黃蜀葵花總黃酮藥理活性的研究進(jìn)展

文 松 張貴強(qiáng) 汪艷艷 周 英，2 王海南

(1貴州大學(xué)藥學(xué)院，貴陽，550025;2貴州省中藥民族藥創(chuàng)制工程中心，貴陽，550025;3國家食品藥品監(jiān)督管理總局，北京，100053)

黃蜀葵花[Abelmoschusmanihot(L.)Medic]為錦葵科植物黃蜀葵的干燥花冠，含黃酮類、還原糖類、鞣質(zhì)類及長鏈烴類等化合物。其中，黃酮類化合物(Total Flavones of A.manihot，TFA)為主要活性成分。在黃酮類化合物中，以金絲桃苷、槲皮素、異槲皮苷三者含量最高[1]。該類化合物具有改善腎功能、抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、保護(hù)心腦缺血損傷、促進(jìn)血管新生、降血糖和抗感染等作用。下文就黃蜀葵花總黃酮的藥理活性作一綜述。

1 改善腎功能

在腎纖維化的形成過程中，轉(zhuǎn)化生長因子－β(Transforming Growth Factor－β，TGF－β)是腎纖維化形成過程中最為關(guān)鍵的細(xì)胞因子[2]。馮媛等采用大鼠單側(cè)輸尿管梗阻模型觀察TFA對腎間質(zhì)纖維化的影響，用免疫組織化學(xué)方法檢測，結(jié)果顯示，與模型組相比，TFA能使TGF－β下游的效應(yīng)因子結(jié)締組織生長因子的表達(dá)降低，進(jìn)而延緩腎小管的損傷及腎纖維化的進(jìn)展，減輕腎組織纖維化的病變[3]。TFA還能增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫黏附能力，使紅細(xì)胞膜上的C3b(Red Blood Cell－complement C3b，RBC－C3b)受體數(shù)量增加，促進(jìn)免疫復(fù)合物的轉(zhuǎn)運(yùn)與清除，從而減輕由循環(huán)免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎組織免疫損傷，使腎功能得到改善[4]。TFA所含的槲皮素、異槲皮素能夠抑制腎小管上皮細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶，并降低丙二醛的含量，推測槲皮素、異槲皮素系通過抗氧化或清除自由基作用而改善細(xì)胞膜的通透性，從而達(dá)到保護(hù)腎小管上皮細(xì)胞的作用[5]。由上可知，TFA主要通過抗腎纖維化、提高紅細(xì)胞免疫黏附功能、保護(hù)腎小管上皮細(xì)胞等發(fā)揮改善腎功能的作用。

2 抗炎

范麗等[6]人觀察TFA對急慢性炎性反應(yīng)的抑制作用。結(jié)果顯示，局部涂抹不同劑量TFA(200、100、50 mg/kg)，均可使二甲苯致小鼠耳片腫脹的程度明顯減輕，抑制率為25.72% ～28.41%。而在皮下埋植棉球致肉芽組織形成的實(shí)驗(yàn)中，只有50 mg/kg的劑量可減少新生肉芽組織生成量，這提示局部涂抹TFA對慢性炎性反應(yīng)的抑制作用弱于對急性炎性反應(yīng)的抑制。

此外，劉必全等[7]在TFA對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的防治作用研究中，對大鼠進(jìn)行灌胃給藥，然后在大鼠左后足趾皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑誘發(fā)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎，并在不同時(shí)間點(diǎn)用足趾容積測量儀檢測大鼠致炎側(cè)足容積，以觀察TFA對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠原發(fā)性炎性反應(yīng)、繼發(fā)性炎性反應(yīng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TFA不僅能抑制原發(fā)性足腫脹，對繼發(fā)性足腫脹也有明顯的抑制作用，且病理切片也發(fā)現(xiàn)TFA可明顯減輕關(guān)節(jié)的炎性細(xì)胞的浸潤及血管翳的形成。

3 解熱鎮(zhèn)痛

范麗等[6]人以皮下注射松節(jié)油或靜脈注射大腸桿菌液兩種誘發(fā)家兔發(fā)熱的模型來觀察TFA的解熱作用。結(jié)果顯示，在給藥150 min時(shí)均可使家兔升高的體溫下降，表明TFA較大劑量時(shí)具有一定的解熱作用，但顯效較阿司匹林慢，分析其原因，可能是受試藥物經(jīng)胃腸道吸收、肝臟消除效應(yīng)后再進(jìn)入體循環(huán)需較長時(shí)間。

范麗等[8]人用冰醋酸致小鼠扭體模型、福爾馬林模型及氯化鉀誘痛模型來觀察TFA的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果表明，TFA可不同程度地抑制小鼠扭體反應(yīng)。140 mg/kg的劑量全身給藥可使福爾馬林致小鼠疼痛的Ⅰ、Ⅱ相反應(yīng)明顯減輕，但小鼠右后足底注射(ip1)TFA僅對同側(cè)ip1福爾馬林導(dǎo)致的疼痛產(chǎn)生抑制作用，而對對側(cè)ip1福爾馬林致小鼠疼痛無明顯影響。動(dòng)脈注射TFA 200 mg/kg可明顯減輕KCl誘發(fā)的家兔疼痛反應(yīng)。

4 保護(hù)心腦缺血損傷

李慶林等[9]在TFA對心肌損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究中，運(yùn)用心電圖觀察TFA對注射垂體后葉素的大鼠心電圖T波升高幅度變化的影響，同時(shí)對冠狀動(dòng)脈結(jié)扎造成的急性心肌梗死大鼠血清中肌酸磷酸激酶(Creatine Phosphokinase，CPK)、乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase，LDH)和血清游離脂肪酸水平的變化情況進(jìn)行觀察，且對小鼠心肌線粒體中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSHPx)的變化情況進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，TFA對注射垂體后葉素的大鼠心電圖T波升高有抑制作用。對冠狀動(dòng)脈結(jié)扎造成的急性心肌梗死大鼠，TFA能夠顯著抑制血清中CPK、LDH的升高，降低血清游離脂肪酸水平。TFA對小鼠心肌線粒體中MDA的生成有抑制作用，也能提高SOD和GSHPx的活力。范麗等[10]在TFA預(yù)處理對家兔心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用的研究中也得到了相同的結(jié)論，并且還發(fā)現(xiàn)不同劑量的TFA預(yù)處理，可明顯下調(diào)缺血再灌注所誘發(fā)的ICAM－1 mRNA的高表達(dá)，表明抑制ICAM－1 mRNA的高表達(dá)，抑制心肌炎性反應(yīng)是TFA預(yù)處理保護(hù)缺血心肌的另一重要機(jī)制。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，TFA除可改善急性心肌缺血發(fā)生的異常心電圖改變外，還具有良好的保護(hù)心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、抑制心肌水腫的作用，且此作用可能不是直接通過抑制細(xì)胞內(nèi)鈣超載而產(chǎn)生[11]。TFA還可明顯改善麻醉犬心臟血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)和降低心肌耗氧量，明顯增強(qiáng)缺氧小鼠心臟耐缺氧的能力，對心肌缺氧損傷具有保護(hù)作用[12]。另有實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TFA還能使Bcl－2基因的表達(dá)增加，有效抑制了心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生，從而使損傷的心肌細(xì)胞得到保護(hù)[13]。

文繼月等[14]觀察了TFA預(yù)處理對大鼠腦缺血再灌注性損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明，TFA在20～160 mg/kg的范圍內(nèi)，預(yù)處理組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦梗死面積明顯減少，血清中 LDH、MDA和前列腺素 E2(ProstaglandinE2，PGE2)含量明顯降低，同時(shí)血清中一氧化氮合成酶(Nitric Oxide Synthetase，NOS)活性和一氧化氮(Nitric Oxide，NO)含量也顯著增加。這表明TFA具有保護(hù)腦缺血損傷的作用，推測可能與促進(jìn)NO合成及抑制PGE2產(chǎn)生有關(guān)。

5 促進(jìn)血管新生

潘武[15]等以體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein endothelial Cells，HUVEC)為模型，采用噻唑藍(lán)(3－(4，5－dimethyl－2－thiazolyl)－2，5－diphenyl－2H－ tetrazolium bromide，MTT)法、Transwell小室和管形形成試驗(yàn)證實(shí)，一定濃度的TFA能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和管狀結(jié)構(gòu)的形成。TFA濃度在5～20 μg/mL范圍可抑制HUVEC凋亡，并下調(diào)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白fas的表達(dá)[16]。該濃度范圍的TFA使雞胚絨毛尿囊膜血管網(wǎng)明顯增多、增粗，血管計(jì)數(shù)顯示血管數(shù)顯著增多，其中，以10 μg/mL作用最明顯[17]。研究認(rèn)為，TFA 促進(jìn)血管新生的機(jī)制主要是上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)的表達(dá)，并下調(diào) fas蛋白表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡;一定濃度的TFA還可能通過上調(diào)VEGF受體(Kinase Insert Domain Receptor，KDR)的表達(dá)，但不能通過上調(diào)bcl－2蛋白的表達(dá)來抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[18]。

6 降血糖

陳剛[19]采用3T3－L1脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗細(xì)胞模型，對TFA的降糖活性進(jìn)行初步考察，發(fā)現(xiàn)TFA在1～100 mg/L的濃度范圍內(nèi)能不同程度地促進(jìn)脂肪細(xì)胞對葡萄糖的消耗，且呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。其中，TFA 100 mg/L濃度的降糖效果最好。為了進(jìn)一步確認(rèn)TFA的降糖活性，陳剛又采用鏈脲佐菌素(Streptozocin，STZ)誘導(dǎo)的糖尿病小鼠模型進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)TFA在該動(dòng)物模型上也具有一定的降糖活性。

7 抗感染

張紅艷等[20]的研究顯示，TFA能顯著縮短豚鼠感染性口腔黏膜潰瘍的愈合時(shí)間和潰瘍面積縮小到50%的時(shí)間。此外，體外抗菌結(jié)果顯示，TFA對表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度為3.125 g/L，對白色念珠菌的抑菌濃度為1.562～3.125 g/L。

耿淼等[21]從乙肝治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)共價(jià)閉環(huán)DNA(covalently close circular DNA，cccDNA)和細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用兩方面進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，金絲桃苷不但能有效抑制鴨乙型肝炎病毒DNA(Duck hepatitis B virus，DHBV－DNA)的合成，減少DHBV－DNA進(jìn)入細(xì)胞形成cccDNA庫，而且還能清除cccDNA。同時(shí)，還能改善Th1的功能，促進(jìn)Th1細(xì)胞因子的分泌，從而阻止DHBV感染細(xì)胞。

8 結(jié)語

TFA具有廣泛的藥理活性，對其改善腎功能作用的研究有助于闡明黃葵膠囊臨床起效的物質(zhì)基礎(chǔ)。至于TFA其他的藥理活性能否最終轉(zhuǎn)化為臨床的治療作用，則有待今后規(guī)范的臨床試驗(yàn)給出答案，同時(shí)，亦有賴于臨床研究與藥理研究之間的良性互動(dòng)。

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