磺胺間甲氧嘧啶與恩諾沙星聯合用藥對黃羽肉雞常見病原菌的藥敏試驗

吳 波段龍川羅厚強

1.浙江省溫州市動物疫病預防控制中心，浙江溫州 325000；2.溫州科技職業學院動物科學系，浙江溫州 325006

磺胺間甲氧嘧啶與恩諾沙星聯合用藥對黃羽肉雞常見病原菌的藥敏試驗

吳 波1段龍川2羅厚強2

1.浙江省溫州市動物疫病預防控制中心，浙江溫州 325000；2.溫州科技職業學院動物科學系，浙江溫州 325006

采用磺胺間甲氧嘧啶（SMM）與恩諾沙星（EFs）聯合用藥對黃羽肉雞常見病原菌大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌進行了體外藥物敏感性試驗。結果表明，SMM對3種病原菌的MIC值分別為256、1 024、256 μg/mL；EFs對3種病原菌的MIC值分別為32、16、2 μg/mL。SMM與EFs聯合藥敏試驗結果表明對大腸桿菌和禽多殺性巴氏桿菌呈現協同作用，對沙門氏菌呈現相加作用。

磺胺間甲氧嘧啶；恩諾沙星；黃羽肉雞；藥敏試驗

當前，黃羽肉雞養殖過程中大多數病毒性疫病通過強制性疫苗注射等方法得到了有效控制[1]，然而細菌性疫病仍然呈現多發態勢，如大腸桿菌病、雞白痢、雞霍亂等。這幾種病在養殖過程中出現頻率較高，養殖戶往往憑經驗用藥，治療程序不一，療效差別很大。用藥時病情出現好轉，暫停則死亡，停藥1～2 d后，病情又出現反復，死亡增加，難以治愈；長期反復用藥，使病原菌產生很強的耐藥性[2]，加大治療成本的同時又無法有效控制疫情，給養殖戶造成很大的經濟損失。

本試驗選取磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星2種藥物，通過這2種藥物對溫州地區黃羽肉雞常見病原菌（大腸桿菌、沙門氏菌、禽多殺性巴氏桿菌）的體外聯合藥敏試驗，研究兩者合用的抑菌效果，為篩選出經濟有效的黃羽肉雞常見病聯合用藥方案提供依據。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）供試藥品。磺胺間甲氧嘧啶鈉，商品名制菌磺，含量45%，生產批號：20140121，購自廣東大華農動物保健品有限公司。乳酸恩諾沙星，由浙江國邦藥業有限公司提供，批號121108-1，含量99.5%。

2）受試菌株。大腸桿菌（ATCC25922）、沙門氏菌（ATCC14028）、禽多殺性巴氏桿菌（ATC12948），購自杭州天和微生物試劑有限公司。

3）培養基。肉湯培養基：MuellerHinton（簡稱MH）培養基，血清MH肉湯培養基；固體培養基：血清瓊脂培養基、鮮血瓊脂培養基、普通瓊脂培養基。上述各種培養基均按常規方法制備，并置于4℃冰箱保存備用。

1.2 方 法

1）培養基的制備。按MH肉湯粉使用說明書配置；用于培養沙門氏桿菌和禽多殺性巴氏桿菌時，可在培養基中加入5%血清。MH瓊脂經高壓滅菌后，每個平板分裝15 mL制成瓊脂平板，置于4℃冰箱保存備用。

2）藥液的配制。試驗前精密稱取磺胺間甲氧嘧啶鈉和乳酸恩諾沙星，無菌操作配制成2 mg/mL的藥液，置4℃冰箱保存備用。

3）菌液的配制。挑取特征性菌落先接種血平板，置37℃過夜培養，次日挑選單個菌落1～2個接種于5 mL培養基（加5%血清）中，37℃培養16～18 h。本試驗要求的各菌液濃度為105cfu/mL，依據計數的結果用MH肉湯將各原菌液做相應的稀釋。

4）單用藥物最小抑菌濃度（MIC）測定。采用試管二倍稀釋法分別測定每種藥物對每種受試菌株的MIC值，每種測定做3次重復，確定每種藥物對每種受試菌株的MIC值。

5）聯合藥敏試驗。采用微量稀釋棋盤法，以各種藥物對應各種受試菌株的MIC值的2、1、1/2、1/4倍等濃度在96孔細胞培養板上分別進行聯合藥敏試驗。置37℃恒溫培養箱培養18 h左右，觀察結果。

6）結果判定

以分級抑菌濃度（FIC）指數作為聯合藥敏試驗的判斷依據，計算公式如下：

FIC指數≤0.5為協同作用；0.5＜FIC指數≤1為相加作用；1＜FIC指數≤2為無關作用；FIC指數＞2為拮抗作用。

2 結果與分析

2.1 單用藥物最小抑菌濃度（MIC）測定值

磺胺間甲氧嘧啶鈉對大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌的MIC值測定結果分別為256、1 024、256 μg/mL；乳酸恩諾沙星單獨用藥對大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌的MIC值測定結果分別為32、16、2 μg/mL。

2.2 聯合藥敏試驗結果

磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對大腸桿菌、沙門氏菌和禽多殺性巴氏桿菌的聯合藥敏試驗結果見表1～4。

表1 磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對大腸桿菌的聯合藥敏試驗

表2 磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對沙門氏菌的聯合藥敏試驗

由表1可知，SMM單藥的 MIC為 256 μg/mL，EFs的MIC值為32 μg/mL；聯合用藥時，SMM與EFs的MIC值分別為64、8 μg/mL，明顯低于單藥的MIC值。將表2的MIC值代入FIC指數化公式，求得聯合用藥的FIC指數=（64/256）+ （8/32）=0.5。

由表2可知，SMM單藥的MIC值為1 024 μg/mL，EFs單藥的MIC值為16 μg/mL；聯合用藥時，SMM與EFs的MIC值分別為512、2 μg/mL，低于單藥的MIC值。將表3的MIC值代入FIC指數化公式，求得聯合用藥的FIC指數=（512/1 024）+ （2/16）=0.625。

表3 磺胺間甲氧嘧啶鈉與乳酸恩諾沙星對禽多殺性巴氏桿菌的聯合藥敏試驗

表4 聯合用藥效果

由表 3可知，SMM單藥的 MIC值為 256 μg/mL，EFs單藥的MIC值為2 μg/mL；聯合用藥時，SMM與EFs的MIC值分別為64、0.5 μg/mL，明顯低于單藥的MIC值。將表4的MIC值代入FIC指數化公式，求得聯合用藥的FIC指數=（64/256）+ （0.5/2）=0.5。

3小 結

試驗結果顯示，磺胺間甲氧嘧啶鈉對3種病原菌的敏感程度依次為大腸桿菌=禽多殺性巴氏桿菌＞沙門氏菌；乳酸恩諾沙星對3種病原菌的敏感程度依次為禽多殺性巴氏桿菌＞沙門氏菌＞大腸桿菌，尤其對禽多殺性巴氏桿菌高度敏感。聯合藥敏試驗對多殺性巴氏桿菌和大腸桿菌的FIC指數均小于0.5，表明SMM和EFs聯合用藥效果為協同作用；聯合藥敏試驗對沙門氏菌的FIC指數為0.625，表明SMM和EFs聯合用藥效果為相加作用。

乳酸恩諾沙星是氟喹諾酮類高效殺菌藥，為動物專用的廣譜殺菌藥，對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌及鏈球菌等均有殺菌效用[3]。該藥物分子能與細菌DNA回旋酶亞基A結合，抑制該酶的切割與連接功能，阻止細菌DNA的復制，從而呈現抗菌作用，且具有廣譜抗菌活性及強滲透性[4]。磺胺間甲氧嘧啶鈉則是緩效抑菌藥，其抗菌機制是干擾細菌的葉酸代謝，阻礙葉酸合成，影響細菌繁殖，起抑菌作用，但病原菌易通過葉酸代謝途徑改變從而產生耐藥性[5]，2種藥物聯用時可以從不同途徑抑制并且殺死細菌[6]，起到協同作用。對大腸桿菌和禽多殺性巴氏桿菌的感染采用SMM與EFs聯用進行治療時，可減少2種藥物單用的劑量，并保證其對常見病原菌引起黃羽肉雞疫病的治療效果，同時又有可能降低治療成本并且使病原菌不易產生耐藥性。對于革蘭氏陽性病原菌（如金黃色葡萄球菌）感染，此2種藥物聯用反而呈現拮抗作用[7]，因此在實際應用中，應根據臨床和實驗室診斷結果對癥下藥。

[1]MARTINEZ M，MCDERMOTT P，WALKER R.Pharmacology of the fluoroquinolones：a perspective for the use in domestic animals[J].Vet J，2006，172（1）：10-28.

[2] 曾振靈，馮淇輝.獸用氟喹諾酮類藥物研究與臨床應用進展[J].中國獸醫科技，1995，25（3）：39-41.

[3] 張秀英，從霞，鄒水.氟喹諾酮類藥物對雞常見病原菌的體外抑菌活性試驗[J].畜牧與獸醫，2000，32（6）：19-20.

[4]葉啟薇，陳杖榴，蔣佩蓮，等.環丙沙星與其他抗菌藥聯用對常見病原菌的藥敏試驗[J].中獸醫醫藥雜志，1997，（3）：3-5.

[5]楊漢春，陳聲，吳清明，等.雞源大腸桿菌對氟喹諾酮類藥物的多重耐藥性[J].畜牧獸醫學報，2003，34（4）：398-404.

[6]郭永剛，李榮譽，周延州，等.恩諾沙星與磺胺間甲氧嘧啶聯合藥敏試驗[J].中國獸醫雜志，2009，43（6）：9-11.

[7]馬立農，陳杖榴，曾振靈，等.恩諾沙星與磺胺類藥物聯用對畜禽常見病原菌的藥敏試驗 [J].湖北農學院學報，2000，20（1）：44-46.

2014-11-11

溫州市科技計劃項目（2013N0010）

吳波，男，1981年生，碩士生，獸醫師。