鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌診斷中的臨床應用

周 珣，吳 皖

(孝感市中心醫院檢驗科，湖北 孝感 432000)

鼻咽癌是臨床常見的頭頸部惡性腫瘤性疾病，鼻咽癌在全球大多數地區和國家并不呈現高發態勢，主要的發病地區集中于亞洲，其中中國是鼻咽癌的高發國家，鼻咽癌在我國廣東地區的發病率已經達到20/10萬[1]，而在上海地區發病率為4.7/10萬[2]，由于我國人口基數較大的原因，每年新增的鼻咽癌患者人數在10萬人次之上，發病情況在惡性腫瘤性疾病中不容樂觀，晚期鼻咽癌可侵犯患者的腦神經、三叉神經并且可以影響患者正常的視力和聽力，遠處轉移可造成患者死亡。目前針對鼻咽癌的治療以放射治療為主，早期鼻咽癌的放射治療效果較好，調強放療可以有效地提高鼻咽癌的區域控制率，增強患者的遠期療效，從而達到改善預后的目的[3]，因此早期對鼻咽癌做出診斷對于鼻咽癌患者的預后具有十分重要的意義，因此本研究分析鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法在鼻咽癌檢測當中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2009年3月至2013年1月在孝感市中心醫院就診具有高度鼻咽癌危險的患者326例作為研究對象，其中男219例、女107例，年齡31～75(48.29±4.86)歲，在入組的326例患者中，有鼻咽癌家族史者201例，吸煙者198例，EB病毒(Epstein-Barr virus)感染者162例，居住地環境污染嚴重者157例，患者職業有接觸有害物質危險者135例。排除存在嚴重肝、腎功能不全，嚴重血液系統疾病，自身免疫性疾病和臨床資料不全的患者。在進行血清學檢測后，通過酶聯免疫吸附測定法檢測EB病毒抗體，經過病理學確診為鼻咽癌者117例，無鼻咽癌的高?；颊?09例。

1.2方法 鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法：將患者血清和磷酸緩沖液(phosphate buffered solution，PBS)按照1∶5的比例進行稀釋，之后將10 μL血清置于六孔板中，在37 ℃的條件下孵育50 min，再用PBS進行沖洗，在充分清洗之后將生物素化學抗人IgA按照10 mL/L放入孔中，在孵育50 min之后，繼續用PBS進行沖洗，在充分清洗之后將鏈霉親和素(濃度為20 mL/L)放入孔中，再孵育50 min，之后用PBS進行沖洗，最后加入二氨基聯苯胺溶液，顯色5 min后采用顯微鏡觀察。常規免疫酶法：具體參照潘少霞等[4]的免疫酶法。

1.3觀察指標 對鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法與常規免疫酶法在鼻咽癌患者與鼻咽癌高危人群但無鼻咽癌患者的IgA/病毒殼體抗原(viral capsid antigen，VCA)和IgA/早期抗原(early antigen，EA)的檢出率進行觀察。

1.4統計學方法 應用SPSS 13.0統計學分析軟件對數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗和確切概率法，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1兩種方法對確診鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結果 鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA和IgA/EA檢出陽性率顯著高于常規免疫酶法的檢出陽性率，比較差異均有統計學意義(P<0.05)(表1)。

表1 兩種方法對確診鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結果比較 [例(%)]

IgA：免疫球蛋白A；VCA：EB病毒殼抗原；EA：早期抗原

2.2兩種方法對鼻咽癌高危人群但無鼻咽癌患者IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結果 鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA和IgA/EA檢出陽性率與常規免疫酶法的檢出陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.179，P>0.05)(表2)。

表2 兩種方法對鼻咽癌高危人群IgA/VCA和IgA/EA的檢驗結果比較 [例(%)]

IgA：免疫球蛋白A；VCA：EB病毒殼抗原；EA：早期抗原

3 討 論

鼻咽癌是一種高發于我國南部地區的惡性腫瘤，目前對于鼻咽癌的發病機制還不清楚，但是早期診斷可以明顯改善鼻咽癌患者的預后，放射是目前治療鼻咽癌最為有效的方式之一，調強放療的出現更是在減少了放療并發癥的基礎上提高了鼻咽癌的治療效果[5]，雖然鼻咽癌的放療敏感性較強，但是鼻咽癌的遠處轉移仍然是放療失敗和患者死亡的主要原因[6]。因此，在早期對鼻咽癌進行診斷和及時治療是對鼻咽癌患者預后改善的關鍵。EB病毒人類皰疹病毒，在大量研究中被證實為鼻咽癌發病高度相關的危險因素[7-8]。有研究發現，在鼻咽癌患者的血清當中EA和VCA水平較高[9]。免疫酶法對于IgA/VCA和IgA/EA的檢測是臨床上常用的早期診斷鼻咽癌的血清學檢測方法，免疫酶法雖然能夠在一定程度上對鼻咽癌進行早期篩查，但是免疫酶法仍然存在缺乏客觀性和精確性的缺點；而在臨床檢驗學發展中出現的酶聯免疫吸附測定法，對鼻咽癌進行早期篩查，其陽性率不高，限制了其使用[10]。因此，如何尋找一種新的檢驗方法就顯得尤為必要。

鏈霉親和素是一種在鏈霉菌中分泌的蛋白質，鏈霉親和素所擁有的特點包括其相對分子質量較小(65×103)，等電點顯示其表現為酸性；同時，鏈霉親和素并不附帶糖基，這可以促使鏈霉親和素表現為更高的特異性吸附，1個鏈霉親和素分子可以同時特異性吸附4個生物素分子，并且彼此之間結合穩定，而與此同時生物素分子又可以與特異性的抗體進行結合，在此過程中便形成了一個生物反應抗體的有機系統。吳在榮等[11]利用鏈霉親和素-生物素免疫分析法對人胰島素進行分析后發現，其回收率、靈敏度、線性范圍和批間變異系數均理想地符合臨床要求，同時操作也較為簡便。王金龍等[12]發現，鏈霉親和素-生物素免疫分析法測量人甲胎蛋白的回收率、靈敏度、線性范圍和批間變異系數較為理想。本研究發現，采用鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法對117例鼻咽癌患者的IgA/VCA以及IgA/EA檢出率均高于常規免疫酶法在209例未患鼻咽癌患者當中，鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法的IgA/VCA檢出率與常規免疫酶法無差別，IgA/EA的檢出率則稍高于常規免疫酶法，這可能與此時為非鼻咽癌患者有關。

綜上所述，鏈霉親和素-生物素放大免疫酶法能夠較常規免疫酶法更為靈敏地診斷鼻咽癌。

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