168例HBsAg陽性患者HBV基因型分布及臨床表現分析

夏明鏡

(上海市楊浦區安圖醫院傳染科，上海 200136)

乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)是臨床上判斷感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的標志之一。機體感染HBV后的病程各不相同，可與宿主的免疫狀態、病毒的基因型等相關，也可能與疾病及其轉歸密切相關[1]，因此了解HBV基因分布與其疾病的關系有十分重要的意義。本研究對168例HBsAg陽性患者的HBV基因型分布及臨床表現進行了分析，現報告如下。

1 對象與方法

1.1對象 將2010年1月至2013年8月期間上海市楊浦區安圖醫院傳染科收治的HBsAg陽性患者納入研究，共168例，研究期間無失訪、脫落、死亡病例。其中，男101例、女67例，年齡42～65(49.3±8.2)歲。

1.2方法

1.2.1入組患者HBV基因型的篩選 采用病毒基因組DNA抽提試劑盒[天根生物科技(北京)有限公司]分離患者血清中HBV-DNA，先用通用的外引物P1、S1-2進行第一輪HBV基因型聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)，擴增A、B、C、D、E、F六型HBV基因型的共有序列約1100 bp；然后用A、B、C、D、E、F六型HBV基因型的特異性引物進行第二輪PCR，擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳(100 V、50 min)，紫外燈下顯影，判斷HBV基因型。

1.2.2入組患者的肝炎嚴重程度 按照下述標準對入組患者的炎癥活動程度、肝纖維化程度進行分析。炎癥活動程度：匯管區炎癥、少數點狀壞死為1期；點、灶狀壞死，嗜酸小體形成為2期；出現橋接壞死為3期；橋接壞死范圍廣、累及多個小葉為4期。肝纖維化程度：匯管區出現纖維化，局限于小葉內為1期；纖維間隔形成、小葉結構保留為2期；小葉結構紊亂、未形成肝硬化為3期；出現早期肝硬化為4期。

1.2.3入組患者的肝功能指標測定 采集患者外周血5 mL，乙二胺四乙酸抗凝后，以離心半徑25 cm，3000 r/min離心10 min，取血清檢測肝功能指標，包括谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶、堿性磷酸酶、γ谷氨酰轉肽酶、總膽紅素、HBV-DNA拷貝數。谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶、堿性磷酸酶、γ谷氨酰轉肽酶、總膽紅素的檢測采用電化學發光法，HBV-DNA拷貝數的檢測采用熒光定量PCR法。

1.2.4入組患者的肝纖維化指標測定 采集患者外周血5 mL，乙二胺四乙酸抗凝后離心，收集血清檢測Ⅲ型膠原N端肽、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、透明質酸酶。

1.4統計學方法 應用SPSS 18.0軟件對數據進行

2 結 果

2.1入組患者HBV基因型的分布情況 入組的168例患者中，HBV基因型B型者132例，占78.57%；C型36例，占11.43%；A、D、E、F、G、H型均未發現(表1)。

表1 HBsAg陽性患者HBV基因型的分布情況

2.2入組患者不同HBV基因型的肝炎嚴重程度 HBV-B型患者的炎癥活動程度、肝纖維化程度的分期均低于HBV-C型患者，二者比較差異有統計學意義(P<0.05)(表2)。

2.3入組患者不同HBV基因型的肝功能指標比較 HBV-B型患者的谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉肽酶、總膽紅素、HBV-DNA拷貝數均顯著低于HBV-C型患者(P<0.05)(表3)。

2.4入組患者不同HBV基因型的肝纖維化程度 HBV-B型患者的血清透明質酸、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、Ⅲ型膠原N端肽水平均顯著低于HBV-C型患者(P<0.05)(表4)。

表2 HBsAg陽性患者不同HBV基因型的肝炎嚴重程度比較 [例(%)]

HBsAg：乙型肝炎表面抗原；HBV：乙型肝炎病毒

表3 HBsAg陽性患者不同HBV基因型的肝功能指標比較

HBsAg：乙型肝炎表面抗原；HBV：乙型肝炎病毒

表4 HBsAg陽性患者不同HBV基因型的肝纖維化指標比較 (μg/L)

HBsAg：乙型肝炎表面抗原；HBV：乙型肝炎病毒

3 討 論

HBsAg是一種相對分子質量為2.4×106的多肽，位于HBV的外殼中，雖然本身不具有傳染性，但是卻能在HBV感染宿主的過程中出現。目前，已將HBsAg作為已感染HBV的標志之一[2]。HBV進入宿主后會誘發一系列免疫反應、造成肝臟細胞的變性、壞死。HBV感染后的臨床過程各異、疾病譜各不相同，其病情的進展與宿主免疫狀態、病毒感染方式等密切相關[3]。

近年來的研究發現，HBV基因組DNA序列的不同也參與HBV感染宿主的過程[4]。不同的HBV基因型患者可表現出不同的疾病過程，部分患者可表現為HBsAg攜帶者，但無明顯的臨床癥狀；部分患者表現為慢性乙型肝炎，發生肝細胞的變性壞死；部分患者則可在肝細胞變性壞死的基礎上出現彌漫性纖維化和假小葉的形成，嚴重者可發展為肝硬化和肝癌[5]。

已知的HBV基因型共有A、B、C、D、E、F、G、H八種類型，相關的研究已經發現其分布有明顯的地區差異[6]。A型主要分布在歐洲的西北部及北美洲；B型、C型主要分布在亞洲的東部及南部；D型多見于地中海地區以及中東地區；E型主要分布在撒哈拉沙漠區域；F型、H型主要見于美國及中美洲；G型僅在美國、法國兩個國家發現[7]。相關的流行病學資料顯示，我國HBV的基因型主要為B、C兩種類型[8]，本研究也同樣發現168例入組患者中HBV-B型占78.57%、C型占11.43%，其余類型未發現。

目前的多數研究認為，HBV-C型感染后宿主的疾病進展較快、肝功能破壞較重、預后較為不理想[9]。研究對168例HBsAg陽性患者的臨床表現進行了分析，旨在為探尋不同HBV基因型患者的臨床特征提供參考。本研究首先比較了HBV-B型患者與HBV-C型患者的肝炎嚴重程度，由結果可知：HBV-B型患者的炎癥活動程度、肝纖維化程度均弱于HBV-C型患者，說明HBV-B型感染后的整體病情相對較輕。

為了進一步確定兩種基因型HBV感染后的疾病情況，本研究對肝功能指標和肝纖維化指標進行了比較分析，結果：HBV-B型患者的谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉肽酶、總膽紅素、HBV-DNA拷貝數以及血清透明質酸、層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、Ⅲ型膠原N端肽水平均低于HBV-C型患者。上述指標能夠直接反映肝細胞的損傷程度和肝臟組織發生纖維化的程度，且結果顯示HBV-B型感染后肝細胞破壞較輕，纖維化程度較弱。

本研究納入的樣本量相對較少，若要得到更為確切可靠的結論需要在下一步工作中收集更多的病例。但是通過上述分析可以得出初步的結論：在我國HBsAg陽性的患者中，HBV基因型主要為B型和C型；且B型感染后的炎癥活動程度、肝纖維化程度均較弱，整體病情相對較好。

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