山東省某奶牛場布病與口蹄疫血清抗體檢測及分析

岳瑞超 李 寧 劉立濤 程子龍 劉思當

（山東農業大學動物科技學院 山東 泰安 271000）

布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的以流產、睪丸炎、關節炎為主要特征的人獸共患病，我國將其列為二類動物疫病，近年來隨著我國養牛業的迅速發展，發病率呈明顯上升的趨勢，對我國的人類健康和公共衛生構成了巨大威脅[1]。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的多種動物(牛、羊、豬、駱駝、鹿等80多種動物)共患的、接觸性傳染病，該病毒血清型多，傳染性強，除導致易感牛患病死亡或呈重癥感染外，還導致整個國家畜產品進出口貿易受阻，造成巨大的經濟損失和政治影響，我國將其列為一類動物疫病。我國主要存在O型、A型和亞洲I型[2]。因此，加強對山東省奶牛場布病感染狀況和口蹄疫免疫效果的血清學監測，對奶牛場重大疫病的防控不可或缺。

1 材料與方法

1.1 材料

148份血清，2013年9月采自山東省某奶牛場全部存養奶牛；布氏桿菌虎紅平板凝集抗原及試管凝集抗原均購自中國疾病預防控制中心，布氏桿菌抗體檢測ELISA試劑盒購于IDEXX公司；口蹄疫A型、亞洲I型及0型液相阻斷ELISA診斷試劑盒由內蒙古金宇集團提供。

1.2 方法

1.2.1 布病抗體檢測 （1）虎紅平板凝集試驗：將玻璃板上各格標記受檢血清號，然后加相應血清0.03ml，在受檢血清旁滴加抗原0.03ml。用牙簽類小棒攪動血清和抗原使之混合，在陰、陽性血清對照成立的條件下，方可對被檢血清進行判定。受檢血清在4min內出現肉眼可見凝集現象者判為陽性(十)，無凝集現象，呈均勻粉紅色者判為陰性(一)。（2）試管凝集試驗：對平板凝集試驗陽性或可疑的血清樣品，按照《獸醫微生物學實驗指導》的方法進行試管凝集試驗[3]，測定被檢血清的凝集效價。根據中華人民共和國國家標準(GB/T18646-2002)，被檢血清凝集效價達1:100以上的牛，判定為布氏桿菌病陽性;凝集效價達1:50者，判定為可疑反應。（3）ELISA檢測：按照美國IDEXX牛布氏桿菌抗體檢測試劑盒說明進行，檢測結果判定方法如下：S/P=(樣品OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)×100%。結果判定：S/P值大于等于1.2為陽性，在1.1～1.2之間為可疑，小于等于1.1時認為抗體不存在。

1.2.2 口蹄疫ELISA抗體檢測 口蹄疫A型、亞洲I型、O型液相阻斷ELISA檢測方法按照試劑盒說明書進行，結果判定標準以抗原對照平均OD492值的50%為臨界值，被檢血清1:64稀釋孔在大于臨界值時為陰性，小于或等于臨界值時為陽性。

2 結果

2.1 布氏桿菌檢測結果

對148份奶牛血清進行布病抗體檢測，結果見表1，虎紅平板凝集試驗18份陽性，陽性率為12.2%；對虎紅平板凝集試驗中的18份陽性樣品進行試管凝集試驗復診，有16份陽性，與虎紅平板凝集試驗的符合率為88.9%，陽性率為10.8%；對148份樣品進一步進行ELISA檢測，結果有16份樣品為陽性，陽性率為10.8%，陽性編號與試管凝集試驗陽性編號完全一致。

表1 布氏桿菌檢測結果

2.2 口蹄疫檢測結果

148份血清口蹄疫抗體檢測結果見表2，A型陽性74份，陽性率50%；亞洲I型陽性133份，陽性率90%；O型陽性133份，陽性率90%。

表2 口蹄疫檢測結果

3 討論

（1）目前國家法定的布病檢測方法是虎紅平板凝集試驗進行初篩，通過試管凝集試驗對陽性樣品進行確認。虎紅平板凝集試驗具有操作簡單、成本低廉、用時短等優點，適合于田間大規模檢測，但是特異性和靈敏度都不高。試管凝集試驗準確性高，但是操作繁瑣，用時較長。ELISA方法敏感性高、特異性強，而且操作簡便，用時短，可以作為布病確診的輔助方法。本次調查結合三種方法對山東省某奶牛場進行檢測，結果表明，該牛場布病抗體陽性率為10.8%，由于該牛場從未免疫過布氏桿菌疫苗，因此可以判斷該牛群有較高比例的布氏桿菌感染。（2）比較3種布病抗體檢測方法可以看出，虎紅平板凝集試驗與試管凝集試驗的符合度為88.9%。試管凝集試驗與IDEXX生產的ELISA試劑盒檢測結果的陽性符合率一致，符合度100%，綜合3種檢測方法，確定該場的布病陽性率為10.8%。說明僅靠虎紅平板凝集試驗檢測布病不夠準確，還需要借助試管凝集試驗或ELISA檢測方法進行復診。（3）農業部規定口蹄疫抗體的標準為陽性率大于等于70%，本次口蹄疫的血清學調查結果顯示，該牛場口蹄疫亞洲I型與O型抗體陽性率均為90%，A型抗體陽性率為50%。亞洲I型與O型高于國家口蹄疫免疫的標準要求，說明該場在O型和亞洲I型口蹄疫的防疫上取得了比較理想的免疫效果，但A型口蹄疫明顯低于國家規定的免疫合格率標準，這很可能跟疫苗的質量或者免疫程序有關，真正原因有待于調查研究。

4 防控措施

（1）布病是國家二類重大疫病，是一種人畜共患病，對公共衛生安全有重大威脅，根據國家相關規定，對實驗室檢出的布病陽性牛立即進行撲殺，并做無害化處理，對整個牛場進行3次徹底清掃消毒，嚴格采取生物安全措施。對陰性牛進行隔離觀察，再經過2次檢測之后，若未發現布病陽性牛，方可作為健康牛群進行飼養。（2）提倡牛場自繁自養，確需引進奶牛時，要嚴格把好檢疫關，要從布氏桿菌病陰性場購買牛，查看檢疫證明，嚴格執行檢疫。牛購回后隔離飼養觀察45d，同時，進行2次布氏桿菌病的檢查，陰性時方可混入原奶牛群[4]。（3）鑒于該場A型口蹄疫抗體的陽性率只有50%，建議牛場盡快進行一次口蹄疫A型疫苗注射，注射疫苗2周后進行A型抗體陽性率檢測，看是否達標，并建議牛場重新考查疫苗選購及免疫程序。（4）對奶牛場每年實施2次布病、口蹄疫定期的抗體監測，掌握奶牛重大疫病的免疫防控狀況，做到未雨綢繆。牛場杜絕注射布氏桿菌病菌苗。（5）加強平時的衛生防疫消毒工作，健全生物安全措施以切斷傳播途徑，如在養殖場或養殖小區門口設立消毒池或消毒間，每月進行一次全場消毒，包括飲水槽也要清洗干凈，及時清理剩余的飼料。普通的消毒藥如1%～3%的石炭酸溶液3 min就可殺死布氏桿菌，2%的福爾馬林溶液15min可將其殺死。另外，使用3%的漂白粉溶液，20%的石灰乳、苛性鈉溶液消毒效果都很好。對被病牛或陽性牛污染的場所、用具和物品要進行嚴格地消毒。飼養場的金屬設施、設備可采取火焰、熏蒸等方式消毒；牛場場地，可采用20%石灰乳、10%漂白粉乳劑，圈舍可用3%來蘇兒噴灑消毒。流產胎兒、胎衣應深埋或燒毀，被污染的圈舍、場地、用具等用以上藥液進行徹底消毒，糞便經生物發酵消毒[5]。

[1]宮艷霞.奶牛養殖場布氏桿菌病的防治[J].中國畜禽種業, 2012, 8(4): 110.

[2]石惠, 王仲賓, 鄭明學等.國內外口蹄疫的流行情況及防制[J].畜禽業, 2009, 242: 48-51.

[3]姚火春.獸醫微生物學實驗指導[M].北京: 中國農業出版社, 2003.46-49.

[4]楊仕標, 信愛國, 趙文華等.云南奶(水)牛口蹄疫和布氏桿菌病血清學檢測及防控措施[J].中國奶牛, 2011, 24: 42-44.

[5]劉紅光.奶牛布氏桿菌病的防控措施[J].中國畜牧獸醫文摘, 2012, 28(9): 91.