曲阜市牛羊結核及布病的監測與凈化

郝昭遠 邢洪運 張 軍 王 磊 孔令芳

尹洪科 魏繼剛 孔 敏 馬秀芳 潘振芳 （山東省曲阜市畜牧獸醫工作站 273100）

劉思當* （山東農業大學動物科技學院 泰安）

為提高牛羊布魯氏菌病和結核病（以下簡稱“兩病”）的防控水平，促進畜牧業健康發展，增加養殖經濟效益，保障畜產品質量安全。2012年6月至2013年6月曲阜市畜牧獸醫工作站在全市推廣實施了《牛羊結核病和布病的監測及凈化工作》。現將主要技術工作報告如下：

1 全市牛羊飼養情況調查

曲阜市目前存欄牛1.06萬頭，存欄羊16.50萬只。養牛戶主要集中在魯城、石門山、吳村、時莊、姚村、小雪、防山等鎮街，飼養模式主要為圈養；養羊戶除魯城、書院、陵城外，其他幾個鎮街都有很多飼養場戶，飼養方式除幾個存欄量較多的規模場實施圈養外，其他均以散養為主，輔以放牧。

2 “兩病”流行病學調查

為全面了解“兩病”發生現狀，科學判斷牛羊“兩病”的流行趨勢，在全市12處鎮街農業服務站(獸醫站)、405名村級動物防疫員和部分養殖場(戶)的積極配合下，全市開展了“兩病”流行病學調查。同時，畜牧獸醫部門與衛生防疫部門加強溝通，建立疫情互通機制，發現疫情及時通報，減少人畜間“兩病”的傳播風險。

2.1 “兩病”發病情況

（1）歷史上曲阜市已有十幾年未有人的布病發生，但據曲阜市疾控中心統計數據顯示2013年上半年本市發生了2例人的布病病例，一例發生在魯城街道，一例發生在尼山鎮。而人的結核則發病率要高的多，每年都有200多個新增病例，發病地點呈散發狀態，2010年302例，2011年224例，2012年261例，2013年上半年就有147例。（2）上世紀六七十年代，本市家畜“兩病”曾時常發生，通過加強流行病學調查、疫病檢疫以及對陽性病畜的撲殺、無害化處理等綜合防控措施，牛羊“兩病”基本上已被撲滅，特別是90年代初本市實現了布病防控省級達標；十幾年來，本市一直采取多種有效措施防控牛羊結核病和布病的發生，定期開展疫情監測，不斷淘汰陽性病畜，陽性檢出率逐年下降。但近幾年隨著牛羊養殖數量的增加，市場流通和動物流動性增加，“兩病”的發生有所回升，雖未發生大的疫情，但防控形勢異常嚴峻。

2.2 “兩病”發病原因分析

（1）從外地引進牛羊而發生的輸入性病例。“兩病”疫區的病畜通過調運或直接接觸造成畜間感染流行，致使部分鎮街發生人畜間“兩病”的交叉感染。（2）疫區傳染源凈化不徹底。由于部分可能染病的病畜未經檢測即被養殖戶賣出，未進行淘汰無害化處理，加之牛羊交易頻繁，以及跨界、交叉混合放牧等原因，造成疫情向周邊地區擴大蔓延。（3）群眾對“兩病”的危害認識不足，自我防護意識不強，處理牛羊的流產物、排泄物、分泌物以及牛羊加工、銷售過程中無任何防護措施，如喂養牛羊后不洗手、消毒，污染物不消毒未做無害化處理就隨地亂扔，個別農戶仍存在人畜混居現象等。

2.3 牛羊流行病學調查

發放流行病學調查問卷143份，涉及全市12個鎮街143個養殖場(戶)。其中奶牛養殖場(戶)33家，存養奶牛1986頭，黃牛養殖場(戶)32家，存養黃牛865頭。綿羊養殖場(戶)48家，存養綿羊5341只，山羊養殖場(戶)30家，存養山羊2925只。被調查場(戶)一共存欄牛羊11117頭(只)，其中母畜存欄8336頭(只)，占74.98%。本次調查的大部分養殖場戶有3年以上的養殖經驗，但只有44.10%對結核和布病有所了解，其余55.90%不了解甚至不知道。被調查戶的懷孕牛羊4994頭(只)，屢配不孕的牛羊共有53頭(只)，發生在29個場(戶)，出現流產37頭(只)，發生在18個場(戶)。消瘦、咳嗽的牛羊共有38頭(只)，發生在12個場(戶)。在本次調查中，有16個場(戶)從外地購進過牛羊，但大部分購進的牛羊沒有檢疫合格證明。牛羊發病后自己診治的有78個場(戶)，占54.55%，請獸醫診治的有65個場(戶)，占45.45%。被調查的33個奶牛養殖場(戶)中自己人擠奶的有21個，雇人擠奶的有12個。76.2%的養殖場戶對飼養場進行定期消毒，23.8%養殖場戶從不消毒。僅有25.2%養殖場戶進行過實驗室檢測。

3 “兩病”的檢測診斷

3.1 牛結核病的檢測

3.1.1 材料和方法 （1）試驗材料：結核菌素(哈藥集團生物疫苗有限公司生產，批準文號獸藥生字(2012)201008)、游標卡尺(精度為0.02mm)、毛剪、酒精棉、1ml注射器、工作服、一次性帽子、一次性口罩、膠靴、記錄表等。（2）檢測的牛群：曲阜市所有奶牛場戶100%進行抽樣，根據場戶的規模大小計算抽樣數量。具體抽樣數量見表2。肉牛場(戶)的抽樣數量根據年初下達的檢測計劃進行抽樣。（3）試驗方法：采用牛型提純結核菌素皮內變態反應(PPD)試驗。①操作方法：注射部位及術前處理：將檢測牛編號后在頸側中部上1/3處剪毛(或提前1d剃毛)，3個月以內的犢牛，也可在肩胛部進行，直徑約10cm。用卡尺測量術部中央皮皺厚度，作好記錄。注意術部應無明顯的病變。注射劑量不論大小牛只，一律皮內注射0.1ml(含2000IU)。即將牛型結核分枝桿菌PPD稀釋成每毫升含2萬IU后，皮內注射0.1ml。凍干PPD稀釋后當天用完。注射方法：先以75%酒精消毒術部，然后皮內注射定量的牛型結核分枝桿菌PPD，注射后局部應出現小皰，如對注射有疑問時，應另選15cm以外的部位或對側重做。注射次數和觀察反應：皮內注射后經72h判定，仔細觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應，并以卡尺測量皮皺厚度，作好詳細記錄。對疑似反應牛應立即在另一側以同一批PPD同一劑量進行第二次皮內注射，再經72h觀察反應結果。對陰性牛和疑似反應牛，于注射后96h和120h再分別觀察1次，以防個別牛出現較晚的遲發型變態反應。②結果判定：陽性反應：局部有明顯的炎性反應，皮厚差大于或等于4.0mm；疑似反應：局部炎性反應不明顯，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm；但只要有一定炎性腫脹，即使皮厚差在2.mm以下仍應判為可疑；陰性反應：無炎性反應。皮厚差在2.0mm以下。凡判定為疑似反應的牛，于第一次檢疫60d后進行復檢，其結果仍為疑似反應時，經60d再復檢，如仍為疑似反應則判為陽性。

表1 曲阜市奶牛場戶抽樣數量 (頭)

3.1.2 結果與分析 （1）奶牛結核病初檢及可疑病例復檢結果。

從表2可以看出，對于初檢結果可疑的64頭牛，間隔60d復查，結果44頭判定為陰性，20頭判定為陽性。

表2 奶牛結核病初檢及可疑病例復檢結果 (頭)

3.2 牛羊布病檢測

3.2.1 試驗材料與方法 （1）血清的制備與保存：由頸靜脈穿刺采集牛羊全血，待血清析出時，分裝入離心管，放于4℃冰箱用于試驗檢測，將其他備份血清放于-20℃冰箱凍存。（2）試劑：布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗抗原、陽性血清、陰性血清均購自青島易邦生物工程有限公司。（3）血清檢測：對采集的1379份牛羊血清首先使用布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗初步檢測，凡初檢結果為疑似或陽性的，再使用試管凝集試驗進行復檢。（4）虎紅平板凝集試驗方法及判定標準：參照國家標準GB/T18646-2002動物布氏桿菌診斷技術，在滅菌潔凈的玻璃板上，分別吸取被檢血清30μl與虎紅平板凝集抗原30μl混合均勻，同時以陽、陰性血清作對照。在4min內出現肉眼可見凝集現象判為陽性，無凝集現象，呈均勻粉紅色者判為陰性。（5）試管凝集試驗(SAT)方法及判定標準：首先稀釋血清，稀釋度依次為 1:12.5、l:25、1:50、1:100。加入等量稀釋后的抗原，混勻，則血清稀釋度依次為l:25、1:50、1:100、1:200。同時做陰性對照和陽性對照及抗原對照，并配制比濁管。將全部試管、對照管及比濁管充分振蕩后置37℃溫箱24h，取出檢查并記錄結果。參照比濁管，按各試管上層液體亮度判讀。①++++菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；②+++菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；③++菌體凝集顯著，液體50%清亮；④+凝集物有沉淀，液體25%清亮；⑤－凝集物無沉淀，液體均勻混濁。

3.2.2 結果與分析 （1）奶牛檢測結果與分析。（2）肉牛檢測結果與分析。（3）羊血清學結果與分析。

表3 奶牛布氏桿菌病初檢及可疑病例復檢結果 (頭)

由表3可知，初檢結果中有25頭牛判為疑似病例，經試管凝集試驗復檢，1個樣品試管凝集物無沉淀，液體均勻混濁，為陰性，24個樣品試管菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮，判定為陽性。

表4 肉牛布氏桿菌病初檢及可疑病例復檢結果 (頭)

由表4可知，初檢結果中284頭牛全部判為陰性。

表5 羊布氏桿菌病初檢及可疑病例復檢結果 (頭)

由表5可知，初檢結果中607只羊判為陰性，3只羊判為陽性。

4 討論

通過這次調查發現，曲阜市牛羊“兩病”尤其是布氏桿菌病感染率較低。在采集的1379份血樣中，有24份奶牛血清為陽性。并且集中出現在兩個奶牛場，通過進一步了解得知陽性牛都是今年上半年從外地購進的，在購進之前沒有進行“兩病”檢測，也沒有動物檢疫合格證明。對于檢出的陽性牛、羊及時采取了隔離、撲殺、焚燒、深埋、消毒等無害化處理，并認真做好登記備案、消毒滅源疫點等清除工作，達到布氏桿菌病的凈化目的。

曲阜市作為布氏桿菌病流行地區，對布氏桿菌病檢測凈化理應高度重視，但在調查中發現：（1）仍有部分養殖戶不了解布病相關防控知識，因此今后必須加這方面的知識宣傳，提高養殖戶的自我防范意識和防控技能 。（2）動物防疫不足，污染源無害化處理不徹底。（3）職能部門對布病的防控措施不到位，在免疫、檢疫、監測、淘汰陽性畜、消毒等各環節中都不同程度的存在一些問題，今后需加強基層獸醫站的建設，增加防檢設備投入，提高業務人員素質；加強檢疫督查，對牲畜交易市場、定點屠宰場、農貿市場加大檢疫督查力度，嚴禁未經檢疫或檢驗不合格牲畜及產品進入市場，對各種違法行為要嚴肅處理，將傳入風險降至最低。

5 小結

曲阜市《牛羊結核及布病檢測與凈化》項目實施一年來，取得了顯著成效，圓滿完成了計劃任務目標。

5.1 建立了牛羊“兩病”的檢測凈化體系 通過項目實施，培訓了一批熟練掌握“兩病”檢測的技術人員，積累了大量的“兩病”防控實踐經驗，總結制訂了符合我市實際的“兩病”防控技術工作流程，對今后“兩病”的進一步防控和凈化具有重要的推動作用。

5.2 取得了顯著的經濟和社會效益 通過疫情控制和檢測凈化的設施，使牛羊流產率降低了5%，提高了生產性能及產品質量，獲得直接經濟效益300多萬元。通過項目實施，逐步普及了“兩病”防控知識，提高了養殖從業人員的自我防護意識，有效切斷了人畜間的疫病傳播途徑，減少了人的感染幾率，消除了人們對牛羊肉的恐慌心理，促進了社會和諧穩定，維護了公共衛生安全。

5.3 完成了全市牛羊飼養情況調查 通過這次“兩病”流行病學調查，初步摸清了全市牛羊的飼養狀況，對今后牛羊病的防控以及健康養殖的推動提供了科學決策依據。

5.4 完成了人畜間“兩病”的流行病學調查 通過開展“兩病”流行病學調查工作，掌握了“兩病”在人畜間感染流行情況，為本市人畜“兩病”的監測、防控奠定了基礎。