粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子在初發和復發性鼻息肉中的表達

劉屹 靳元嶸 張淑芳 付紹喜

鼻息肉是耳鼻喉科常見病，復發率高，其病理特征表現為鼻腔和鼻竇黏膜水腫和炎性改變，當前認為是多種細胞因子在局部病灶內長期存在并使組織發生相應的病理變化。本研究通過檢測初發鼻息肉和復發鼻息肉組織中粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulation factor，GM-CSF)表達的差異性，從而明確它在疾病發病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有標本均來自于2006年1月至2012年10月在我科住院行鼻內鏡手術的患者，其中初發鼻息肉患者40例(初發鼻息肉組)，選擇初發并且單發或多發，明顯帶蒂，男22例，女18例;年齡18～42歲，平均30.6歲;鼻內鏡手術后送病理證實為息肉。復發鼻息肉患者40例(復發鼻息肉組)，與初發性鼻息肉組患者無重疊，復發性鼻息肉組患者前期手術徹底，且術后經過規范的全身和局部藥物治療和定期復查等綜合治療措施，隨訪1年以上復發者。其中男24例，女16例;年齡35～68歲，平均48歲，復發鼻息肉組均為多發，鼻腔和鼻竇黏膜廣泛炎性反應，正常黏膜和息肉界限不清楚，鼻竇CT結果可見多發或全組鼻竇炎。另以20例鼻中隔偏曲伴下鼻甲肥大，行下鼻甲部分切除術患者的下鼻甲黏膜組織做正常對照，其中男13例，女7例;年齡18～46歲，平均32歲。全部病例均無全身疾病、免疫系統疾病和其他鼻部疾病，所有患者術前1個月停用全身和局部抗生素和糖皮質激素類藥物治療，以減少對實驗結果的影響。入院后采集病理標本，采集標本后開始上述藥物治療，擇期手術。

1.2 試劑和方法 標本于4%多聚甲醛中固定，常規脫水，石蠟包埋。兔抗人GM-CSF多克隆抗體和即用型SABC型免疫組織化學試劑盒，DAB顯色試劑盒均購自武漢博士德生物技術公司。采用SABC免疫組化法觀察GM-CSF的表達。

1.3 結果判定 以細胞漿或細胞膜出現棕黃色者為陽性細胞，選取其中2張染色較好(陽性細胞清晰均勻，背景基本無染色)的組織切片作為統計分析對象，顯微鏡一側目鏡安裝細胞計數網格(5 mm×5 mm，6×6條線)，計數陽性細胞的數量。低倍鏡下先觀察每張切片的陽性細胞表達區域，從中隨機觀察5個高倍視野。采用染色結果半定量分析方法:高倍鏡(×400)下計數5個視野的陽性細胞，陽性細胞≤10%計0分、11%～30%計1分、31%～50%計2分、51%～70%計3分、≥71%計4分;按染色強度，無著色的是0分、淺黃色的是1分、棕黃色的是2分、棕褐色的是3分。陽性細胞百分率與染色強度計分相乘為最終結果，結果分為4個等級:0分為陰性(-)，≤2分為弱陽性(+)，3～4分為中度陽性(++)，＞4分為強陽性(+++)。

1.4 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，2組間和2組內表達的比較采用Wilcoxon秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病理切片GM-CSF在初發鼻息肉和復發鼻息肉中陽性表達區域的主要組織學變化為組織內可見大量炎性細胞活化，積聚。陽性產物定位主要是胞漿和胞膜，呈現程度不等的黃色，陽性細胞主要分布于黏膜下固有層的和血管周圍，主要是嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、漿細胞等炎性細胞。

2.2 GM-CSF的表達 在初發性鼻息肉組織中，有14例表達為(+)～(+++)，26例表達為(-);在復發性鼻息肉組織中，有27例表達為(+)～(+++)，13例表達為(-)，2組間比較差異有統計學意義(P＜0.05)。其中，在初發性鼻息肉中，男性為22例，有8例表達為(+)～(+++)，14例表達為(-);女性為18例，有6例表達為(+)～(+++)，12例表達為(-)，不同性別間比較差異無統計學意義(P=0.85)。在復發性鼻息肉中，男性為24例，有16例表達為(+)～(+++)，8例表達為(-);女性為16例，有11例表達為(+)～(+++)，5例表達為(-)，不同性別間比較差異無統計學意義(P=0.75)。在正常對照組無明顯表達。見表1～3，圖1～3。

表1 GM-CSF在初發性鼻息肉和復發性鼻息肉中的表達n=40，例

表2 GM-CSF在初發性鼻息肉不同性別中的表達 例

表3 GM-CSF在復發性鼻息肉不同性別中的表達 例

圖1 GM-CSF在初發性鼻息肉中的表達(免疫組化×400)

圖2 GM-CSF在復發性鼻息肉中的表達(免疫組化×400)

圖3 GM-CSF在正常鼻黏膜組織中的表達(免疫組化×400)

3 討論

鼻息肉是發生在鼻腔和鼻竇黏膜的慢性炎癥性疾病，在耳鼻咽喉頭頸外科臨床中發病率高，病因以局部炎癥和變態反應為主，組織病理學以上皮增生、間質水腫和多種炎性細胞浸潤為特征，浸潤的炎性細胞可釋放多種細胞因子，細胞因子對于病理變化的發生起到極其重要的作用，其中復發性鼻息肉表現得更加明顯，主要表現為多組或者全組鼻竇、鼻腔黏膜水腫、炎癥。本文所研究的復發性鼻息肉組患者前期手術徹底，術后經過規范的藥物和局部治療和定期復查等綜合治療措施，隨訪1年以上，且患者無全身疾病、免疫系統疾病和其他鼻部疾病，所以考慮術后復發與鼻腔反復慢性感染有關系。

GM-CSF是一種分子量約為18 000～32 000的酸性糖蛋白，其主要作用是維持粒細胞系和單核巨噬細胞系細胞的存活、誘導其生長，并使其功能增強。鼻息肉為慢性炎癥性疾病，在發病過程中伴有炎性細胞的增生、趨化和集中，GM-CSF是一種能夠調節炎性細胞活性的細胞因子，所以也存在于鼻息肉組織中。GMCSF主要由激活的T細胞和巨噬細胞產生。

本研究結果顯示，GM-CSF在初發性和復發性鼻息肉組織中的表達相比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，在正常下鼻甲黏膜中無明顯表達，表明GMCSF的高表達與鼻息肉的容易復發有關，GM-CSF在鼻息肉發生、發展和預后中起重要作用。GM-CSF陽性細胞主要分布于黏膜下和血管周圍，主要是嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、漿細胞等炎性細胞。這充分說明，嗜酸性粒細胞等炎性細胞的浸潤程度與GM-CSF在鼻息肉中的表達水平有密切關系［1］，GM-CSF可增強炎性細胞向病灶的遷移和附著［2］，張平等［3］的研究證實，GM-CSF促進了嗜酸性粒細胞的遷移和聚集，因此，GM-CSF是與嗜酸性粒細胞等炎性細胞關系密切，且對它們的生物學活性起主要調控作用的細胞因子［4］。一方面，炎性細胞活化后，增加了GM-CSF和其他細胞因子的分泌和表達;另一方面，GM-CSF又活化了鼻息肉中的炎性細胞，通過正反饋不斷促進炎性細胞增多和聚集，使它們的存活時間延長，凋亡時間延遲，兩方面相互作用，相互促進，使炎癥長期存在，致使鼻息肉容易形成和復發。研究還發現，在初發性鼻息肉中不同性別間比較差異無統計學意義(P＞0.05)。在復發性鼻息肉中不同性別間比較差異也無統計學意義(P＞0.05)，這表明GM-CSF的表達與性別無關。

總之，鼻息肉是以嗜酸性粒細胞等炎性細胞浸潤為特征的慢性炎癥性疾病，炎性細胞的浸潤和GMCSF等細胞因子的釋放與鼻息肉的發病有重要關系。

1 檀艷麗，田從哲，薛娟，等.人鼻息肉及鼻息肉病組織GM-CSF、IL-5的表達變化及臨床意義.山東醫藥，2010，50:28-29.

2 林欣然，李杰恩，張龍城，等.IL-5和GM-CSF在慢性鼻-鼻竇炎手術前后鼻竇黏膜中的表達及意義.中國耳鼻咽喉顱底外科雜志，2009，15:326-330.

3 張平，徐文鋒，張曉娥，等.白細胞介素-3和粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子在鼻息肉組織中的表達及其意義.臨床耳鼻咽喉科雜志，2006，20:1093-1094.

4 羅曉，徐開倫.鼻息肉發病機制中Th2類相關細胞因子與嗜酸性粒細胞的關系.中國耳鼻咽喉顱底外科雜志，2012，18:244-248.