醋莪術配方顆粒質量標準研究

聶英軍，傅超美，傅舒，廖婉，嚴鑫，甘彥雄

·炮制制劑·

醋莪術配方顆粒質量標準研究

聶英軍，傅超美，傅舒，廖婉，嚴鑫，甘彥雄

目的：建立醋莪術配方顆粒的質量標準。方法：采用薄層色譜法對醋莪術配方顆粒進行定性分析，采用高效液相色譜法對醋莪術中的姜黃素進行含量測定。結果：建立的薄層色譜圖中可檢視出醋莪術清晰的特征斑點；姜黃素在0.017μg～0.17μg范圍內呈良好線性關系，回歸方程為：Y=1.1595X－0.0123，R=0.9998，平均回收率為97.33%（RSD為1.8%）。結論：本方法操作簡便、科學、重現性好，可以有效控制醋莪術配方顆粒質量。

]醋莪術；質量標準；薄層色譜；高效液相色譜；姜黃素

醋莪術配方顆粒為姜科植物蓬莪術(Curcumap -haeocaulisVal.)的醋制品通過提取、分離、濃縮、干燥、成型等工藝環節制得的一種現代制劑[1～4]。單味中藥配方顆粒和傳統中藥飲片相比，具有體積小、便于攜帶和保存、質量更穩定可控等優點。雖然中藥配方顆粒具有明顯優勢，但研究基礎還很薄弱[5～7]。市售醋莪術配方顆粒的成分含量差異較大，本文旨在建立醋莪術有效的質量標準，以期為醋莪術配方顆粒的質量控制奠定基礎[8,9]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10AT高效液相色譜儀（SPD-10AT紫外檢測器、LC-10AT色譜泵，江申JS-3030色譜工作站）。

1.2 試藥

姜黃素(批號：120420)、莪術二醇（批號：120514）、吉馬酮（批號：120228）、莪術醇(批號：120304)、莪術二酮（批號：120611），均購于四川省維克奇生物科技有限公司；水為高純水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 藥材

醋莪術飲片分別購于四川新荷花飲片有限公司（批號：1300521）、重慶太極集團（批號：1301106）、四川德仁堂飲片有限公司（批號：130614）。藥材經成都中醫藥大學中藥標本中心盧先明教授鑒定為姜科植物蓬莪術（Curcumaphaeocaulis Val.）的干燥根莖，符合《中國藥典》2010年版一部“莪術”項下有關規定。醋莪術配方顆粒由實驗室自制。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 對照品溶液制備 取莪術二酮、莪術醇、吉馬酮、莪術二醇對照品，加入無水乙醇制成每1 mL含莪術二酮0.09 mg、莪術醇0.11 mg、吉馬酮0.08 mg、莪術二醇0.1 mg的溶液，作為混合對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 取醋莪術配方顆粒0.5 g，加石油醚(30 ℃～60 ℃)10 mL，超聲30分鐘，離心，濾過，取上層清液揮干，加無水乙醇定容至1 mL，作為供試品溶液。另取醋莪術飲片6 g，以相同方法制備對照藥材溶液。

2.1.3 陰性溶液 取糊精適量，加無水乙醇制成每1 mL含糊精0.1 mg的溶液。

2.1.4 薄層色譜試驗 按《中華人民共和國藥典》2010年版薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯（80:20）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，在紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，具有相同顏色斑點，而陰性對照無干擾。結果見圖2。

圖1 醋莪術飲片薄層色譜鑒別

由本實驗對比結果可知：薄層色譜展開斑點分離度較好，Rf值在0.3～0.8之間，陰性對照無干擾。

2.2 姜黃素HPLC含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（Dikma公司，5 μm，4.6 mm×250 mm）；檢測波長：420 nm；流動相：乙腈-4%冰醋酸溶液(45：55)；流速1 mL．min-1；柱溫30 ℃；進樣量10 μL。對照品、供試品色譜圖見圖2、圖3。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱定姜黃素對照品，置于15 mL容量瓶中，加入甲醇使其溶解，補重稀釋至刻度，制成濃度為0.0085 mg．mL-1的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 精密稱定醋莪術配方顆粒0.5g（過2號篩），置于具塞三角燒瓶中，加入50 mL甲醇，稱重，使用超聲處理40 min(40 KHz，250 W)，稱重，加入甲醇至刻度，濾過，將濾液轉移于蒸發皿之中，重復提取兩次，將溶劑揮干，再加入5 mL甲醇溶解殘渣，濾過，定容于5 mL容量瓶中。

圖2 姜黃素對照品HPLC色譜圖

圖3 醋莪術配方顆粒HPLC色譜圖

2.2.4 線性關系考察 精密吸取濃度0.0085 mg．mL-1的姜黃素對照品溶液2,4,8,10,14,20 μL，使用上述色譜條件進行測定，采集峰面積數值，以峰面積的平均值作為縱坐標，以姜黃素含量作為橫坐標，可得標準回歸曲線，以進樣量X（μg），峰面積數值Y為坐標軸，進行線性回歸得回歸方程：Y=1.1595X－0.0123，R=0.9998。結果表明：姜黃素在0.017 μg～0.17μg范圍內呈良好線性關系。

2.2.5 精密度 精密吸取姜黃素對照品溶液10 μL，連續6次進樣，采集峰面積數值，由試驗結果可知，姜黃素峰面積的相對標準偏差較小，RSD為0.11%，精密度良好。

2.2.6 穩定性 精密吸取姜黃素對照品溶液、醋莪術配方顆粒供試品溶液，置室溫下保存0,2,4,6,8,12,18 h時間進樣，每次進樣10 μL，采集峰面積數值，由試驗結果可知，姜黃素對照品峰面積RSD為1.28%，醋莪術配方顆粒供試品峰面積RSD為0.635%，對照品與供試品在18 h內穩定性均較好。

2.2.7 重復性 取同批次樣品6組，按照擬定的含量測定方法進行操作，各進樣10 μL。由試驗結果可知，姜黃素峰面積RSD為2.06%，重復性良好。

2.2.8 加樣回收率考察 精密稱取醋莪術配方顆粒6組，每組1 g，每組加入姜黃素對照品0.0450 mg，以“2.2.1”項下含量測定方法進行測定，結果見表1。

表1 加樣回收率考察結果（n=6）

由試驗結果可知，平均回收率為97.33%，姜黃素峰面積RSD為1.8%，加樣回收率較好。

2.2.9 樣品測定 精密稱定不同批次制得的醋莪術配方顆粒，每批次三份，每份1g，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣10 μL，采集峰面積數值，經計算得姜黃素含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

三個批次配方顆粒中的姜黃素平均含量為0.0479 mg．g-1。

3 討論

本實驗按照《中國藥典》2010版一部莪術項下的鑒別方法進行實驗，能檢視出莪術的特征斑點，但斑點分離度較差，經過調整展開劑類型，使用環己烷-醋酸乙酯（80:20）為展開劑展開后，比較藥典方法TLC圖譜結果，發現環己烷-醋酸乙酯（80:20）為展開劑的譜圖中姜黃素鑒別斑點清晰，展開效果更好，綜合評價后，選擇其為薄層展開劑。

姜黃素作為醋莪術配方顆粒的評價指標性成分，通過實驗結果可知，該方法科學準確，具有較好的重現性，能夠很好的控制醋莪術配方顆粒的質量。

以醋莪術配方顆粒中姜黃素含量作為評價指標成分，分別考察了提取方式（超聲、回流、索式）、提取溶劑（70%乙醇、水、不同濃度甲醇）、超聲時間，超聲頻率，最終確定加入50 mL甲醇，超聲處理40 min(40 KHz，250 W)。通過實驗結果可知，該方法科學準確，具有較好的重現性，能夠很好的控制醋莪術配方顆粒的質量。

[1] 張廷模.臨床中藥學[M].北京:中國中醫藥出版社,2006:567.

[2] 廖婉,傅超美,章津銘,等.醋莪術對氣滯血瘀證血液流變學影響的表征及譜效相關性研究[J].中成藥,2013,35(2):330.

[3] 廖婉,傅超美,章津銘,等.醋莪術飲片HPLC指紋圖譜研究[J].中藥材,2012,35(10):1582.

[4] 廖婉,傅超美,章津銘,等.醋莪術飲片質量控制方法的研究[J].華西藥學雜志,2012,27(4):447.

[5] 苗明三,李振國.現代實用中藥質量控制技術[M].北京:人民衛生出版社,2000:287,742,890.

[6] 高學敏.中藥學[M].北京:中國中醫藥出版社,2007:211,428, 433.

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[8] 王琰,慕鄒.姜黃屬常用中藥的研究進展[J].中國藥學雜志,2001,36(2):80.

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[10] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:257.

（責任編輯：何瑤）

Research on the quality standards of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar

/NIE Ying-jun, FU Chao-mei, FUShu, LIAO Wan, YAN Xin, GAN Yan-xiong// ( Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective: To establish the quality standards of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. Method: Thin layer chromatography (TLC) was used in qualitative analysis of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. High performance liquid chromatography (HPLC) method was applied in the content determination of curcumine in dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. Result: The characteristic spots of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar were clearly detected in the established TLC chromatography. Curcumine had good linear relationship within the concentration range of 0.017μg～0.17μg. The regression equation was: y=1.1595x-0.0123( R =0.9998). The average recovery was 97.33% (RSD was 1.8%). Conclusion: The method is simple, scientifc, and good reproducibility, and can effectively control the quality of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar.

Ezhu prepared with vinegar; quality standards; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography; curcumine

R 283.6

A

1674-926X(2014)02-008-03

四川省科技支撐計劃（2013S20123）；四川省中醫藥管理局科技專項（2012-E-041）；四川省科技創新苗子工程資助項目（20133006）

成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

聶英軍，碩士在讀，主要從事中藥新制劑、新技術與新工藝研究 Email:389916897@qq.com

傅舒，助教，主要從事中藥新制劑、新技術與新工藝研究 Email:fushu317@126.com

2013-12-01