蕓香苷水解液中糖的紙色譜檢測條件優化

趙華　劉志梅　陳秀璦

[摘要] 槐米中蕓香苷的提取、精制及對其水解液中糖的紙色譜鑒別是我校中藥制藥技術及藥品質量檢測技術等專業的學生必做的化學實驗。但多年來，采用徑向紙層析方法，以傳統的BAW上層展開系統即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上層）進行展開，易出現鼠李糖條帶嚴重擴散等問題，效果不理想。本文對紙色譜展開條件進行了改進，確定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）為最佳展開劑，葡萄糖及鼠李糖條帶清晰，顯色明顯，分離度良好，方法簡單，重現性良好，可用此法快速鑒別葡萄糖和鼠李糖。

[關鍵詞] 蕓香苷；葡萄糖；鼠李糖；徑向紙層析

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）02-98-02

蕓香苷，又名蘆丁，屬黃酮類化合物，為中藥槐米的主要有效成分，有涼血止血，清肝瀉火，保護和恢復毛細血管彈性，減小毛細血管滲透性等功能。蕓香苷是由槲皮素的3位與一分子的蕓香糖即rhaα1→6glc連接而成，槐米中蕓香苷的含量不得少于15.0%[1]。

紙色譜法是分離、鑒定有機化合物的重要方法之一，按操作方法可分為垂直型和水平型兩種[2]。垂直型包括上行法和下行法，即將濾紙條垂直放置，使展開劑借助毛細管效應或重力作用向上或向下移動[3]；水平型即為徑向紙色譜法，也稱之為圓形紙色譜法，即將圓形濾紙水平放置，使展開劑由中心向四周擴散[4]。多年來，我校采用堿溶酸沉法從槐樹的花蕾中提取蕓香苷并精制后水解，水解液中糖的鑒定均采用徑向紙層析方法。但在中藥化學及天然藥物化學的實驗課上，中藥制藥、藥物制劑等專業的多名同學采用傳統的BAW系統上層溶液即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上層）[5]進行展開，出現了較多的問題，實驗效果不理想，主要表現為：鼠李糖環帶出現嚴重擴散。此類問題的出現并不完全是由學生的實驗操作水平引起的，另展開系統中的采用的正丁醇具有特殊氣味，令人難以接受，且刺激呼吸系統和皮膚，具一定毒性。為此，筆者對葡萄糖和鼠李糖的紙層析展開條件進行了改進，較大程度的解決了上述問題。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

WS70-1型紅外線快速干燥箱，培養皿（Φ16cm）兩個，毛細玻璃管（Φ0.5mm）；槐米購自沈陽市藥材公司，使用前粉碎成粗粉，過20目篩；葡萄糖（中國藥品生物制品鑒定所）；鼠李糖（中國藥品生物制品鑒定所）；定性濾紙（Φ18cm）；吡啶（天津市科密歐化學試劑開發中心，分析純）；乙酸乙酯（天津市百世化工有限公司）；其他藥品均為國產分析純藥品，所用水為一次蒸餾水。

1.2 實驗方法與結果

1.2.1 對照品溶液及供試品溶液的制備 對照品溶液的制備：取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得；取鼠李糖對照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

1.2.2 供試品溶液的制備 取精制后的蕓香苷0.5g，置于250mL的圓底燒瓶中，加2%H2SO4 50mL，回流40min，放冷抽濾。取濾液10mL，逐步加Ba（OH）2細粉（大約1～1.5g）中和至中性，過濾至坩堝中，濃縮至1mL左右，作為供試品溶液[6]。濃縮過程中注意避免炭化。

2 方法與結果

2.1 實驗方法

本實驗采用徑向紙色譜法進行展開。取一張圓形色譜濾紙，在濾紙圓心處打一小孔。把濾紙從圓心處平均分成六等份，在距圓心處0.5cm處畫一圓圈，作為基線。吸取葡萄糖和鼠李糖對照品溶液及供試品溶液進行點樣。點樣時毛細管以用鉛筆標記的距圓心處的小圓為基線，即環式點樣，且相同的樣品應以對角的兩個位置點樣。取長10cm，寬1cm的濾紙條卷成筒狀，塞入濾紙圓心處的小孔當中。取兩個相同大小的培養皿，并在其中一個的中心處放置一裝有乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）的小瓶蓋。取點樣后并塞入濾紙芯的圓形濾紙，把濾紙芯放入瓶蓋中，使其接觸展開劑，迅速蓋好另一個培養皿，展開。約半小時后取出，晾干，噴以苯胺-鄰苯二甲酸試劑，噴霧后于105℃烘10min或在紅外燈下加熱10～15min。

2.2 實驗結果

供試品色譜中，在于對照品相同的位置，顯現相同顏色的環帶，如圖1示。實驗結果表明，蕓香苷水解液中含葡萄糖和鼠李糖，即是蕓香苷為苷元與葡萄糖和鼠李糖連接而成。葡萄糖與鼠李糖條帶清晰，無拖尾，二者的Rf值分別為0.516和0.645，分離度良好。

3 討論

歷年來我校采用徑向紙層析鑒別蕓香苷水解液中的葡萄糖和鼠李糖，多以傳統的BAW系統的上層溶液展開，多出現鼠李糖條帶嚴重擴散等問題，且正丁醇具特殊氣味，并具一定毒性，另展開過程耗時長，葡萄糖和鼠李糖達到良好分離約需1h左右，綜合以上因素，對葡萄糖和鼠李糖的層析條件進行優化。另據文獻報道，葡萄糖可采用HSGF254硅膠薄層法鑒別[7]，但對蕓香苷水解液中的葡萄糖及鼠李糖卻分離不開，且徑向紙層析法操作簡單，展開劑用量少，耗時短，故依然沿用此種方法。

筆者曾對文獻中報道的色譜法篩選葡萄糖和鼠李糖所用的展開劑，如正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1），乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶3），正丁醇-乙醇-水（4∶1∶2.2）等。結果表明，在展開系統中，一定注意水的比例，否則葡萄糖條帶擴散嚴重，即出現嚴重拖尾現象，綜合以上考慮，最終確定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）分離效果最好。

該條件下，葡萄糖和鼠李糖能有效分離，二者的Rf值分別為0.516和0.645，且條帶清晰，顯色明顯，方法簡單，展開過程約需半個小時即可，重現性良好，故可用此法快速鑒別葡萄糖和鼠李糖。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版）[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：333.

[2] 劉約權，李貴深.化學教學論[M].北京：高等教育出版社，2005：84-87.

[3] 孫毓慶.分析化學[M].北京：人民衛生出版社，1997：257.

[4] 張淑娜，石軍，張淑娟.采用圓形紙色譜法分離氨基酸[J].天津農學院學報，2008，15（1）：38-39.

[5] 楊紅.中藥化學實用技術[M].北京：人民衛生出版社，2013：216.

[6] 吳劍鋒.天然藥物化學[M].北京：人民衛生出版社，2003：272.

[7] 郭躍偉，程培元，陳玉俊，等.槐耳菌絲體多糖的分離和分析[J].中國生化藥物雜志，1993，（1）：56-60.

（收稿日期：2013-11-07）endprint

[摘要] 槐米中蕓香苷的提取、精制及對其水解液中糖的紙色譜鑒別是我校中藥制藥技術及藥品質量檢測技術等專業的學生必做的化學實驗。但多年來，采用徑向紙層析方法，以傳統的BAW上層展開系統即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上層）進行展開，易出現鼠李糖條帶嚴重擴散等問題，效果不理想。本文對紙色譜展開條件進行了改進，確定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）為最佳展開劑，葡萄糖及鼠李糖條帶清晰，顯色明顯，分離度良好，方法簡單，重現性良好，可用此法快速鑒別葡萄糖和鼠李糖。

[關鍵詞] 蕓香苷；葡萄糖；鼠李糖；徑向紙層析

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）02-98-02

蕓香苷，又名蘆丁，屬黃酮類化合物，為中藥槐米的主要有效成分，有涼血止血，清肝瀉火，保護和恢復毛細血管彈性，減小毛細血管滲透性等功能。蕓香苷是由槲皮素的3位與一分子的蕓香糖即rhaα1→6glc連接而成，槐米中蕓香苷的含量不得少于15.0%[1]。

紙色譜法是分離、鑒定有機化合物的重要方法之一，按操作方法可分為垂直型和水平型兩種[2]。垂直型包括上行法和下行法，即將濾紙條垂直放置，使展開劑借助毛細管效應或重力作用向上或向下移動[3]；水平型即為徑向紙色譜法，也稱之為圓形紙色譜法，即將圓形濾紙水平放置，使展開劑由中心向四周擴散[4]。多年來，我校采用堿溶酸沉法從槐樹的花蕾中提取蕓香苷并精制后水解，水解液中糖的鑒定均采用徑向紙層析方法。但在中藥化學及天然藥物化學的實驗課上，中藥制藥、藥物制劑等專業的多名同學采用傳統的BAW系統上層溶液即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上層）[5]進行展開，出現了較多的問題，實驗效果不理想，主要表現為：鼠李糖環帶出現嚴重擴散。此類問題的出現并不完全是由學生的實驗操作水平引起的，另展開系統中的采用的正丁醇具有特殊氣味，令人難以接受，且刺激呼吸系統和皮膚，具一定毒性。為此，筆者對葡萄糖和鼠李糖的紙層析展開條件進行了改進，較大程度的解決了上述問題。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

WS70-1型紅外線快速干燥箱，培養皿（Φ16cm）兩個，毛細玻璃管（Φ0.5mm）；槐米購自沈陽市藥材公司，使用前粉碎成粗粉，過20目篩；葡萄糖（中國藥品生物制品鑒定所）；鼠李糖（中國藥品生物制品鑒定所）；定性濾紙（Φ18cm）；吡啶（天津市科密歐化學試劑開發中心，分析純）；乙酸乙酯（天津市百世化工有限公司）；其他藥品均為國產分析純藥品，所用水為一次蒸餾水。

1.2 實驗方法與結果

1.2.1 對照品溶液及供試品溶液的制備 對照品溶液的制備：取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得；取鼠李糖對照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

1.2.2 供試品溶液的制備 取精制后的蕓香苷0.5g，置于250mL的圓底燒瓶中，加2%H2SO4 50mL，回流40min，放冷抽濾。取濾液10mL，逐步加Ba（OH）2細粉（大約1～1.5g）中和至中性，過濾至坩堝中，濃縮至1mL左右，作為供試品溶液[6]。濃縮過程中注意避免炭化。

2 方法與結果

2.1 實驗方法

本實驗采用徑向紙色譜法進行展開。取一張圓形色譜濾紙，在濾紙圓心處打一小孔。把濾紙從圓心處平均分成六等份，在距圓心處0.5cm處畫一圓圈，作為基線。吸取葡萄糖和鼠李糖對照品溶液及供試品溶液進行點樣。點樣時毛細管以用鉛筆標記的距圓心處的小圓為基線，即環式點樣，且相同的樣品應以對角的兩個位置點樣。取長10cm，寬1cm的濾紙條卷成筒狀，塞入濾紙圓心處的小孔當中。取兩個相同大小的培養皿，并在其中一個的中心處放置一裝有乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）的小瓶蓋。取點樣后并塞入濾紙芯的圓形濾紙，把濾紙芯放入瓶蓋中，使其接觸展開劑，迅速蓋好另一個培養皿，展開。約半小時后取出，晾干，噴以苯胺-鄰苯二甲酸試劑，噴霧后于105℃烘10min或在紅外燈下加熱10～15min。

2.2 實驗結果

供試品色譜中，在于對照品相同的位置，顯現相同顏色的環帶，如圖1示。實驗結果表明，蕓香苷水解液中含葡萄糖和鼠李糖，即是蕓香苷為苷元與葡萄糖和鼠李糖連接而成。葡萄糖與鼠李糖條帶清晰，無拖尾，二者的Rf值分別為0.516和0.645，分離度良好。

3 討論

歷年來我校采用徑向紙層析鑒別蕓香苷水解液中的葡萄糖和鼠李糖，多以傳統的BAW系統的上層溶液展開，多出現鼠李糖條帶嚴重擴散等問題，且正丁醇具特殊氣味，并具一定毒性，另展開過程耗時長，葡萄糖和鼠李糖達到良好分離約需1h左右，綜合以上因素，對葡萄糖和鼠李糖的層析條件進行優化。另據文獻報道，葡萄糖可采用HSGF254硅膠薄層法鑒別[7]，但對蕓香苷水解液中的葡萄糖及鼠李糖卻分離不開，且徑向紙層析法操作簡單，展開劑用量少，耗時短，故依然沿用此種方法。

筆者曾對文獻中報道的色譜法篩選葡萄糖和鼠李糖所用的展開劑，如正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1），乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶3），正丁醇-乙醇-水（4∶1∶2.2）等。結果表明，在展開系統中，一定注意水的比例，否則葡萄糖條帶擴散嚴重，即出現嚴重拖尾現象，綜合以上考慮，最終確定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）分離效果最好。

該條件下，葡萄糖和鼠李糖能有效分離，二者的Rf值分別為0.516和0.645，且條帶清晰，顯色明顯，方法簡單，展開過程約需半個小時即可，重現性良好，故可用此法快速鑒別葡萄糖和鼠李糖。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版）[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：333.

[2] 劉約權，李貴深.化學教學論[M].北京：高等教育出版社，2005：84-87.

[3] 孫毓慶.分析化學[M].北京：人民衛生出版社，1997：257.

[4] 張淑娜，石軍，張淑娟.采用圓形紙色譜法分離氨基酸[J].天津農學院學報，2008，15（1）：38-39.

[5] 楊紅.中藥化學實用技術[M].北京：人民衛生出版社，2013：216.

[6] 吳劍鋒.天然藥物化學[M].北京：人民衛生出版社，2003：272.

[7] 郭躍偉，程培元，陳玉俊，等.槐耳菌絲體多糖的分離和分析[J].中國生化藥物雜志，1993，（1）：56-60.

（收稿日期：2013-11-07）endprint

[摘要] 槐米中蕓香苷的提取、精制及對其水解液中糖的紙色譜鑒別是我校中藥制藥技術及藥品質量檢測技術等專業的學生必做的化學實驗。但多年來，采用徑向紙層析方法，以傳統的BAW上層展開系統即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上層）進行展開，易出現鼠李糖條帶嚴重擴散等問題，效果不理想。本文對紙色譜展開條件進行了改進，確定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）為最佳展開劑，葡萄糖及鼠李糖條帶清晰，顯色明顯，分離度良好，方法簡單，重現性良好，可用此法快速鑒別葡萄糖和鼠李糖。

[關鍵詞] 蕓香苷；葡萄糖；鼠李糖；徑向紙層析

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）02-98-02

蕓香苷，又名蘆丁，屬黃酮類化合物，為中藥槐米的主要有效成分，有涼血止血，清肝瀉火，保護和恢復毛細血管彈性，減小毛細血管滲透性等功能。蕓香苷是由槲皮素的3位與一分子的蕓香糖即rhaα1→6glc連接而成，槐米中蕓香苷的含量不得少于15.0%[1]。

紙色譜法是分離、鑒定有機化合物的重要方法之一，按操作方法可分為垂直型和水平型兩種[2]。垂直型包括上行法和下行法，即將濾紙條垂直放置，使展開劑借助毛細管效應或重力作用向上或向下移動[3]；水平型即為徑向紙色譜法，也稱之為圓形紙色譜法，即將圓形濾紙水平放置，使展開劑由中心向四周擴散[4]。多年來，我校采用堿溶酸沉法從槐樹的花蕾中提取蕓香苷并精制后水解，水解液中糖的鑒定均采用徑向紙層析方法。但在中藥化學及天然藥物化學的實驗課上，中藥制藥、藥物制劑等專業的多名同學采用傳統的BAW系統上層溶液即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上層）[5]進行展開，出現了較多的問題，實驗效果不理想，主要表現為：鼠李糖環帶出現嚴重擴散。此類問題的出現并不完全是由學生的實驗操作水平引起的，另展開系統中的采用的正丁醇具有特殊氣味，令人難以接受，且刺激呼吸系統和皮膚，具一定毒性。為此，筆者對葡萄糖和鼠李糖的紙層析展開條件進行了改進，較大程度的解決了上述問題。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

WS70-1型紅外線快速干燥箱，培養皿（Φ16cm）兩個，毛細玻璃管（Φ0.5mm）；槐米購自沈陽市藥材公司，使用前粉碎成粗粉，過20目篩；葡萄糖（中國藥品生物制品鑒定所）；鼠李糖（中國藥品生物制品鑒定所）；定性濾紙（Φ18cm）；吡啶（天津市科密歐化學試劑開發中心，分析純）；乙酸乙酯（天津市百世化工有限公司）；其他藥品均為國產分析純藥品，所用水為一次蒸餾水。

1.2 實驗方法與結果

1.2.1 對照品溶液及供試品溶液的制備 對照品溶液的制備：取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得；取鼠李糖對照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

1.2.2 供試品溶液的制備 取精制后的蕓香苷0.5g，置于250mL的圓底燒瓶中，加2%H2SO4 50mL，回流40min，放冷抽濾。取濾液10mL，逐步加Ba（OH）2細粉（大約1～1.5g）中和至中性，過濾至坩堝中，濃縮至1mL左右，作為供試品溶液[6]。濃縮過程中注意避免炭化。

2 方法與結果

2.1 實驗方法

本實驗采用徑向紙色譜法進行展開。取一張圓形色譜濾紙，在濾紙圓心處打一小孔。把濾紙從圓心處平均分成六等份，在距圓心處0.5cm處畫一圓圈，作為基線。吸取葡萄糖和鼠李糖對照品溶液及供試品溶液進行點樣。點樣時毛細管以用鉛筆標記的距圓心處的小圓為基線，即環式點樣，且相同的樣品應以對角的兩個位置點樣。取長10cm，寬1cm的濾紙條卷成筒狀，塞入濾紙圓心處的小孔當中。取兩個相同大小的培養皿，并在其中一個的中心處放置一裝有乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）的小瓶蓋。取點樣后并塞入濾紙芯的圓形濾紙，把濾紙芯放入瓶蓋中，使其接觸展開劑，迅速蓋好另一個培養皿，展開。約半小時后取出，晾干，噴以苯胺-鄰苯二甲酸試劑，噴霧后于105℃烘10min或在紅外燈下加熱10～15min。

2.2 實驗結果

供試品色譜中，在于對照品相同的位置，顯現相同顏色的環帶，如圖1示。實驗結果表明，蕓香苷水解液中含葡萄糖和鼠李糖，即是蕓香苷為苷元與葡萄糖和鼠李糖連接而成。葡萄糖與鼠李糖條帶清晰，無拖尾，二者的Rf值分別為0.516和0.645，分離度良好。

3 討論

歷年來我校采用徑向紙層析鑒別蕓香苷水解液中的葡萄糖和鼠李糖，多以傳統的BAW系統的上層溶液展開，多出現鼠李糖條帶嚴重擴散等問題，且正丁醇具特殊氣味，并具一定毒性，另展開過程耗時長，葡萄糖和鼠李糖達到良好分離約需1h左右，綜合以上因素，對葡萄糖和鼠李糖的層析條件進行優化。另據文獻報道，葡萄糖可采用HSGF254硅膠薄層法鑒別[7]，但對蕓香苷水解液中的葡萄糖及鼠李糖卻分離不開，且徑向紙層析法操作簡單，展開劑用量少，耗時短，故依然沿用此種方法。

筆者曾對文獻中報道的色譜法篩選葡萄糖和鼠李糖所用的展開劑，如正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1），乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶3），正丁醇-乙醇-水（4∶1∶2.2）等。結果表明，在展開系統中，一定注意水的比例，否則葡萄糖條帶擴散嚴重，即出現嚴重拖尾現象，綜合以上考慮，最終確定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）分離效果最好。

該條件下，葡萄糖和鼠李糖能有效分離，二者的Rf值分別為0.516和0.645，且條帶清晰，顯色明顯，方法簡單，展開過程約需半個小時即可，重現性良好，故可用此法快速鑒別葡萄糖和鼠李糖。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版）[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：333.

[2] 劉約權，李貴深.化學教學論[M].北京：高等教育出版社，2005：84-87.

[3] 孫毓慶.分析化學[M].北京：人民衛生出版社，1997：257.

[4] 張淑娜，石軍，張淑娟.采用圓形紙色譜法分離氨基酸[J].天津農學院學報，2008，15（1）：38-39.

[5] 楊紅.中藥化學實用技術[M].北京：人民衛生出版社，2013：216.

[6] 吳劍鋒.天然藥物化學[M].北京：人民衛生出版社，2003：272.

[7] 郭躍偉，程培元，陳玉俊，等.槐耳菌絲體多糖的分離和分析[J].中國生化藥物雜志，1993，（1）：56-60.

（收稿日期：2013-11-07）endprint