不同廠家六味地黃制劑溶出度的測定

張 利 胡容峰* 葉 蕾 丁領振

(安徽中醫藥大學，安徽 合肥 230038)

不同廠家六味地黃制劑溶出度的測定

張 利 胡容峰* 葉 蕾 丁領振

(安徽中醫藥大學，安徽 合肥 230038)

目的 建立六味地黃制劑的丹皮酚和馬錢苷溶出測定方法，并對市售不同生產廠家、不同批號的六味地黃制劑的丹皮酚和馬錢苷溶出度進行考察及比較。方法 采用溶出度第三法（小杯法）測定六味地黃丸的溶出度，以高效液相法測定其濃度，再按威布爾分布模型原理計算溶出參數，并對溶出參數用方差分析。結果 不同劑型、不同廠家的樣品溶出參數的方差分析結果具有顯著性差異（P＜0.01）。結論 該方法準確、可靠；不同劑型、不同廠家的六味地黃制劑溶出度存在差異，同廠生產的不同批號制劑間溶出效果基本相似。

高效液相法；溶出度；丹皮酚；馬錢苷

六味地黃丸系北宋名醫錢仲陽之名方，始創于其《小兒藥證直訣》，名六味者，其由六味藥組成：熟地黃、酒萸肉、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓。總體來講六味地黃丸的功效為滋補腎陰[1]，它是治療腎陰不足的基本藥方，主要用于腎陰虛引起的腰膝酸軟、頭暈耳鳴、遺精盜汗等癥狀[2]。因其價廉物美，該藥現已在我國市場上廣泛使用。本實驗中選用的指標成分為脂溶性成分代表丹皮酚和水溶性成分代表馬錢苷，丹皮酚（paeonol）是中藥牡丹皮的主要活性成分，具有抗炎、抗菌、抗變態反應、免疫調節、鎮痛等藥理作用。馬錢苷（loganin）是中藥山茱萸中的主要活性成分，對非持異性免疫功能有增強作用，具有延緩衰老和抗癌等的藥理作用。作者未見現行藥典與現有文獻對不同廠家生產的各劑型進行溶出度測定、分析。為此，我們收集7種市售六味地黃制劑來進行體外溶出度和含量考察，并結合藥物的吸收特點進行分析，為評估和控制藥物質量提供依據，供臨床參考。

1 材 料

1.1 儀器

UV-1600（上海美普達儀器有限公司）；ZRS-8G型智能溶出實驗儀（天大無線電廠）；ML204型電子天平（上海梅勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥

丹皮酚標準品（中國藥物生物制品檢定所，批號：110708-200506）；馬錢苷標準品（中國藥物生物制品檢定所，批號：111640-201005）；六味地黃丸（濃縮丸）：（A廠，批號：201007044，201012064，201101012；B廠，批號：100979，101044，1011121；C廠，批號：0070313，0073741，1074766）；六味地黃丸（水蜜丸）：（D廠，批號：9034070，0033148，0033149）；六味地黃膠囊（E廠，批號：20100202，20100801，20100903；F廠，批號：100117，100322，101002）；六味地黃軟膠囊（G廠，批號：100206，100515，100611）。乙腈為色譜純；水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 溶液配制

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取丹皮酚標準品4 mg和馬錢苷標準品3 mg于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容。

2.1.2 濃縮丸供試品溶液的制備

取本品適量，研細，取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱重，超聲溶解，放冷，再稱重，用50%甲醇補足失重，搖勻即得。

2.1.3 水蜜丸供試品溶液的制備

取本品適量，切碎，取約0.3 g，其余同濃縮丸。

2.1.4 硬膠囊供試品溶液的制備

取本品內容物約0.2 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解，放至室溫后用甲醇定容至刻度，搖勻即得。

2.1.5 軟膠囊供試品溶液的制備

取本品內容物約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加70%乙醇50 mL，稱重，加熱回流1 h，稱量，用70%乙醇補足失重，搖勻即得。

2.2 色譜條件及系統適用性

流動相[3]：乙腈-0.05%磷酸，A為磷酸，B為乙腈，梯度洗脫（表1）檢測波長為馬錢苷234 nm，丹皮酚274 nm，柱溫25 ℃，流速1.0 mL/min。

表1 梯度洗脫程序

在上述色譜條件下，取對照品和供試品溶液進樣，理論塔板數＞5000、分離度、拖尾因子均達到要求，結果見圖1。

圖1 色譜圖 (A圖為標準品，B圖為六味地黃制劑，1為馬錢苷，2為丹皮酚)

2.3 線性范圍的考察

精密吸取2.1項下混標溶液1、3、5、7、9 mL分別置于10 mL容量瓶中加甲醇稀釋至刻度，進樣20 μL，以峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標進行線性回歸。馬錢苷回歸方程為A=28789C+13569，R2=0.9992，線性范圍是3～27 μg/mL；丹皮酚回歸方程為A=95887C+90515，R2=0.9991，線性范圍是4～36 μg/mL；儀器精密度良好，方法重現性良好。

表2 不同廠家六味地黃丹皮酚和馬錢苷體外溶出參數

表3 不同廠家六味地黃丹皮酚和馬錢苷f2值

2.4 溶出度測定

2.4.1 丸劑溶出度測定

各取6份六味地黃濃縮丸8粒和六味地黃水蜜丸30粒，精密稱重，按2010版藥典二部[4]溶出度測定法第三法，以脫氣人工胃液（無酶）200 mL為溶出介質[5]，轉速為100 r/min，溫度為37 ℃，分別于30、60、120、240、360、480 min定點取樣5 mL（同時補加等量介質），0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液20 μL測定，計算出各時間點丹皮酚和馬錢苷的量，作為溶出量。以六味地黃丸中丹皮酚和馬錢苷總含量為溶出最大量100%，計算樣品累積溶出百分率，4個廠家六味地黃丸的釋放曲線圖見圖2。

圖2 六味地黃丸釋放曲線圖

2.4.2 膠囊溶出度測定

各取6份六味地黃膠囊6粒，精密稱量，其余同2.4.1項下丸劑溶出度測定，分別于5、10、20、30、60、120、180 min定點取樣5 mL（同時補加等量介質），其余同2.4.1項下丸劑溶出度測定，3個廠家六味地黃膠囊釋放曲線圖見圖3。

圖3 六味地黃膠囊釋放曲線圖

3 數據處理

不同廠家不同劑型樣品溶出曲線比較：根據威布爾分布模型原理，用Excel處理溶出度數據[6]，計算7個廠家六味地黃丸的溶出參數（m、Td、T50），并用t檢驗進行多組間兩兩比較，對溶出參數進行方差分析。結果顯示，不同廠家六味地黃丸溶出參數m、Td、T50，經方差分析，P＜0.01，均具有顯著性差異，結果分別見表2。

在嚴格的溶出條件下，選擇具有較高和較穩定的溶出率的批次作為參比制劑，本實驗均選擇批次1作為參比制劑，以f2因子法考察另外兩個批次的溶出曲線。

其中Rt和Tt為各取樣點參比和供試制劑的平均溶出率，n為取樣點個數。當50≤f2≤100時，則供試制劑的溶出曲線與參比制劑相似。計算供試制劑的f2值見表3。

4 討 論

本實驗結果顯示對于丹皮酚而言軟膠囊的平均累計溶出百分率較普通膠囊制劑偏低，原因可能是軟膠囊內容物中填充有植物油，溶出過程中植物油包裹在藥物周圍，一定程度上減緩了藥物的溶出速率。各廠家批次間，有些廠家的丹皮酚溶出在各批次間有差異性，而馬錢苷不具有差異性，原因可能是丹皮酚是難溶性成分，而馬錢苷為易溶性成分。

對于口服固體制劑，溶出度作為一種簡單易行的方法，在一定條件下與制劑的生物利用度有一定的相關性[7]，故溶出度實驗已作為一種控制藥品內在質量的重要指標，廣泛應用于藥品的研發、生產和監督檢驗中。評價溶出曲線相似性的方法有很多種，可分為非模型依賴法和模型依賴法，前者包括有f2因子法、溶出效率法、相似等效限法等，后者包括Weibull模型、Logistic模型、Higuchi模型等[8]。

本實驗中，因從直觀上可看出不同廠家的六味地黃丸溶出曲線不相似，則采用威布Weibull分布模型法對各曲線評價。Weibull分布函數的數學表達式如下：

其中，F(t)：累積溶出百分率；A：位置參數；m：形狀參數；B：尺度參數；Td：特征數，藥物溶出63.2%所需的時間；T50：溶出參數，指藥物溶出50%所需的時間。

本實驗中，因從直觀上可看出不同廠家的六味地黃丸溶出曲線不相似，則采用威布Weibull分布模型法對各曲線評價。

對于同一廠家的不同批次的溶出曲線，本實驗采用相似因子f2來評價曲線間相似性。相似因子f2被美國FDA推薦為比較兩條溶出曲線相似性的首選方法。其基本原理：是基于生物等效性的基本假設進行體外溶出度的等效性評價。f2可作為評價工藝或處方中輔料改變時制劑溶出曲線間的差異性評價參數，也可用于評價研制制劑與市售制劑間溶出曲線的差異性。這種方法對于有3個或3個以上時間點構成的溶出曲線間的比較更為有效。

[1] 吳昆侖,吳眉.六味地黃丸(湯)藥理研究及臨床應用新進展[J].中成藥,2005,27(11):15-18.

[2] 張艷,劉西建.六味地黃丸的藥理研究進展[J].國醫論壇,2004,19 (2):50-52.

[3] 周燦.基于HPLC法測定不同六味地黃丸中丹皮酚溶出度的研究[J].中國實用醫藥,2009,4(5):155-156.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:附錄XC.

[5] 韓玲玲,胡容峰.高效液相色譜法測定六味地黃丸的溶出度[J].中國實驗方劑學雜志,2007,13(4):8-10.

[6] 邱家學.充分利用EXCEL數據處理功能巧算Weibull分布位置參數[J].藥學進展,2004,28(10):464-466.

[7] Costa P,Manuel J,Lobo S.Modeling and comparision of dissolution profiles[J].Eur J Pharm Sci,2001,13(1):123-133.

[8] 陳賢春,吳清,王玉蓉,等.關于溶出曲線比較和評價方法[J].中國醫院藥學雜志,2007,27(5):662-664.

R282.71

：B

：1671-8194（2014）07-0065-03

國家自然科學基金資助項目（81173556）；國家科技支撐計劃——新安醫家名方驗方篩選評價研究(項目編號2012BAI26B03)；安徽省高層次人才創新創業資金（項目編號：2009Z061）

*通訊作者：E-mail:hurongfeng@163.com