VEGF基因多態(tài)性在多囊卵巢綜合征中的表達及意義

李 娜 楊倩英 趙曼曼

沈陽市第四人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 遼寧 沈陽 110030

VEGF基因多態(tài)性在多囊卵巢綜合征中的表達及意義

李 娜 楊倩英 趙曼曼

沈陽市第四人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 遼寧 沈陽 110030

目的探討血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的1154G/A位點單核苷酸多態(tài)性（SNPs）與多囊卵巢綜合征（Polycystic ovarian syndrome，PCOS）的相關(guān)性。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)方法檢測110例多囊卵巢綜合征患者（研究組）及100例正常婦女（對照組）的VEDG基因-1154G/A多態(tài)性位點的基因頻率分布情況。結(jié)果在110例PCOS患者及100例對照組中，VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3種基因頻率在PCOS組和對照組中分別為2.6%、26.4%、71.0%和5.0%、30.0%、65.0%。G、A等位基因頻率分布在PCOS組和對照組分別是82.3%、17.7%和78.0%、22.0%。兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論VEGF-1154G/A位點的單核苷酸多態(tài)與PCOS的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

多囊卵巢綜合征；血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）；單核苷酸多態(tài)

多囊卵巢綜合征（Polycystic ovarian syndrome，PCOS）是育齡婦女中常見的內(nèi)分泌代謝紊亂疾病[1]。近年來研究表明，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前發(fā)現(xiàn)的活性和特異性最強的血管生成因子[2]。在目前，血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）被認(rèn)為可能參與了多囊卵巢綜合征的發(fā)生、發(fā)展[5]。為對VEGF與PCOS的發(fā)生、發(fā)展風(fēng)險相關(guān)性進行研究，選取2008年1月-2010年12月生育年齡婦女110例為研究對象，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

在沈陽市第四人民醫(yī)院就診，符合PCOS診斷標(biāo)準(zhǔn)的生育年齡婦女110例。110例生育年齡婦女均為就診于沈陽市第四人民醫(yī)院婦科門診的患者，女性，年齡18～38歲，平均（25.67±4.18）歲。符合PCOS的診斷標(biāo)準(zhǔn)。PCOS的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國生殖醫(yī)學(xué)學(xué)會（ASRM）鹿特丹修正的診斷標(biāo)準(zhǔn)。按此標(biāo)準(zhǔn)至少符合其中2項：①稀發(fā)排卵或無排卵；②臨床和（或）生化有高雄激素表現(xiàn)；③超聲檢查發(fā)現(xiàn)卵巢多囊性變。選擇同期月經(jīng)正常的育齡期婦女100例，年齡20～38歲，平均（24.55±4.65）歲作為對照組。兩組患者3個月內(nèi)均無激素治療史，無內(nèi)外科及其他疾病史。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取 抽取門診就診的PCOS患者及因其他婦科疾病如功血，流產(chǎn)，盆腔炎癥等排除PCOS患者的外周靜脈血5 mL，以枸櫞酸鈉抗凝，采用蛋白酶K-氯化鈉鹽析法提取白細(xì)胞DNA。

1.2.2 基因多態(tài)性監(jiān)測 VEGF-1154G/A基因型檢測均采用PCR-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RELP）方法。PCR反應(yīng)體系：PCR反應(yīng)體積 20 μL，其中模板 DNA100 ng，PCR緩沖液1.6 μL×10 倍。耐熱 DNA 聚合酶 1 U，10 mmol/L dNTPs 0.4 μL。5 μmol/l上、下游引物（上海生物技術(shù)有限公司）各1μL.上游：5′-TCCTGCTCCCTCCTCGCCAATG-3′(F)；下游：5′-GGCGGGGACAGGCGAGCATC-3′(R)。退火溫度為60℃。產(chǎn)物長度為 206C，內(nèi)切酶：mnlI bp。 酶切片段長度為：上游：185（188）+22（20）（A）；下游：151（154）+36+24（20）（G）。 酶切產(chǎn)物于 4%的瓊脂糖凝膠電泳分析基因型。通電，穩(wěn)壓100 V。電泳時間分別為30 min。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS11.5統(tǒng)計學(xué)分析軟件中t檢驗和χ2檢驗分別對計量資料和計數(shù)資料進行數(shù)據(jù)分析。以非條件Logistic回歸方法計算表示相對風(fēng)險度的比值比（OR）及其95%可信區(qū)間（CI）。

2 結(jié)果

兩組患者 VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3種基因頻率及等位基因比較，見表1。

表1 VEGF-1154G/A SNPs的基因型和等位基因比較[n/(%)]

3 討論

多囊卵巢綜合征近年有明顯升高趨勢，但其發(fā)病機制至今尚未完全闡明。有關(guān)VEGF在PCOS疾病中高表達的機制研究較少。基因啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)可能通過改變基因的轉(zhuǎn)錄活性導(dǎo)致蛋白表達的異常。本研究結(jié)果表明，VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3種基因頻率在PCOS組和對照組中表達情況比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。G、A等位基因頻率分布在PCOS組和對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明攜帶GG基因型可明顯增加PCOS的發(fā)病風(fēng)險，VEGF-1154G/A多態(tài)性位點與多囊卵巢綜合征的發(fā)生、發(fā)展的風(fēng)險相關(guān)。

VEGF-1154G/A SNP位于基因啟動子區(qū)，體外實驗表明-1154G等位基因與VEGF蛋白高表達有關(guān)[6]。但該等位基因在PCOS疾病中表達情況，至今未有此方面的報道。本研究結(jié)果顯示，-1154G等位基因在研究組及對照組中表達有差異，說明該等位基因的表達增加了PCOS的發(fā)生，可大膽推測，該等位基因的存在可能與卵巢多囊的形成密切相關(guān)。

目前，多囊卵巢綜合征由于環(huán)境、遺傳及壓力等原因，患者發(fā)病率越來越高，越來越年輕化，越來越受到重視。因此，探討該疾病的發(fā)病機制、相關(guān)基因的多態(tài)性與PCOS的發(fā)病的關(guān)系，越來越重要。

[1]徐興華.多囊卵巢綜合征臨床表型資料分析和基于家系INSR基因多態(tài)性研究[J].山東大學(xué),2011.

[2]Hsueh C,Lin JD,Wu IC,et al.Vascular endothelial drowth factors and angiopoieyinsinpresentationsandprognosisofpapillarythyroid carcinoma[J].Journal of Surgical Oncology,2011,103(5):395-399.

[3]胡蓉,田春花 ,田進石.抗苗勒管激素及其Ⅱ型受體基因多態(tài)性在多囊卵巢綜合征患者表達的研究[J].實用婦產(chǎn)科雜志,201(9):739-742.

[4]Rodrigues P,Furriol J,Tormo E,et al.The single-nucleotide polymorphisms+936C/T VEGF and-710 C/T VEGFR1 are associated with breast cancer protection in a Spanish population[J].Breast Candcer Research and Treatment,2012,132(2):769-778.

[5]楊露.微粒體環(huán)氧化物水解酶的基因多態(tài)性與PCOS易感性關(guān)系的研究[D].安徽醫(yī)科大學(xué),2011.

[6]劉貞.CYP17基因，INS基因，LHβ基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征的相關(guān)研究[D].廣州醫(yī)學(xué)院,2011.

[7]林川.重慶地區(qū)漢族人群Fetuin-A基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征的易感性研究[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2013.

[8]高玲玲.SET在多囊卵巢綜合征高雄激素血癥中的作用機制研究[D].南京醫(yī)科大學(xué),2013.

R713

A

1674-0742（2014）05（b）－0094-02

李娜（1978-），女，，遼寧沈陽市，碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向為婦科腫瘤，郵箱：291419435@qq.com。

2014-01-24）