肺癌患者血清中血管內皮生長因子的表達及與臨床分型和分期的關系

黃冬梅 鄒雪松 胡衛盟 趙志國

腫瘤流行病學資料顯示，肺癌占惡性腫瘤死亡的第一位［1］。在臨床上多依靠影像學診斷和病理學，超過半數的患者一經發現就已經是肺癌晚期。因此，肺癌的早期診斷是提高患者生存率的關鍵，而血管內皮生長因子(VEGF)的檢測也許能作為肺癌早期診斷的一項重要指標［2］。VEGF是一種選擇性促內皮細胞有絲分裂原，它能增加血管通透能力，促進內皮細胞增殖、分裂，促進血管新生，同時可引起細胞外基質改變而有利于腫瘤細胞在合適的微環境下形成新的轉移灶舊［3，4］，是目前發現最重要的血管形成促進劑之一，對腫瘤的浸潤和轉移有重要影響。研究證實，VEGF與肺癌的新生血管和淋巴管的生成以及腫瘤的生物學行為密切相關［5，6］。我們通過酶聯免疫學方法測定健康人群和肺癌患者血清VEGF的水平，旨在探討VEGF在肺癌的發生發展中的作用和作為一種腫瘤標志物的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 肺癌組:本實驗研究對象，肺癌患者(肺癌組)，均為2009年9月至2013年5月在河北承德市中心醫院胸外科住院的經病理證實為肺癌的患者，去除血管增生性疾病和合并其他癌癥的患者85例，男57例，女28例;年齡(55±11)歲;其中I～Ⅱ期14例，Ⅲ期30例，Ⅳ期41例;其中腺癌31例，鱗癌43例，大細胞癌6例，小細胞癌5例。

1.1.2 肺部良性疾病組:為同期本院住院的肺部良性疾病患者40例，其中男25例，女15例;年齡(59±10)歲;支氣管擴張癥5例，肺結核10例，慢性阻塞性肺疾病5例，慢性支氣管炎5例，肺炎10例，肺膿腫5例;根據其臨床表現、實驗室檢查及醫學影像學等綜合檢查確診。

1.1.3 健康對照個體(健康組)，40例健康對照為本院健康體檢的人員，其中男27例，女13例;年齡(53±8)歲。

1.2 標本的采集 符合入選標準的所有受檢者均采肘靜脈血4 ml，3 000 r/min離心15 min，分離血清，取上清液，分裝保存于-30℃冰箱待測。

1.3 VEGF的檢測 本實驗采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定。儀器為美國BioRad公司的BioRad450酶標儀。試驗過程:在20～25℃室溫下進行。(1)取出試劑盒，放置30 min，使試劑平衡至室溫。(2)取出酶標板，在空白對照孔內加入100 μl的蒸餾水。(3)按照次序分別將不同濃度標準品溶液各100 μl加入微孔中。(4)將標本血清各100 μl依次加入剩余微孔中。(5)在各微孔中加入50 μl的酶標記溶液(不含空白對照孔)。(6)將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應1 h(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度)。(7)取出酶標板，用洗板機清洗酶標板5次，保持各孔有充足的水壓(濃縮洗液以1∶100的比例與蒸餾水稀釋)。(8)各孔加入顯色劑A、B液各50 μl，在20～25℃下避光反應15 min，最后各孔加入50 μl終止液，終止反應。(9)在30 min內在波長450 nm的酶標儀上讀取各孔的OD值，計算VEGF的濃度值。

1.4 統計學分析 應用SPSS 17.0統計軟件，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組VEGF水平比較 肺癌組與肺部良性疾病組、健康對照組比較，其VEGF血清水平均升高(P＜0.05)。見表1。

表1 肺癌組、肺部良性疾病組和健康對照組VEGF水平比較pg/ml，±s

表1 肺癌組、肺部良性疾病組和健康對照組VEGF水平比較pg/ml，±s

注:與肺癌組比較，*P＜0.05

組別VEGF肺癌組(n=58)312±109肺部良性疾病組(n=40)140±56*健康組(n=40)130±44*

2.2 肺癌患者VEGF水平與病理分型的關系 血清VEGF水平在鱗癌和腺癌患者中差異無統計學意義(P﹥0.05)。見表2。

表2 肺癌患者VEGF水平與病理分型的關系pg/ml，±s

表2 肺癌患者VEGF水平與病理分型的關系pg/ml，±s

VEGF鱗癌組(n=43)組別302±101腺癌組(n=31)326±115

2.3 肺癌患者VEGF血清水平與肺癌分期之間關系

血清VEGF水平隨著臨床分期的遞增而顯著上升，其血清水平為Ⅳ期﹥Ⅲ期﹥I～Ⅱ期，3組之間比較差異有統計學意義(P﹤0.05)。見表3。

表3 肺癌患者VEGF血清水平與肺癌分期之間關系pg/ml，±s

表3 肺癌患者VEGF血清水平與肺癌分期之間關系pg/ml，±s

注:與Ⅰ ～Ⅱ期比較，*P＜0.05;與Ⅲ期比較，#P＜0.05

VEGFⅠ～Ⅱ期(n=14)組別180±86Ⅲ期(n=30)291±110*Ⅳ期(n=41)373±120*#

3 討論

雖然現代醫學水平在不斷地發展和進步，但是近年來肺癌的5年生存率并未有明顯的提高。腫瘤學近年來的重大進展之一，就是確立了腫瘤血管生成(angiogensis)在腫瘤發展過程中的重要地位和抗血管生成治療腫瘤的意義，即腫瘤組織內的微血管形態、分布、數量及血液循環等對于腫瘤的形成機制、治療和預后判定有著十分重要的意義。

惡性腫瘤的生長及轉移都需要新生血管的生成，并且腫瘤細胞誘導血管生成的能力與其侵襲能力相關［7］。VEGF是重要的血管生成因子，是腫瘤血管新生的核心和關鍵因子。

VEGF是一種選擇性促內皮細胞有絲分裂原，它能夠增加血管通透能力，促進內皮細胞增殖、分裂，促進血管新生，同時可引起細胞外基質改變而有利于腫瘤細胞在合適的微環境下形成新的轉移灶，是目前發現最重要的血管形成促進劑之一，對腫瘤的浸潤和轉移及預后有重要的影響［3，4］。

VEGF的表達主要出現在肺癌細胞胞漿內，其表達水平與腫瘤組織的血管生成程度有關，并和腫瘤的惡性程度成顯著的正相關［8］。近年來的許多研究證實，VEGF與肺癌的新生血管和淋巴管的生成以及腫瘤的生物學行為密切相關。

本研究結果顯示肺癌患者血清VEGF的濃度較健康人顯著升高且血清VEGF水平隨著臨床分期的遞增而顯著上升，提示VEGF可能在肺癌發生、發展中起重要作用，這與VEGF促進腫瘤血管內皮細胞的增殖和轉移、促進腫瘤的血管新生、促腫瘤生長的研究報道一致［9，10］。本研究同時還顯示VEGF血清水平為Ⅳ期﹥Ⅲ期﹥I～Ⅱ期，，差異有統計學意義(P＜0.05)，提示血清VEGF越高可能肺癌分期越晚，預后越差。這與既往研究證實的血清或血漿的VEGF水平升高與腫瘤已達晚期或不良預后呈正相關［6，11，12］一致。因此，本研究結果為明確血清中VEGF水平在肺癌的發生、發展中的作用以及作為肺癌的腫瘤標志物的可行性提供了一定的依據。

1 毛友生，高燕寧，赫捷，等.肺癌分子生物學特性與轉移和預后的關系.中華腫瘤學雜志，2006，8:632.

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3 Zhang L，Hannay JA，Liu J，et al.Vascular endothelialgrowthfactoroverexpression bysoft tissue sarcomaceils:implicationsfor tumorgrowth，metastasisand chemoresistance.Cancer Res，2006，66:8770-8778.

4 王海莉，崔凱，張雪峰，等.胃癌患者血清VEGF水平和與癌組織VEGF表達的關系及臨床意義.標記免疫分析與臨床，2009，4:77-78.

5 Ranieri G，Patruno R，Ruggieri E，et al.Vascular endothelial growthfactor(VEGF)as atarget of bevacizumab in cancer from the biology tothe clinic.Curt Med Chem，2006，13:1845-1846.

6 楊繼元，熊杏安，杜偉.非小細胞肺癌組織中VEGF-C及其受體VEGFR.3的表達與淋巴結轉移的關系.腫瘤研究與臨床，2010，22:52-54.

7 吳胤瑛，李恩孝.VEGF在惡性腫瘤中的研究進展.現代腫瘤醫學，2005，13:附18～21.

8 Wang XW，Xiao JY，Zhao SP，et al.Expression of telomerase aubumits and its relationship with telomerase activity in nasopha-ryngeal carcinoma.Natl Med J China，2001，81:553-556.

9 張神捷，李現東，陳娜，等.VEGF在肺癌患者血清和病變組織中的表達及其與疾病預后的關系.第四軍醫大學學報，2008，29:1037-1039.

10 Vicioso L，Gonzalez FJ，Alvarez M，et al，Elevated serum levels ofvascular endothelial growth factor are associated with tumor associatedmacrophages in primary breast cancer.Am J Clin Pathol，2006，125:111-112.

11 周愛萍，馮奉儀.轉移性結直腸癌分子靶向治療臨床研究進展.腫瘤研究與臨床，2010，22:436-439.

12 宋秀軍，江其生.血管內皮生長因子C在非小細胞肺癌轉移中的作用.腫瘤研究與臨床，2010，22:647-648.