毛云芝子實體抗氧化活性研究

摘 要：毛云芝子實體分別用石油醚、乙酸乙酯、乙醇及水提取其中的活性物質，并對所有提取物從DPPH自由基的清除、抑制脂質過氧化力及金屬離子螯合力，這三個方面進行體外抗氧化活性的測定。結果表明：毛云芝子實體的各提取物在清除DPPH自由基、抑制脂質過氧化、金屬離子鰲合力的抗氧化活性實驗中，均表現出不同程度的抗氧化活性，且隨濃度的增加活性越強，其中乙酸乙酯提取物的抗氧化活性最高。

關鍵詞：毛云芝；抗氧化活性；有機溶劑提取物；多糖

毛云芝（CorioLus hirsutus）又名毛栓菌，隸屬于非褶菌目多孔菌科云芝屬，它是一種藥用真菌，民間常用于除風濕、療肺疾、化膿止咳等，也具有一定的抗腫瘤效果[1]。大型真菌的抗氧化活性，越來越受到關注，野生毛云芝產量較大，易于采集，而且現在已能人工栽培，所以對毛云芝抗氧化活性的研究具有一定的意義。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

毛云芝子實體采自承德圍場縣。石油醚、乙酸乙酯、乙醇等為國產分析純，DPPH、BHA等購自sigma公司，Ferrozine等購自生工生物工程（上海）有限公司。

1.2 毛云芝子實體活性物質的制備

將子實體干粉，按1：10的比例，依次用石油醚、乙酸乙酯，乙醇浸提。浸提物濃縮干燥，得到的干燥品為各有機相。用有機溶劑萃取后，往干燥的子實體干粉加入蒸餾水，80℃浸提，將提取液濃縮，加入2倍體積的95%乙醇過夜沉淀，離心得沉淀即子實體多糖。

1.3 毛云芝子實體提取物抗氧化活性測定

（1）清除DPPH·的測定方法

參考Brand-Williams W等（1995）實驗方法 [2]。以Vc和BHA作為陽性對照。

（2）抑制脂質過氧化活性實驗方法

參考Joao C·M·Barreira等（2008）的實驗方法[3]。以Vc和BHA作為陽性對照。

（3）金屬離子螯合能力測定實驗方法

參考DinisT·C·P等（1994）實驗方法[4]。以EDTA作為陽性對照。

2 結果與分析

2.1 毛云芝提取物清除DPPH的測定結果

清除DPPH自由基法是一種簡單快速的驗證提取物對自由基清除能力的方法，常用來評估抗氧化物的供氫能力[5]，毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖清除DPPH自由基的測定結果：除了毛云芝石油醚相在0.5mg/mL時不具有清除DPPH自由基的作用外，其它提取物在不同濃度下均具有不同程度的清除作用。而毛云芝石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖清除率的IC50值分別是12.23mg/mL、1.25mg/mL、1.31mg/mL、7.24mg/mL，可見乙酸乙酯提取物清除自由基的能力最強。

2.2 毛云芝提取物抑制脂質過氧化活性測定結果

脂質過氧化的終產物MDA，使細胞的新陳代謝紊亂、免疫能力減低、結構和功能的改變等，而脂類是構成生物膜的重要成分[6]。因此，抑制脂類的過氧化具有重要的生物學意義。毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖的抑制脂質過氧化活性測定結果：毛云芝各有機相的提取物在不同濃度下均具有不同程度的抑制肝脂質過氧化作用。在不同濃度下，乙酸乙酯提取物的抑制過氧化作用均高于其它提取物。其石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖IC50值分別是5.02mg/mL、0.26mg/mL、1.17mg/mL和10.54mg/mL，也表明乙酸乙酯提取物抑制脂質過氧化作用最強。

2.3 毛云芝提取物金屬離子鰲合力測定結果

抗氧化機制中螯合過渡金屬離子也是判定某物質抗氧化能力的重要指標，螯合Fe2+不僅能終止Fe2+參與的自由基鏈式反應，還能抑制高攻擊性OH的釋放，從而中斷脂質氧化的反應鏈，對抑制脂質過氧化非常重要[7]。另外，對Fe2+的絡合可以抑制含Fe2+脂肪酶的活性，延緩氧化進程。毛云芝石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖的金屬離子螯合力測定結果：毛云芝各提取物在不同濃度下均有不同程度的金屬離子螯合能力。其石油醚相、乙酸乙酯相、乙醇相和多糖IC50值分別是118.24mg/mL，4.32mg/mL，7.88mg/mL和9.16mg/mL，可見乙酸乙酯提取物螯合金屬離子的能力最強。

3 結束語

通過對毛云芝子實體的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和多糖的抗氧化力的測定，表明幾種提取物均具有不同程度的抗氧化活性。根據實驗數據所計算出的IC50值，得到乙酸乙酯提取物在清除DPPH自由基，抑制脂質過氧化和螯合金屬離子方面具有較高活性，隨提取物濃度的增加抗氧化活性增加顯著，優于或接近于陽性對照。雖然對多糖的抗氧化性研究的較早也較成熟，但實驗結果顯示毛云芝多糖的抗氧化性不高。研究較多的抗氧化物質有酚類、三萜類、黃酮類等，但乙酸乙酯提取物中的抗氧化物質有幾種、是哪種物質，就需要做進一步的分離純化才能得出結論。

參考文獻

[1]卯曉嵐.中國大型真菌[M].鄭州：河南科學技術出版社，2000.

[2]Brand-WiLLiams W.， CuveLier M. E.， Berset C.. Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity[J]. Food Science and Technology， 1995， 28： 25-30.

[3] Joao C.M. Barreira ， Isabel C.F.R. Ferreira ， M. Beatriz P.P. OLiveir ，et al. Antioxidant activities of the extracts from chestnut flower，leaf， skins and fruit[J]. Food Chemistry， 2008， 107： 1106-1113.

[4] Dinis T.C.P.， Madeira V.M.C.， ALmeida L.M.. Action of phenolic derivates （acetoaminophen， salycilate， and 5-aminosalycilate） as inhibitors of membrane lipid peroxidation and as peroxyl radical scavengers[J]. Archive Biochemistry Biophysics， 1994， 315： 161-169.

[5]彭長連，陳少薇，林植芳，等. 用清除有機自由基DPPH法評價植物抗氧化能力[J].生物化學與生物物理進展， 2000.

[6]李燕，蔡東聯，胡同杰，等. 銀耳多糖對實驗性衰老小鼠的保護作用[J]. 第二軍醫大學學報，2004.

[7]BraughLer J.M.，Chase R.L.，Pregenzer J.F. Oxidation of ferrous ion during peroxidation of various lipid substrates[J]. Biochimica Biophysica Acta， 1987， 921： 457-464.

作者簡介：李潔（1984，4-），女，籍貫：河北省定州市，學位：碩士，職稱：助理工程師，研究方向：真菌生化與分子生物學。