HPLC法測定寒濕痹阻型外敷制劑中綠原酸的含量

趙紫亮，楊春輝，張小東，聞 輝，王 沛

(長春中醫(yī)藥大學，長春130117)

寒濕痹阻型外敷制劑(由萆薢、木瓜、烏藥等中藥精制而成)，是本課題組將臨床應用多年，療效十分理想的口服協定處方制劑的改型制劑，具有活血祛瘀、健骨補腎之功，局部外敷，可直接吸收，并減少口服藥物的不良反應。本研究對該外敷制劑中的藥效成分——綠原酸建立一個含量測定方法，以求為該新制劑的制備提供理論支撐［1-2］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀:Waters公司;SK-3200H超聲清洗器:上海科導儀器有限公司;AL-204型電子天平:上海科導儀器有限公司。

1.2 藥品與試劑 綠原酸:中國藥品生物制品檢定所(批號:110753-200413);寒濕痹阻型外敷制劑是由本研究室自制(由萆薢、木瓜、烏藥等藥經提取后，加入適當輔料，制成)。陰性對照品，由本研究室自制;用于高效液相的試劑均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜分析條件 色譜柱:Autanlit C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液(24∶76);流速:1.0 mL/min;檢測波長:327 nm;柱溫:30℃;理論塔板數不低于10 000。

2.2 對照品(標準品)溶液的制備 取經80℃干燥至恒重的綠原酸對照品8 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，用流動相(甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液)溶解，并加至刻線，搖勻，即得(每1 mL中約含綠原酸0.32 mg)儲備液。

2.3 樣品(供試品)溶液的制備 取制劑適量，研細，取約1.5 g，精密稱定，加70%乙醇40 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加流動相5 mL溶解，用0.45 μm微膜濾過，取濾液，作為制劑樣品供試品。

2.4 陰性對照品溶液制備 按處方比例稱取除木瓜外的其他藥物，按制備法制成的陰性對照品，取陰性對照品適量，研細，按2.3項下操作，最終制得陰性對照品溶液。

2.5 標準曲線的制備 精密吸取2.2項下的綠原酸對照品(標準品)儲備液，精密量取儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。制成含綠原酸0.16～1.6 mg/ mL的一組待測液，分別吸取20 μL進樣，按上述色譜條件測定峰面積，以進樣量為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標。以濃度對峰面積進行線性回歸。求得回歸方程為:Y=4 407 504.55X－1 248 761.6;r=0.999 7。結果表明綠原酸進樣量在0.32～1.92 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 精密度實驗 精密吸取對照品溶液(儲備液稀釋10倍0.032 mg/mL)20 μL進樣，連續(xù)進樣6次，測定色譜峰面積。計算得精密度試驗 RSD值為0.20%，結果表明實驗儀器有良好的精密度。

2.7 穩(wěn)定性實驗 取供試品適量，精密稱定，依照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，室溫(20℃)下放置分別于0、2、4、8、16、24 h內待測組分峰面積，結果分別為428329、425866、414280、413020、407271、407144。計算樣品溶液含量，RSD值為0.55%。結果表明，供試品溶液在24 h內是穩(wěn)定的。

2.8 加樣回收率實驗 采用加樣回收法，取已知含量的樣品，精密稱定，分別精密加入一定量的綠原酸對照品，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述測定方法進行測定，計算回收率，結果平均回收率為99.66%，RSD為0.415%。

2.9 樣品測定 分別取批號為100501、100502、100503、100601、100602、100603的制劑6批樣品，測定結果見表1。

表1 6批樣品測定結果(n=6)

3 討論

3.1 樣品溶液流動相選擇 鑒于該組方屬于中藥復方制劑，成分比較復雜，考慮到在含量測定時雜質的干擾，對樣品的溶解度進行了測定試驗［3-7］。通過使用甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙腈等試劑進行比較，結果使用甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液(24∶76)作為流動相效果最佳。

3.2 測定結果 本方法簡便快捷，結果準確可靠，為該中藥復方制劑的質量控制及綠原酸的含量測定提供可行的方法。

［1］胡仕其.中西醫(yī)結合治療痛風性關節(jié)炎22例療效觀察［J］.中國中醫(yī)藥科技，2010，17(3):256.

［2］左宏笛，鮑家科，茅向軍.HPLC法測定萆薢分清丸中薯蕷皂苷元的含量［J］.中國藥房，2008，19(9):692-693.

［3］劉影，于治國，袁璐，等.茵陳藥材中的綠原酸的含量測定［J］.西北藥學雜志，2006，21(5):207-209.

［4］管玉云，萬慶，程正.抗菌消炎片中綠原酸的含量測定［J］.安徽醫(yī)藥，2008，12(9):797-798.

［5］劉曉芳，馬新玉，周鋼.中國藥典菊花綠原酸含量測定方法的探討［J］.新疆中醫(yī)藥，2006，24(5):78-79.

［6］吳懷恩，勞深，王雯慧，等.HPLC測定石韋配方顆粒中綠原酸、咖啡酸及芒果苷的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16(1):54-56.

［7］林麗美，劉菊妍，王燕，等.RPHPLC法測定金銀花中綠原酸的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2009，15(9):22-23.