再生障礙性貧血實(shí)驗(yàn)及中醫(yī)藥治療機(jī)制研究進(jìn)展

張豐豐，張新雪，田 晨 綜述 趙宗江 審校

再生障礙性貧血實(shí)驗(yàn)及中醫(yī)藥治療機(jī)制研究進(jìn)展

張豐豐，張新雪，田 晨 綜述 趙宗江 審校

再生障礙性貧血；發(fā)病機(jī)制；動(dòng)物模型

再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)是一種由于化學(xué)、物理、生物因素及不明原因引起的全血細(xì)胞減少及骨髓造血功能衰竭的綜合病征。AA機(jī)制研究一直是研究工作的重點(diǎn)。隨著現(xiàn)代科研技術(shù)研究水平的不斷提高，AA的機(jī)制研究逐漸深入到分子生物學(xué)水平。AA機(jī)制的研究離不開動(dòng)物模型，近年來(lái)，為了建立理想的動(dòng)物模型，很多學(xué)者進(jìn)行了多方面探索。中醫(yī)藥在AA的治療上有一定的優(yōu)勢(shì)，也取得了一定的進(jìn)展。

1 免疫發(fā)病機(jī)制

AA的發(fā)病機(jī)制研究主要集中在造血干細(xì)胞損傷、免疫功能異常、造血微環(huán)境損傷3個(gè)方面，即種子學(xué)說(shuō)、蟲子學(xué)說(shuō)、土壤學(xué)說(shuō)。其中，免疫功能異常是AA發(fā)病機(jī)制的主要環(huán)節(jié)。研究認(rèn)為，免疫異常在再生障礙性貧血發(fā)病機(jī)制中起到了非常關(guān)鍵的作用[1]，近幾年的研究結(jié)果也進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)。

1.1 細(xì)胞免疫異常

1.1.1 T淋巴細(xì)胞亞群表型和活化狀態(tài)異常 研究認(rèn)為獲得性AA是一種免疫因素介導(dǎo)的疾病[2]。研究發(fā)現(xiàn)AA患者活化的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)增多，這類細(xì)胞具有T細(xì)胞活化標(biāo)志，如：HLA-DR、CD8、δTCSI、γδTCR、GB-7、TIA-1等。AA淋巴細(xì)胞中細(xì)胞毒顆粒蛋白TIA-1增加，且其表達(dá)與AA細(xì)胞凋亡有關(guān)，說(shuō)明AA淋巴細(xì)胞具有細(xì)胞毒性質(zhì)[3]。已有學(xué)者從AA患者骨髓淋巴細(xì)胞中分離出了對(duì)自體和異體造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cell, HSC)都具細(xì)胞毒作用的淋巴細(xì)胞株。這些結(jié)果提示異常活化的淋巴細(xì)胞可能與AA患者骨髓衰竭密切相關(guān)。

1.1.2 T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及其分布變化 AA患者T細(xì)胞數(shù)量相對(duì)增多，CD4/CD8，Th1/Th2，Tc1/Tc2比例失調(diào)，且活化的效應(yīng)細(xì)胞相對(duì)增多[4]。早期研究發(fā)現(xiàn)骨髓殘余造血組織中CD3+T淋巴細(xì)胞明顯增多，且這些細(xì)胞處于活化狀態(tài)；另有研究發(fā)現(xiàn)AA患者CD8+T細(xì)胞比例明顯增高。

1.2 細(xì)胞因子負(fù)調(diào)控作用 AA患者存在相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)增高，例如：干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等。研究表明，AA患者血液和骨髓液中IFN-γ和TNF-α增加，淋巴細(xì)胞胞漿IFN-γ和TNF-α表達(dá)率也高于正常者，說(shuō)明細(xì)胞因子在AA發(fā)病中起著重要作用[5]。Th3細(xì)胞可分泌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(Transforming growth factor-β，TGF-β)發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用，CD4+CD25+T細(xì)胞可抑制自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞活化增殖。而SAA患者體內(nèi)Th3細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞都減少，并隨病情減輕而增加，說(shuō)明兩者與免疫耐受的打破有關(guān)[6]。有些學(xué)者通過(guò)對(duì)免疫抑制治療前后AA患者CD3+T細(xì)胞內(nèi)的TNF-α比較發(fā)現(xiàn)，治療有效者TNF-α水平下降；AA患者血液、骨髓液、淋巴細(xì)胞胞質(zhì)中IFN-γ也都高于正常者，并且在免疫抑制治療前后有明顯變化，其IFN-γ受體基因在CD34+細(xì)胞中也表達(dá)上調(diào)[7,8]。此外，IFN-γ可上調(diào)mIL-15在AA患者成纖維樣基質(zhì)細(xì)胞(BMFSCs)表達(dá)，高表達(dá)的mIL-15通過(guò)細(xì)胞間近距離作用使T細(xì)胞增殖，引起造血細(xì)胞損傷[9]。

1.3 轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)異常

1.3.1 Th1、Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3表達(dá)異常 轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3是特異性調(diào)控Th0細(xì)胞分化、起著Thl/Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)換開關(guān)作用的關(guān)鍵因子。T-bet在mDCs分泌的IL-12作用下，通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子Ⅰ(STATⅠ)途徑促進(jìn)Th0向Thl極化，使后者分泌IFN-γ、TNF-α等Ⅰ型淋巴因子，介導(dǎo)細(xì)胞免疫；在IL-4作用下，Th0細(xì)胞通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT6)途徑促進(jìn)GATA-3高表達(dá)，使Th0向Th2極化，后者分泌IL-4、IL-5、IL-13等Ⅱ型淋巴因子，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答[10,11]。AA患者外周血淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)T-bet蛋白水平升高，免疫功能向Thl偏移。沈紅石等[12]發(fā)現(xiàn)T-bet與GATA-3異常表達(dá)可增強(qiáng)Th1細(xì)胞功能，抑制Th2細(xì)胞功能，導(dǎo)致患者免疫功能異常，最終引起AA發(fā)生、發(fā)展。

1.3.2 T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Foxp3表達(dá)減少 Foxp3是CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育和功能維持的關(guān)鍵性調(diào)節(jié)基因，其特異性地表達(dá)于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。孟麗娟等[13]采用RT-PCR方法檢測(cè)AA小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞Foxp3 mRNA的表達(dá)，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)AA小鼠脾組織Foxp3蛋白水平的表達(dá)，結(jié)果提示Foxp3的表達(dá)降低可能參與AA的免疫發(fā)病機(jī)制。

1.3.3 NF-κB蛋白表達(dá)異常 NF-κB作為重要的轉(zhuǎn)錄因子，在CD34+細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮非常重要的作用。羅梅宏等[14]采用Q-PCR、免疫組織化學(xué)等方法檢測(cè)小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞NF-κB mRNA、蛋白表達(dá)及活性變化，認(rèn)為NF-κB蛋白表達(dá)異常及活性改變?cè)贏A的發(fā)病機(jī)制中具有一定意義，但具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

2 AA實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型

目前，AA動(dòng)物模型的造模方法種類較多，主要有物理方法、化學(xué)方法、物理化學(xué)方法、免疫介導(dǎo)方法等[15]。物理方法中，60Co-γ射線可引起DNA損傷，干擾DNA復(fù)制，阻斷有絲分裂，抑制細(xì)胞增殖。化學(xué)方法中，用于AA造模的藥物通常有環(huán)磷酰胺、馬利蘭、苯劑等，乙酰苯肼為一種緩慢性氧化藥物，可導(dǎo)致紅細(xì)胞膜損傷，從而減少外周紅細(xì)胞數(shù)量；氯霉素骨髓抑制被認(rèn)為主要作用于造血微環(huán)境或造血干細(xì)胞。AA發(fā)生的過(guò)程就是造血細(xì)胞不斷增殖分化的過(guò)程中，如阻斷其中任一過(guò)程均可導(dǎo)致造血調(diào)控的功能異常[16]。

2.1 化學(xué)藥物造模法 任行洲等[17]選用CD1雄性小鼠，按給苯劑量不同分為4組：B1組(0.5 ml/kg)、B2組(1.0 ml/kg)、B3組(1.5 ml/kg)、B4組(2.0 ml/kg)，血象檢測(cè)、組織病理學(xué)檢查顯示：只有B4組(2 ml/kg)接觸苯25次后模型建立成功。趙厚德等[18]使用SD大鼠作為模型鼠，腹腔注射環(huán)磷酞胺(300 ml/kg)連續(xù)5 d，給藥3 d外周血白細(xì)胞總數(shù)明顯下降，5 d降至最低值，且維持時(shí)間較長(zhǎng)；停藥后15 d白細(xì)胞仍維持在最低值水平。苑曉磊等[19]選用昆明種雄性小鼠50只，模型組動(dòng)物按2.0 ml/kg皮下注射苯油混合液，1次/d，隔日給藥；再以環(huán)磷酰胺溶液(50 mg/kg)腹腔注射，1次/ d,共7次。結(jié)果顯示，利用苯與環(huán)磷酰胺聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠造血功能障礙結(jié)果穩(wěn)定，發(fā)生率高，各項(xiàng)指標(biāo)與人的再生障礙性貧血相似。肖純等[20]選用昆明種雄性小鼠，給予皮下注射環(huán)磷酰胺(50 mg/kg，隔天1次，共4次)及甲苯吸入染毒(濃度30 mg/L，每次2 h，共8 d)，10 d后小鼠全血細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、骨髓造血細(xì)胞均減少，非造血細(xì)胞成分增多，脾萎縮及出血、感染等表現(xiàn)，與人的AA表現(xiàn)相似。黃崇剛等[21]采用Wistar大鼠雌雄兼用，給予氟尿嘧啶100 mg/kg腹腔注射，5 d后給予馬利蘭10 mg/kg, 口服1次，2周后，再給予1次馬利蘭10 mg/kg，大鼠的外周血紅細(xì)胞、血紅蛋白和白細(xì)胞以及骨髓有核細(xì)胞記數(shù)和造血組織容量顯著減少，大量脂肪細(xì)胞代替造血細(xì)胞，造血細(xì)胞減少，骨髓增生極度低下，與AA患者特征有相似點(diǎn)。陳志偉等[22]采用BALB/c小鼠，通過(guò)正常組(生理鹽水0.2 ml/只)、單純照射組(高劑量組6 Gy，中劑量組4 Gy，低劑量組2 Gy)、單純注射環(huán)磷酰胺組(高劑量組150 mg/kg，中劑量組100 mg/kg，低劑量組50 mg/kg)、照射加環(huán)磷酰胺注射組(4 Gy+25 mg/kg，2 Gy+50 mg/kg)和照射加環(huán)磷酰胺加氯霉素注射組(2 Gy+50 mg/kg+30 mg/kg)等復(fù)合造模比較骨髓造血情況。根據(jù)死亡率和全血細(xì)胞數(shù)分析，認(rèn)為復(fù)合造模照射加環(huán)磷酰胺注射是一種AA小鼠的理想模型。

2.2γ射線造模法 孫巍巍等[23]采用Wistar大鼠用60Co-γ射線8.0 Gy全身一次性照射造成AA模型，結(jié)果顯示，模型組大鼠的外周血紅細(xì)胞、血紅蛋白和白細(xì)胞明顯減少，骨髓切片示造血細(xì)胞數(shù)減少，脂肪細(xì)胞增多。劉寶山等[24]選用近交系ICR雌雄各半小鼠，經(jīng)60Co-γ射線(3 Gy，劑量率0.6，照射時(shí)間5 min，距離4 m)全身照射后，于第4、5、6天腹腔注射環(huán)磷酰胺50 mg/kg和氯霉素62.5 mg/kg，以外周血象、骨髓象驗(yàn)證成模。陳慧莉[25]選用Wistar大鼠，雌雄各半，200 g/只，大鼠一次性全身亞致死量均勻照射(直線加速器X線，13 Gy)，照射后第4、5、6天腹腔注射環(huán)磷酰胺35 mg/kg及氯霉素43.75 mg/kg，通過(guò)外周血象及骨髓象的檢測(cè)證明造模成功。張海斌等[26]用SD大鼠，以直線加速器照射(劑量率300 cGy/min，SSD=100 cm，照射時(shí)間1.2 min)，隨后于第3 、5 、7天分別給予腹腔內(nèi)注射環(huán)磷酰胺50.0 mg/kg和氯霉素62.5 mg/kg，實(shí)驗(yàn)第8天檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)判斷動(dòng)物模型成功。結(jié)論：射線照射結(jié)合化療的方法能在較短時(shí)間內(nèi)方便地制作出符合臨床特征的AA動(dòng)物模型，是建立教學(xué)用AA動(dòng)物模型的理想方法。

2.3 免疫介導(dǎo)造模法 Chen等[27]發(fā)現(xiàn)，對(duì)正常小鼠輸注被激活的淋巴細(xì)胞能夠破壞造血和基質(zhì)細(xì)胞而誘導(dǎo)骨髓抑制模型。趙忻等[28]選用近交系BALB/c小鼠，DBA/2小鼠，采用不同劑量的60Co-γ射線對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行全身照射，并輸入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴結(jié)混合細(xì)胞，于照射并輸入細(xì)胞后第14天處死實(shí)驗(yàn)小鼠觀察股骨骨髓增生程度及病理改變。結(jié)果：6.0 Gy、5.5 Gy和5.0 Gy各照射劑量AA誘導(dǎo)組的AA發(fā)生率分別為85.7%、84.6%和22.2%。丁敬遠(yuǎn)等[29]選用Balb/c小鼠，5.5 Gy60Co-γ射線照射后4 h，由尾靜脈輸人取自DBA/2小鼠胸腺淋巴混合細(xì)胞懸液，實(shí)驗(yàn)室檢查證實(shí)模型建立成功。李愛(ài)民等[30]選用近交系Balb/c小鼠、DBA/2小鼠，取Balb/c小鼠10只，6.0 Gy60Co-γ射線全身照射，4 h內(nèi)由尾靜脈輸入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴結(jié)混合細(xì)胞懸液0.2 ml，細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)，制模后即腹腔注射生理鹽水0.4 ml/只，連續(xù)9 d，造模成功。孟麗娟等[31]選用DBA/2雄性小鼠，作為細(xì)胞供體，BALB/c小鼠，雌雄各半，隨機(jī)取BALB/c小鼠20只雌雄各10只，經(jīng)60Co-γ5.5 Gy射線全身均勻照射后，4 h內(nèi)由尾靜脈輸入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴細(xì)胞混懸液，輸細(xì)胞量為每只約含1×106個(gè)淋巴細(xì)胞，參照各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)證明造模成功。

3 中醫(yī)藥的作用環(huán)節(jié)

3.1 調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能 倪海雯[32]選用近交系BALB/c(H2 d，MLsb)、DBA/2(H2 d，MLsa)2種品系小鼠，建立免疫介導(dǎo)再生障礙性小鼠模型，設(shè)立正常組、模型對(duì)照組、血復(fù)生用藥組、環(huán)孢菌素對(duì)照組、血復(fù)生加環(huán)孢菌素組，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其T細(xì)胞表面CD28及CTLA4表達(dá)，結(jié)果顯示,AA模型組CD28的表達(dá)高于正常組，血復(fù)生及環(huán)孢菌素單獨(dú)用藥可下調(diào)CD28的表達(dá)，兩者聯(lián)合使用有增效作用，說(shuō)明CD28的表達(dá)增加參與了AA的免疫功能異常。觀察發(fā)現(xiàn)，AA組小鼠腸壁色澤較暗，腸腔或變細(xì)，或變遷曲擴(kuò)張，腸腔病理切片后顯示AA模型組腸壁細(xì)胞排列紊亂，這些病理改變可為中醫(yī)的脾胃虛弱、脾運(yùn)失健、氣血虧虛、腸府失濡提供客觀依據(jù)，說(shuō)明在AA發(fā)病中存在脾虛失運(yùn)。

3.2 調(diào)控細(xì)胞因子

3.2.1 正調(diào)控因子 劉寶山等[24]采用60Co-γ射線造模法建立AA小鼠模型，模型組予補(bǔ)腎化痰活血中藥喂養(yǎng)。結(jié)果顯示,模型組骨髓CD34+細(xì)胞抗原檢測(cè)結(jié)果、骨髓造血生長(zhǎng)因子SCF、GM-CSF mRNA表達(dá)水平均低于正常對(duì)照組，經(jīng)治療后各組小鼠骨髓CD34+細(xì)胞抗原水平、骨髓造血生長(zhǎng)因子表達(dá)水平均明顯提高。說(shuō)明補(bǔ)腎化痰活血方可能通過(guò)增強(qiáng)AA小鼠骨髓造血生長(zhǎng)因子GM-CSF、SCF mRNA表達(dá)水平，刺激造血細(xì)胞分化成熟，達(dá)到調(diào)控骨髓造血的目的。丁敬遠(yuǎn)等[33]用溫腎方、滋腎方灌喂DBA/2大鼠，抽取、制備含中藥血清，用Ba1b/C小鼠采用60Co-γ射線造模法建立免疫介導(dǎo)AA模型。結(jié)果表明，滋腎方對(duì)IL-3的生成有影響，溫腎方、滋腎方對(duì)培養(yǎng)體系中IFN-γ的生成均無(wú)影響。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，補(bǔ)腎方藥治療AA的確切療效是通過(guò)影響造血促進(jìn)因子IL-3總量生成，造血抑制因子IFN-γ局部濃度改變而進(jìn)一步作用于造血干細(xì)胞，促使其正常增殖、分化而達(dá)到治療目的。

3.2.2 負(fù)調(diào)控因子 鄭瑾等[34]選用BALB/c及DBA-2小鼠，復(fù)制免疫介導(dǎo)的AA小鼠模型，胃飼中藥復(fù)方，結(jié)果顯示中藥組骨髓增生好轉(zhuǎn)，骨髓微環(huán)境損傷減輕，血清IL-2、IFN-γ水平較AA模型組減低。說(shuō)明化瘀補(bǔ)腎湯能促進(jìn)AA小鼠骨髓微環(huán)境的修復(fù)，減少造血負(fù)調(diào)控因子的釋放，從而促進(jìn)造血功能恢復(fù)。陳育等[35]選用SD大鼠建立白消安誘發(fā)造血功能障礙大鼠模型，胃飼補(bǔ)腎調(diào)肝化瘀中藥，觀察血清TNF-α、IL-1β水平的變化。結(jié)果顯示模型組TNF-α顯著高于正常對(duì)照組，IL-1β低于正常對(duì)照組，而補(bǔ)腎調(diào)肝化瘀中藥治療組TNF-α顯著低于模型組，IL-1β顯著高于模型組。說(shuō)明補(bǔ)腎調(diào)肝化瘀中藥可通過(guò)改善造血系統(tǒng)細(xì)胞因子分泌異常，減輕免疫因素對(duì)機(jī)體的損害，促進(jìn)骨髓造血功能的恢復(fù)。

3.3 改善造血微環(huán)境 孫忠亮[36]將78例AA患者隨機(jī)分為兩組，均用司坦唑醇聯(lián)合環(huán)孢素A作為基礎(chǔ)治療藥物，一組加用川芎嗪注射液治療，定期測(cè)定血象、骨髓象、骨髓病理(微血管情況)，觀察臨床表現(xiàn)，進(jìn)行成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)并進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，川芎嗪組與基礎(chǔ)治療組相比外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板、血紅蛋白骨髓造血細(xì)胞比例均明顯升高；骨髓微血管的數(shù)量、造血組織容量(%)及成纖維細(xì)胞集落，較治療前及基礎(chǔ)治療組有明顯增多。說(shuō)明川芎嗪對(duì)AA患者骨髓微環(huán)境具有改善作用。

3.4 抑制細(xì)胞凋亡 有研究發(fā)現(xiàn)，慢性AA發(fā)病與CD34+細(xì)胞凋亡增多密切相關(guān)，而凋亡抑制基因bcl-2在CD34+細(xì)胞凋亡調(diào)控過(guò)程中具有重要作用，可抑制細(xì)胞凋亡。有學(xué)者采用DNA末端原位標(biāo)記(TUNEL)技術(shù)，檢測(cè)用愈障湯治療的39例慢性AA患者骨髓CD34+細(xì)胞凋亡狀況，研究結(jié)果表明，愈障湯使慢性AA患者骨髓CD34+細(xì)胞的凋亡率減少[37]。陳慧莉[25]采用全身照射加腹腔注射藥物法建立大鼠AA模型，中藥組予愈障湯治療。治療組外周血象及骨髓細(xì)胞線粒體病理變化明顯好于模型對(duì)照組。說(shuō)明愈障湯具有升高AA大鼠外周血各項(xiàng)指標(biāo)，保護(hù)、修復(fù)骨髓造血細(xì)胞損傷，并促進(jìn)細(xì)胞分化、增殖作用。

4 總結(jié)與展望

綜上所述，隨著現(xiàn)代科研技術(shù)水平的不斷提高，再生障礙性貧血機(jī)制研究不斷深入，但其發(fā)病機(jī)制越來(lái)越集中在造血干細(xì)胞損傷，免疫功能異常，造血正調(diào)控因子降低，負(fù)調(diào)控因子升高等方面。AA動(dòng)物模型的造模方法種類較多，但存在造模時(shí)間長(zhǎng)，造模方法復(fù)雜，模型不穩(wěn)定，持續(xù)周期短等缺點(diǎn)，如何建造更簡(jiǎn)單、穩(wěn)定的AA模型仍是研究者們探索的重點(diǎn)。參考現(xiàn)有文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為，通過(guò)化學(xué)方法之間或者化學(xué)方法與物理方法聯(lián)合的方式可以成功誘導(dǎo)AA大鼠模型，通過(guò)聯(lián)合誘導(dǎo)的方法制備AA實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停哂泻臅r(shí)短，方法簡(jiǎn)便，易于掌握，重復(fù)性好的特點(diǎn)，短期內(nèi)可誘導(dǎo)出大量模型，且能模擬人類AA表現(xiàn)出的相似病理生理過(guò)程，使得研究者能夠動(dòng)態(tài)觀察病情發(fā)展，深入了解發(fā)病機(jī)制。AA動(dòng)物模型的建立更是為相關(guān)治療藥物的研發(fā)和新的治療方法的研究提供了平臺(tái)。

多年中醫(yī)藥研究工作表明，中醫(yī)藥在AA治療中發(fā)揮了巨大的作用，它可能通過(guò)調(diào)控AA免疫系統(tǒng)T細(xì)胞的功能，延緩淋巴細(xì)胞減少，起到明顯的AA血液系統(tǒng)調(diào)節(jié)及延緩病程進(jìn)展的作用。臨床及實(shí)驗(yàn)研究找到了一些中醫(yī)藥治療AA、調(diào)節(jié)免疫功能的客觀依據(jù)，但還存在很多不足之處，AA中醫(yī)證型與免疫學(xué)客觀指標(biāo)的研究還缺乏系統(tǒng)性。因此，如何利用免疫學(xué)、遺傳學(xué)新技術(shù)并與中醫(yī)辨證相結(jié)合，深入研究中醫(yī)藥治療AA、調(diào)節(jié)免疫的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制，并尋找其與AA中醫(yī)證型的關(guān)系，將成為中醫(yī)藥研究者面臨的新課題。

[1] 湯孝優(yōu),伍紹錚,魏 萍,等.苯中毒重型再障免疫細(xì)胞及免疫因子變化[J].臨床軍醫(yī)雜志,2012,40(1):114-116.

[2] 周志剛,吳文忠,陳亞峰,等.γ干擾素聯(lián)合白消安誘導(dǎo)建立小鼠重型再生障礙性貧血模型中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化[J].廣東醫(yī)學(xué),2013,34(2):184-186.

[3] 劉春燕. 重型再生障礙性貧血骨髓造血免疫損傷機(jī)制及其相關(guān)抗原的研究[D].天津醫(yī)科大學(xué),2012.

[4] Giannakoulas N C, Karakantza M, Theodorou G L,etal. Clinical relevance of balance between type1 and type2 immune responses of lymphocyte subpopulations in aplastic anaemia patients[J]. Br J Haematol, 2004, 124(1): 97-105.

[5] Hara T, Ando K, Tsurumi H,etal. Excessive production of tumor necrosis factor-alpha by bone marrow T lympho-cytes is essential in causing bone marrow failure in patients with aplastic anemia[J]. Eur J Haemato, 2004, 73(1):10-16.

[6] 涂梅峰,邵宗鴻,劉 鴻,等.重型再生障礙性貧血患者Th3細(xì)胞、調(diào)節(jié)T細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的水平[J].中華血液學(xué)雜志,2006,27(11):753-756.

[7] 趙艷明,張 強(qiáng).再生障礙性貧血患者外周血T-bet和GATA-3轉(zhuǎn)錄因子基因表達(dá)失衡的分析[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2011,18(2):193-195.

[8] Zeng W, Miyazato A, Chen G,etal. Interferon-γ-induced gene expression in CD34 cells: identification of pathologic cytokine-specific signature profiles[J]. Blood, 2006, 107(1): 167-175.

[9] Li W, Fu J, Wang Y,etal. Expression ofmembrane-bound IL-15 by bone marrow fibroblast like stromal cells in aplastic anemia[J]. Int Immunol, 2005, 17(4): 429-437.

[10] Afzali B, Lombardi G, Lecbler R I,etal. The role of T helper 17(Thl7) and regulatory T cells (Treg) in human organ transplantation and autoinunune disease[J]. Clin Exp Immunol, 2007, 148(l): 32-46.

[11] Usui T, Preiss J C, Kanno Y,etal. T-bet regulates Thl responses through essential effects on GATA-3 function rather than on IFNG gene acetylation and transcription[J]. J Exp Med, 2006, 203(3): 755-776.

[12] 沈紅石,任傳路,陳海飛,等.T-bet、GATA-3與T細(xì)胞亞群在再障中的相關(guān)性研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,12(9):1677-1678.

[13] 孟麗娟,張秀蓮,張偉華,等.再生障礙性貧血患者治療前后外周血中單個(gè)核細(xì)胞FOXP3水平的檢測(cè)及其意義[J].山西醫(yī)藥雜志,2009,38(4):316-317.

[14] 羅梅宏,周永明,胡明輝,等.免疫介導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞NF-κB表達(dá)變化[J].臨床血液學(xué)雜志,2009,3,22(2):149-151.

[15] 孫婷婷,徐文瑞,祝曉玲.再生障礙性貧血?jiǎng)游锬Ｐ脱芯扛艣r[J].中藥藥理與臨床,2012,28(2):190-192.

[16] Malerba I, Casati S, Diodovich C,etal. Diodovich C Inhibition of CFU-E/BFU-E and CFU-GM colony growth by cyclophosphamide, 5-fluorou-racil and taxol: development of a high-throughput in vitromethod[J]. Toxicol In Vitro, 2004, 18(3): 293-300.

[17] 任行洲,俞 康,王明山,等.苯誘發(fā)小鼠再生障礙性貧血模型建立的初步探討[J].溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,34(5):331-333.

[18] 趙厚德,郝智慧,鄭海發(fā),等.大鼠白細(xì)胞及骨髓有核細(xì)胞減少模型的研究[J].中國(guó)比較學(xué)雜志,2003,13(5):292-293.

[19] 苑曉磊,李梅君.苯與環(huán)磷酰胺聯(lián)合建立小鼠再障模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,28(4):33-36.

[20] 肖 純,黃越燕,黃桂林,等.環(huán)磷酰胺和甲苯合用復(fù)制小鼠再生障礙性貧血模型及病理學(xué)觀察[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2005,15(1):7-9.

[21] 黃崇剛,劉劍毅,羅先欽,等.SBLKFY對(duì)大鼠急性再生障礙性貧血模型的作用[J].重慶中草藥研究,2007,12(2):32-35.

[22] 陳志偉,祝彼得,嚴(yán)蘇純,等.骨髓抑制性貧血小鼠模型的研究[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)志,2006,16(5):260-262.

[23] 孫巍巍,孫 強(qiáng),王 巍,等.不同劑量補(bǔ)髓生血顆粒對(duì)再生障礙性貧血模型大鼠外周血及骨髓的影響[J].中醫(yī)藥信息,2008,25(6):64-66.

[24] 劉寶山,顧民華,范國(guó)平,等.補(bǔ)腎化痰活血中藥對(duì)再生障礙性貧血小鼠骨髓CD34+和細(xì)胞因子表達(dá)的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志,2009,36(5):705-707.

[25] 陳慧莉,李建華,李來(lái)傳,等.愈障湯對(duì)再生障礙性貧血大鼠骨髓細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,29(6):487-489.

[26] 章海斌,王小中,李 靜,等.再生障礙性貧血大鼠模型的制作及實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009,13(10):1360-1362.

[27] Chen J, Brandt J S, Ellison F M,etal. Defective stromal cell function in a mouse model of infusion-induced bone marrow failure[J]. Exp Hematol, 2005, 3(8): 901-908.

[28] 趙 忻,汪明春,廖繼東,等.免疫介導(dǎo)小鼠再障模型方法的改進(jìn)[J].中國(guó)病理生理雜志,2002，27(6):716-717.

[29] 丁敬遠(yuǎn),黃振翹,孫關(guān)林,等.健脾藥對(duì)免疫介導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠IL-3、IFN-γ影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].新中醫(yī),2004,36(1):76-77.

[30] 李愛(ài)民,吳曉珊,尹忠欽,等.當(dāng)歸注射液對(duì)免疫誘導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠骨髓細(xì)胞CD34+及Fas抗原表達(dá)的影響[J].中國(guó)小兒血液與腫瘤雜志,2008,13(6):268-269.

[31] 孟麗娟,張秀蓮,張偉華,等.再生障礙性貧血小鼠Foxp3的表達(dá)及意義[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,40(1):35-38.

[32] 倪海雯.血復(fù)生對(duì)免疫介導(dǎo)再障小鼠骨髓CD28、cTLA4表達(dá)及IFN-γ、TNF-α水平的影響[D].南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士論文,2009.

[33] 丁敬遠(yuǎn),黃振翹,周永明,等.補(bǔ)腎方藥對(duì)免疫介導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠IL-3、IFN-γ的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2003,9(3):52-54.

[34] 鄭 瑾,劉 強(qiáng),王宗仁,等.化瘀補(bǔ)腎湯對(duì)再生障礙性貧血小鼠CFU-F及血清IL-2、IFN-γ的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,23(4):33-35.

[35] 陳 育,吳曉勇,傅汝林,等.補(bǔ)腎調(diào)肝化瘀中藥對(duì)再障大鼠血清TNF-α、IL-1β水平的影響[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,29(1):19-20.

[36] 孫忠亮.川芎嗪改善再生障礙性貧血骨髓微環(huán)境的研究[J].華中醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 33(4):194-196.

[37] Chen J, Lipovsky K, Ellison F M,etal. Bystander destruction of hematopoietic progenitor and stem cells in a mouse model of infusion-induced bone marrow failure[J]. Blood, 2004, 104(6): 1671-1678.

(2014-01-12收稿 2014-05-20修回)

(責(zé)任編輯 郭 青)

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