乙酸乙酯，蒸干，用2 mL甲醇溶解。

將上述7種溶劑的提取液點(diǎn)于硅膠G薄層板上展開(kāi)，結(jié)果表明，方法②的色譜斑點(diǎn)清晰，斑點(diǎn)多，根皮素的斑點(diǎn)大，且制樣方法簡(jiǎn)單。

2.2 稱(chēng)樣量的考察

取變?nèi)~海棠葉粉末3、2、1、0.5 g，分別加入40%的乙醇50 mL，超聲30 min，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解。

結(jié)果表明，稱(chēng)樣量0.5 g色譜斑點(diǎn)清晰，顏色適中，分離度最好。

2.3 提取溶劑用量的考察

稱(chēng)取變?nèi)~海棠葉粉末0.5 g，加40%乙醇溶液20 mL、30 mL、40 mL、50 mL，進(jìn)行超聲提取，過(guò)濾，取續(xù)濾液，蒸干加2mL甲醇溶解。

結(jié)果表明，溶劑用量為20mL的色譜斑點(diǎn)顏色較淺，效果較差，溶劑用量為30 mL、40 mL、50 mL的色譜斑點(diǎn)清晰，效果較好，且差別不大，故選用40%乙醇30 mL提取。

2.4 展開(kāi)劑的考察

①乙酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1:1；②氯仿:甲醇:乙酸=8:2:0.1；③ 乙酸乙酯:丁酮:甲醇:水=5:3:1:1；④ 甲苯:乙酸乙酯:丙酮:甲酸:水=2.5:4.5:4.5:0.85:0.6；⑤氯仿:甲醇:甲酸=8:2:0.1；以上5個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)前須先用展開(kāi)劑飽和30 min后，上行展開(kāi)。

結(jié)果表明，以氯仿:甲醇:甲酸（8:2:0.1）分離度最好，斑點(diǎn)清晰，Rf值適中。

2.5 點(diǎn)樣量的考察

對(duì)照品、樣品點(diǎn)樣量分別為3.5 μl，7 μl、10 μl、15 μl，于硅膠G薄層板上展開(kāi)，結(jié)果表明，對(duì)照品、樣品的點(diǎn)樣量均在7 μl時(shí)分離效果好，斑點(diǎn)清晰。

2.6 方法的確定及樣品鑒別

取本品粉末0.5 g，加40%乙醇溶液25 mL，超聲30 min，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取根皮素對(duì)照品，加甲醇制成每l mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各7μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-甲酸（8:2:0.1）為展示劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

取變?nèi)~海棠和花葉海棠各10批，按上述試驗(yàn)方法，薄層鑒別圖見(jiàn)圖1、2。結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。

圖1 不同批次的變?nèi)~海棠薄層色譜圖

圖2 不同批次的花葉海棠薄層色譜圖

3 討論

3.1 目前藏藥“俄色”尚沒(méi)有建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也沒(méi)有有關(guān)薄層色譜鑒別研究的報(bào)道，本文從藥材質(zhì)量的控制研究出發(fā)，首次建立了藏藥“俄色”的薄層色譜鑒別方法，該方法對(duì)“俄色”中根皮素的鑒別有較好的適應(yīng)性，該方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性較好，為藏藥“俄色”質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立奠定了良好的基礎(chǔ)。

3.2 以上“俄色”各樣品薄層色譜中，變?nèi)~海棠樣品薄層色譜中，BY-6、BY-8、BY-9、 BY-10樣品在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)較弱；花葉海棠樣品薄層色譜中，HY-1、HY-3、HY-4、HY-10號(hào)樣品在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)較弱，其余主要色譜斑點(diǎn)的熒光強(qiáng)弱有一定差異，這可能與樣品的采收時(shí)間、地理位置不同有關(guān)。

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（責(zé)任編輯: 胡慧玲）

The research of Tibetan medicine "Ese" with TLC

/XIA Dong-mei, LI Min, WANG Dao-qing, YANG Bing-yu, LU Dao-hui//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China )

Objective: To establish TLC identifcation method for Ese. Method: By means of systematic investigation on extraction reagent and the developing solvent, TLC identifcation method with phloretin as reference substance, and chloroformmethanol-formic acid (8:2:0.1) as developing solvent was established. Result: Different batches of “Ese” had fuorescent spots of the same color as phloretin. Conclusion: The method of TLC on Tibetan medicine “Ese” is frstly established. The Rf value is moderate and the spots are clear. The method is adaptable and reproducible, which provides a basic for the quality control of “Ese”.

Ese; phloretin; TLC

R 284

A

1674-926X(2014)02-007-03

全國(guó)第四次資源普查(No：2012-H-100)；四川省2013年藏藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

夏冬梅(1988-)，女，碩士研究生，研究方向：中藥品種、質(zhì)量與資源研究

Tel:13568832468 Email:674991089@qq.com

李敏（1962-），教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥品種、質(zhì)量及資源研究

Tel:13980038316 Email:028limin@163.com

2013-10-31