宮頸癌存活蛋白的表達及其與預后的關系

成 杰,程 慧，張 蓓※,馮 強

(徐州市中心醫院 1婦產科， 2病理科，江蘇 徐州 221009)

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，早期患者預后較好，但晚期宮頸癌預后較差。目前研究認為，宮頸癌的發生、發展與凋亡相關基因關系密切[1-2]。近年來研究發現凋亡抑制因子存活蛋白在多種人類惡性腫瘤中高表達，并能強烈抑制細胞凋亡[1]。本研究應用免疫組織化學S-P法檢測存活蛋白在宮頸癌組織及癌旁組織的表達，探討宮頸癌組織中存活蛋白的表達及其與患者預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集20007年1月至2009年12月徐州市中心醫院收治的70例手術切除的臨床病理資料保存完整的宮頸癌石蠟切塊，癌旁組織取自距癌組織0.5～1.0 cm。70例宮頸癌患者年齡為29～74(48.6±13.2)歲；其中年齡≥50歲38例，年齡<50歲32例；鱗狀細胞癌47例，腺細胞癌23例；病理分級：G1～G2級39例，G3級31例；病理組織學分級：高分化26例，中低分化44例；根據2003年再次修訂后的國際婦產科聯盟提出的分期標準進行臨床分期[2]：Ⅰ期35例，Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期26例；腫瘤直徑≥4 cm 41例，<4 cm 29例；淋巴結轉移：有43例，無27例。納入資料重新切片并由病理醫師再次確診，所有病例術前未行放化療。另取20例正常宮頸組織作為對照組，年齡為27～72(47.3±14.1)歲。

1.2免疫組織化學 實驗用兔抗人存活蛋白單克隆抗體購自福建邁新生物工程公司，存活蛋白的表達采用免疫組織化學S-P法，S-P免疫組織化學試劑盒購自北京中杉橋生物公司，實驗步驟按試劑盒說明書進行。磷酸鹽緩沖溶液代替一抗作為陰性對照，已知抗體陽性標本為陽性對照。

1.4結果判定標準 存活蛋白陽性染色信號呈棕色細小顆粒，均位于細胞質。隨機抽取10個高倍視野，結果判斷采用半定量方法。按著色強度劃分：細胞無著色，0分；細胞著色為淺黃色，1分；細胞著色為棕黃色，2分；細胞著色為棕褐色，3分。陽性細胞百分率：陰性，0分；陽性細胞<10%，1分；陽性細胞11%～50%，2分；陽性細胞51%～75%，3分；陽性細胞>75%，4分。兩者積分相乘分為四個等級：0～2分為-； 3～5分為+； 6～8分為++； 9～12分為+++。3分及以上為陽性[3]。

2 結 果

2.1存活蛋白在宮頸癌、癌旁及正常組織中的表達 存活蛋白陽性染色定位在腫瘤細胞質中，呈棕色細小顆粒，也可以呈彌漫胞質分布(圖1)。在宮頸癌組織中存活蛋白陽性表達率高于正常組織(χ2=15.82，P<0.05)；癌旁組織中存活蛋白陽性表達率高于正常組(χ2=7.11，P<0.05)，低于宮頸癌組(χ2=5.37，P<0.05)(表1)。

表1 存活蛋白在宮頸癌、癌旁及正常組織中的表達

圖1 存活蛋白在宮頸癌組織及癌旁組織中的表達(×400) 圖A:存活蛋白在宮頸癌組織中呈強陽性表達，腫瘤細胞質內可見棕黃色顆粒；圖B:存活蛋白在癌旁組織中呈弱陽性表達，腫瘤細胞質內可見棕黃色顆粒

2.2存活蛋白的表達及與宮頸癌臨床病理因素的關系 70例宮頸癌組織中，存活蛋白陽性率與患者年齡、腫瘤大小、病理類型、淋巴結有無轉移無關(P>0.05)，與腫瘤組織學分級、病理分期及病理分級有關(P<0.05)(表2)。

表2 存活蛋白與宮頸癌臨床病理因素間的關系

2.3存活蛋白與宮頸癌患者生存率的關系 以病理確診為宮頸癌時為觀察起點(以月計算)，70例患者隨訪至2012年5月。經生存分析發現，存活蛋白陰性組患者生存率高于存活蛋白陽性組(χ2=26.275，P<0.05)(圖2)。

圖2 存活蛋白陽性與陰性宮頸癌患者生存曲線

3 討 論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，居女性惡性腫瘤的第二位，僅次于乳腺癌。宮頸癌的發生和發展是一個多種因素參與的復雜病理過程。流行病學研究顯示，細胞癌基因的激活、抑癌基因的失活和細胞凋亡的抑制均參與了宮頸癌前病變和宮頸癌的發生、發展[3]。近年來，研究發現細胞凋亡受抑制是正常細胞演變成惡性細胞的關鍵過程，參與細胞凋亡的基因較多，其中凋亡蛋白抑制因子家族是一類抑制凋亡的因子[4]。

存活蛋白是近年來新發現的凋亡抑制因子，它不僅抑制細胞的凋亡還參與對細胞分裂的調控，促進了細胞的異常增殖和惡性轉化[5]。存活蛋白特異性表達于胚胎發育組織及分化未成熟組織，并在許多惡性腫瘤組織中高表達，而正常成人組織不表達(胸腺、胎盤、子宮內膜除外)[1-2]。本研究結果顯示，正常宮頸組織中存活蛋白表達率較低，宮頸癌和癌旁組織中存活蛋白明顯升高，癌組織較癌旁組織更高，與國內外研究結果一致[4,6]，提示存活蛋白的存在代表著細胞生物學轉化的中間環節，其水平變化在正常宮頸組織向宮頸癌轉化中起重要作用[6]。同時本研究結果表明，宮頸癌存活蛋白陽性的46例中，中低分化34例，高分化12例，可見腫瘤惡性程度越高，存活蛋白陽性率越高。Kim等[3]研究發現，存活蛋白表達與宮頸癌的病理演進有關，從輕度非典型增生到癌的演進中存活蛋白表達逐漸升高。有研究表明，存活蛋白在宮頸組織中的表達隨宮頸分化程度的降低而升高[4]。本研究結果顯示，存活蛋白在宮頸癌中的表達情況與患者的年齡、腫瘤大小、病理類型、淋巴結有無轉移均無相關性。但隨著組織學分級和病理分期、分級的增加，存活蛋白過表達也隨之升高，差異有統計學意義，說明存活蛋白基因表達程度與腫瘤的發生、發展和惡性程度相關，存活蛋白的高表達預示著腫瘤具有較高的局部浸潤活性和轉移潛能，預后更差，在一定程度上反映了宮頸癌的惡性程度[5]。以上特點使存活蛋白有可能作為宮頸癌診斷及判定預后的重要指標之一，也為腫瘤治療提供了新的靶點。

有文獻報道，存活蛋白與多種惡性腫瘤預后相關。惡性腫瘤的表達率顯著地高于良性病變，且與腫瘤細胞的增殖活性間具有正相關性，過度表達者生存期短[7-10]。Bache等[6]觀察44例經放射治療后的宮頸癌患者存活蛋白表達情況時發現，晚期宮頸癌放療患者中存活蛋白表達水平與患者的5年生存率明顯相關。本研究結果顯示，存活蛋白陽性患者生存率低于陰性組，提示存活蛋白陽性意味著疾病復發的危險性較高，生存時間縮短，預后不良，對指導治療有一定作用。

綜上所述，存活蛋白在宮頸癌中的異常表達與宮頸癌的發生、發展密切相關，有望成為早期診斷及預測宮頸癌預后的一個重要指標。

[1] Siripong P,Hahnvajanawong C,Yahuafai J,etal.Induction of apoptosis by rhinacanthone isolated from Rhinacanthus nasutus roots in human cervical carcinoma cells[J].Biol Pharm Bull,2009,32(7):1251-1260.

[2] Temme A,Rieger M,Reber F,etal.Localization,dynamics,and function of survivin revealed by expression of functional survivin DsRed fusion proteins in the living cell[J].Mol Biol Cell，2003,14(1):78-92.

[3] Kim HS,Shiraki K,Park SH.Expression of survivin in CIN and invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J].Anticancer Res,2002,22(2A):805-808.

[4] 慧燕,黃利鳴,葉紅.Survivin在人宮頸癌前病變和宮頸浸潤癌組織中的定量分析及其臨床價值的評估[J].腫瘤防治研究,2008,35(1)：39-42.

[5] 李素文,朱寶申,孫麗娟,等.Survivin在宮頸癌組織中表達規律及臨床意義[J].河北醫藥,2009,31(14)：1743.

[6] Bache M,Holzapfel D,Kappler M,etal.Survivin protein expression and hypoxia in advanced cervical carcinoma of patients treated by radiotherapy[J].Gynecol Oncol,2007,104(1):139-144.

[7] 孫延霞,石張鎮,盧振霞.Survivin在胃癌組織中的表達及臨床意義[J].中國實驗診學,2012,16(5):844-845.

[8] 朱華,施錚錚,楊孝軍,等.Survivin、Bcl-2、HPV 16/18 在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌中的表達及臨床意義[J].實用婦產科雜志,2010,26(1):57-58.

[9] 朱華,胡燕帥,茨霞.survivin、bcl-2在宮頸癌和癌前病變組織中的表達及與人乳頭瘤病毒16/18感染的相關性[J].中華醫學雜志,2010,90(7):469-471.

[10] 秦前波,汪名飛,江從慶,等.結直腸癌中缺氧誘導因子-1α與Survivin 表達的關系[J].中華實驗外科雜志,2011,28(10):1713-1715.