HPLC法測定參蘇片中柚皮苷的含量

劉 巖

（山東藥品食品職業學院，山東 威海 264210）

參蘇片為感冒類非處方藥藥品，狀態為淡棕色的片狀劑型，其氣香，味微苦，由黨參、紫蘇葉、葛根、前胡、茯苓、姜半夏、陳皮、枳殼、桔梗、甘草、木香、大棗、生姜等13味藥材組成。具有疏風散寒，祛痰止咳之功。主要用于體弱風寒感冒，惡寒發熱，頭痛鼻塞，咳嗽痰多，胸悶嘔逆［1］。風熱感冒者不適用。風寒感冒，臨床上多表現為微惡風，發熱重，口渴，有汗，鼻流濁涕，咽喉紅腫熱痛，咳吐黃痰，但若伴有肝病、糖尿病、心臟病、高血壓、腎病等慢性病嚴重者、孕婦或正在接受其他治療的患者應慎用或在醫師指導下服用。由于參蘇片制劑中君藥為枳殼，其主要活性成分之一為柚皮苷［2］，為保證參蘇片制劑的內在控制質量，本實驗采用高效液相色譜（HPLC）法對制劑參蘇片處方中枳殼藥材的有效活性成分柚皮苷進行含量測定，獲得比較滿意的效果，該方法重現性好，結果準確可靠，有助于控制該制劑的質量，確保臨床用藥的有效性和安全性［3］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 電子天平（AUW20D，島津）；高效液相色譜儀（1100，安捷倫）；紫外可見分光光度計（UV-2550，島津島津公司）；超聲波清洗器（KQ-50B，昆山市超聲波有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-4，金壇市榮華儀器制造有限公司）；索氏提取器（JOYN-SXT-02，上海喬躍電子有限公司）；微孔濾膜過濾器（ZHAA-1000，北京中慧天誠科技有限公司）。

1.2 試藥 柚皮苷對照品（批號：110922-200309中國藥品生物制品檢定所提供）；參蘇片（3批，批號：120601、120602、120603，成都九芝堂金鼎藥業有限公司）；乙腈為色譜純，甲醇、乙醇、丙酮等其他試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：BDS C18Hypersil（250nm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（21.5∶80.5）；檢測波長：283nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取干燥至恒重的柚皮苷對照品一定量，精密稱定后，置棕色量瓶中，然后加一定量甲醇進行超聲波溶解，再加甲醇定容制成濃度15μg/mL的溶液，作為柚皮苷對照品溶液備用。

2.2.2 供試品溶液 取裝量差異項下的參蘇片，粉碎，過篩，粉末混勻，研細，取3.0g，精密稱定后，置于具塞的錐形瓶中，再精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，采用恒溫回流提取1.5h，放冷，密塞，再稱定重量，并用甲醇補足減失的重量，搖勻，用濾紙過濾，收集續濾液，低溫蒸干，將蒸干后的殘渣加少量水溶解，得提取物水溶液，提取物水溶液通過聚酰胺色譜柱洗脫，以水為洗脫液洗滌多次，棄去水溶液后，再用甲醇50mL為洗脫液分次洗滌，收集甲醇洗脫液，取一定量的甲醇洗脫液用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到濾液作為供試品溶液備用。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性范圍考察 取已制備好的柚皮苷對照品溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9μL的柚皮苷對照品溶液，依次注入高效液相色譜儀，并記錄測得的色譜圖，然后測定其峰面積，以柚皮苷質量為橫坐標（X），以峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線并計算，得到標準曲線的回歸方程為：Y=25 856X－600.2（Y，峰面積，X，質量），r=0.999 9（n=5）。結果表明，柚皮苷對照品在0.015～0.135μg范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。

2.3.2 精密度試驗 精密吸取已制備好的柚皮苷對照品溶液（15μg/mL）5μL，按正文色譜條件，連續重復進樣5次，測定柚皮苷的峰面積，計算5次測定柚皮苷峰面積的平均值為56 878.8，RSD=0.5％（n=5）。結果表明，測定儀器的精密度良好。

2.3.3 穩定性試驗 配制同一供試品溶液（批號：20120601），精密吸取10μL，按正文色譜條件分別在0、2、4、8、12h測定供試品溶液峰面積，計算得柚皮苷峰面積的平均值為562 128.21，RSD=1.1％（n=5）。結果表明，供試品溶液在12h內化學性質較穩定，其穩定性良好。

2.3.4 重復性試驗 精密稱取柚皮苷提取物（批號：20120601）的樣品共5分，分別按照供試品溶液制備方法制備，按照正文色譜條件測定，分別按照標準曲線計算樣品溶液中柚皮苷的質量，其質量的平均值為0.185mg，RSD=2.54％（n=5）。結果表明，測定方法的重復性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 取已知含量的同一批號樣品（批號：20120601）5分，精密稱定，再分別精密加入柚皮苷對照品（配制成溶液加入），按照正文供試品溶液的制備方法，制備測定加樣回收率的供試品溶液，然后再分別測定5分樣品溶液的含量，最后計算加樣回收率，計算得其加樣回收率的平均值為98.53％，RSD=0.5％（n=5）。結果表明，本方法具有較好的加樣回收率。

2.3.6 樣品含量測定 按照對照品溶液正文制備方法制備對照品溶液，按照供試品溶液正文制備方法制備供試品溶液3批（批號：120601、120602、120603，成都九芝堂金鼎藥業有限公司），按照正文色譜條件進行測定，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入高效液相色譜儀，并記錄相應的色譜圖，以樣品中柚皮苷峰面積來計算柚皮苷的含量，樣品中的柚皮苷含量分別為0.19mg/g（批號：120601）、0.21mg/g（批號：120602）、0.22mg/g（批號：120603）。

3 結論

3.1 測定波長的選擇 取柚皮苷對照品適量，加甲醇制備成適宜濃度的溶液，進行紫外全波長范圍掃描，結果目標成分在283nm波長處吸收值最大，因此選擇283nm為測定波長。

3.2 提取溶劑、方法、時間的選擇 取樣品適量，實驗過程中分別考察了甲醇、95％乙醇、80％乙醇、丙酮4種提取溶劑，得到提取物收率最高的溶劑為甲醇，故選擇甲醇為提取溶劑；實驗過程中分別考察了冷浸、超聲、回流3種提取方法［4-8］，得到提取物收率最高的提取方法為回流提取，故選擇提取方法為回流提取；實驗過程中分別考察了提取時間為1h、1.5h和2h所獲得的收率［9-11］，得到提取物收率最高的時間為1.5h，故選擇提取時間為1.5h。根據以上考察，最后確定以甲醇為溶劑回流提取1.5h，收率大，雜質干擾小。

3.3 流動相的選擇 通過大量實驗研究，最后選擇了2個流動相系統：A甲醇∶1％冰醋酸（30∶70），B乙腈∶水（21.5∶80.5）；A系統液相色譜圖表現為饅頭峰，改變為B系統后峰形得到很大改善，也無拖尾現象，保留時間適中，且主峰與雜質峰分離度符合要求，故選擇乙腈-水（21.5∶80.5）作為流動相。

本研究建立了高效液相方法測定參蘇片中柚皮苷的含量，方法穩定可行，專屬性強，精密度高，重復性好，其他組分干擾小，回收率高。該研究可為參蘇片的質量評價提供理論依據。

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