黃連素對(duì)癌性惡病質(zhì)小鼠肝腎功能的影響

張學(xué)梅+許崇安+佘春燕

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院腫瘤科，遼寧沈陽(yáng) 110032

[摘要] 目的 檢測(cè)癌性惡病質(zhì)小鼠肝、腎功能及細(xì)胞凋亡情況，探討黃連素對(duì)癌性惡病質(zhì)小鼠臟器功能的影響。 方法 使用小白鼠結(jié)腸腺癌細(xì)胞株CT-26皮下注射Balb/c小白鼠，構(gòu)建荷瘤小白鼠腫瘤惡病質(zhì)模型，將小白鼠分為3組：正常對(duì)照組、荷瘤無(wú)干預(yù)組、荷瘤黃連素干預(yù)組，連續(xù)2周記錄小白鼠飲食量、飲水量、體質(zhì)量，并檢測(cè)各組小鼠肝腎功能、肝腎組織形態(tài)、肝腎細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果 與荷瘤無(wú)干預(yù)組比較，黃連素能明顯抑制癌性惡病質(zhì)小鼠的體重下降，增加攝食量、飲水量，改善小鼠的一般狀況；減輕肝腎病理?yè)p害程度，減少肝腎組織細(xì)胞凋亡，改善惡病質(zhì)小鼠肝腎功能（P < 0.05）。 結(jié)論 黃連素可改善癌性惡病質(zhì)小鼠肝腎功能，減輕肝腎細(xì)胞凋亡程度。

[關(guān)鍵詞] 黃連素；小鼠；腫瘤惡病質(zhì)

[中圖分類號(hào)] R730 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）03（c）-0029-04

Effects of berberine on liver and kidney function in mice with cancerous cachexia

ZHANG Xuemei XU Chong′an SHE Chunyan

Department of Oncology， the Fourth Affiliated Hospital of China Medical University， Liaoning Province， Shenyang 110032， China.

[Abstract] Objective To detect the liver and kidney function and apoptosis in mice with cancerous cachexia， investigate the effects of berberine on organ function in mice with cancerous cachexia. Methods The model of tumor-burdened mice with cancerous cachexia was constructed by mouse colonic adenocarcinoma cell strain CT-26 hypodermic injection in Balb/c mice. The mice were divided into three groups： normal control group， tumor-burdened non-intervention group and tumor-burdened berberine intervention group. Food intake， water intake and weight of these mice were recorded for 2 consecutive weeks. Furthermore， liver and kidney function， liver and kidney tissue morphology and liver and kidney cells apoptosis in each group were detected. Results Compared with tumor-burdened non-intervention group， berberine could obviously inhibit weight loss， increase food and water intake， improve the general condition of the mice； reduce the extent of liver and kidney pathological damage， reduce apoptosis of liver and kidney tissue， and improve the liver and kidney function in mice with cancerous cachexia （P < 0.05）. Conclusion Berberine may improve the liver and kidney function in mice with cancerous cachexia， and reduce the degree of liver and kidney cells apoptosis.

[Key words] Berberine； Mice； Cancer cachexia

惡病質(zhì)是腫瘤常見的并發(fā)癥，近80%的晚期腫瘤患者會(huì)出現(xiàn)惡病質(zhì)，近20%的患者直接死于惡病質(zhì)[1]，臨床表現(xiàn)為體質(zhì)量下降、食欲減退、疲勞、肌肉消耗、臟器功能損害，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量及生存期。黃連素作為祖國(guó)的傳統(tǒng)中醫(yī)中藥，是毛莨科植物黃連干燥根莖的提取物之一，近年發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤作用[2]。筆者前期研究證實(shí)黃連素能改善癌性惡病質(zhì)的發(fā)生、發(fā)展，現(xiàn)觀察黃連素對(duì)小鼠惡病質(zhì)肝腎等重要臟器保護(hù)作用，進(jìn)一步明確其對(duì)惡病質(zhì)的改善，并闡明其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

小白鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株CT-26，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心；雌性Balb/c小白鼠，8周齡，體重18 g左右，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所；黃連素，購(gòu)自東北制藥集團(tuán)沈陽(yáng)第一制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H21022453；ELISA試劑盒，購(gòu)于英國(guó)Abcam公司；原位凋亡檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自德國(guó)Roche公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將24只小鼠隨機(jī)分成三組，每組8只，即正常對(duì)照組、荷瘤無(wú)干預(yù)組、荷瘤黃連素干預(yù)組。

1.2.2 構(gòu)建腫瘤惡病質(zhì)動(dòng)物模型 建立結(jié)腸癌小鼠惡病質(zhì)模型。荷瘤無(wú)干預(yù)組和荷瘤黃連素干預(yù)組小鼠腋窩下植入小鼠結(jié)腸腺癌細(xì)胞株CT-26（植入量為1×106/0.2 mL），植入細(xì)胞7 d后肉眼可見有腫瘤結(jié)節(jié)生成，14 d的時(shí)候小鼠出現(xiàn)瘤塊明顯增大，小鼠消瘦，體重下降且進(jìn)食量及飲水量下降，活動(dòng)減少，與正常對(duì)照組相比，差異顯著時(shí)，進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)，提示構(gòu)建腫瘤惡病質(zhì)小鼠模型成功。

1.2.3 藥物干預(yù) 接種腫瘤細(xì)胞第15天后，荷瘤黃連素干預(yù)組給予黃連素25 mg/（kg·d）灌胃，連續(xù)15 d；正常對(duì)照組、荷瘤無(wú)干預(yù)組給予等量生理鹽水灌胃；各組每天給藥1次，連續(xù)給藥15 d。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 一般狀況 觀察小鼠毛色和活動(dòng)情況。

1.3.2 體重、攝食和飲水量 每?jī)商煊糜螛?biāo)尺測(cè)定腫瘤的長(zhǎng)徑、短徑并稱小鼠體重量1次，精確到0.1 g，腫瘤體積（V）的估計(jì)采用公式V=a×b2/2（a、b分別為腫瘤的長(zhǎng)度與寬度），腫瘤重量（M）的估計(jì)采用公式M=V×F（F為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)腫瘤實(shí)際重量與體積的比值），利用體質(zhì)量減瘤重來(lái)估算去瘤體重量。所有測(cè)量均在每天同一時(shí)間進(jìn)行。每組小鼠同籠喂養(yǎng)，提供同一飼料和飲用水，從接種第1天開始，記錄每組小鼠攝食總量和飲水總量。

1.3.3 肝、腎功能指標(biāo) 給藥15 d后，各組小鼠取全血分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定其肝、腎功能。

1.3.4 細(xì)胞因子 取接種15 d后動(dòng)物血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)小鼠血清中腫瘤壞死因子（TNF）-α濃度。

1.3.5 肝、腎組織形態(tài) 肝腎組織塊常規(guī)石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅（HE）染色后光鏡下觀察肝腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變并拍照。

1.3.6 肝、腎細(xì)胞凋亡指數(shù) 采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TUNEL） 檢測(cè)肝、腎細(xì)胞凋亡情況。石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化后，首先經(jīng)1%焦碳酸二乙酯水溶液處理30 min，以淬滅內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。以核棕黃色為陽(yáng)性，普通光鏡下每片隨機(jī)選取5個(gè)400倍視野，以陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比的平均數(shù)為凋亡指數(shù)（apoptotic index，AI）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠一般情況觀察

正常對(duì)照組小鼠毛色、活動(dòng)和攝食及飲水量一直保持正常。荷瘤無(wú)干預(yù)組、荷瘤黃連素干預(yù)組小鼠在接種細(xì)胞株7 d皮下可觸及結(jié)節(jié)，并逐漸長(zhǎng)大；至第14天去瘤體重量較對(duì)照組明顯減輕，小鼠活動(dòng)變得遲緩，毛色變粗糙，攝食量逐漸減少，小鼠全部進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)。與荷瘤黃連素組小鼠相比，荷瘤無(wú)干預(yù)組小鼠活動(dòng)遲緩及攝食、飲水減少等情況越來(lái)越嚴(yán)重，毛發(fā)粗糙無(wú)光澤，精神狀態(tài)萎靡；而荷瘤黃連素組小鼠經(jīng)治療后活動(dòng)量和攝食量、飲水量逐漸增加，毛發(fā)逐漸有光澤，精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)。攝食量及飲水量變化情況見圖1、2。

圖1 各組小鼠攝食量變化情況

圖2 各組小鼠飲水量變化情況

2.2 各組小鼠去瘤體重量比較

正常對(duì)照組小鼠去瘤體重量為（20.50±1.22）g，荷瘤無(wú)干預(yù)組小鼠去瘤體重量為（14.33±1.21）g，荷瘤黃連素干預(yù)組小鼠去瘤體重量為（17.33±1.63）g；荷瘤無(wú)干預(yù)組與荷瘤黃連素干預(yù)組較正常對(duì)照組去瘤體重量明顯減輕（P < 0.05），荷瘤干預(yù)組小鼠去瘤體重量明顯低于荷瘤黃連素干預(yù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

2.3 各組小鼠肝、腎功能比較

與正常對(duì)照組比較，荷瘤無(wú)干預(yù)組小鼠白蛋白、膽堿酯酶、肌酐水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），而給予黃連素干預(yù)，可改善荷瘤小鼠的肝腎功能，與荷瘤無(wú)干預(yù)組比較，上述指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

表1 三組小鼠肝、腎功能比較（x±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*P < 0.05；與荷瘤無(wú)干預(yù)組比較，#P < 0.05

2.4 各組小鼠細(xì)胞因子水平比較

血清TNF-α水平在正常對(duì)照組為（241.72±28.65）pg/mL，荷瘤無(wú)干預(yù)組為（684.12±94.87）pg/mL，荷瘤黃連素干預(yù)組為（336.7±41.94）pg/mL；荷瘤無(wú)干預(yù)組與荷瘤黃連素干預(yù)組血清TNF-α水平較正常對(duì)照組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；荷瘤黃連素干預(yù)組較荷瘤無(wú)干預(yù)組TNF-α水平明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05） 。

2.5 光鏡觀察

2.5.1 肝組織 正常對(duì)照組：肝細(xì)胞排列緊密，肝小板清晰，細(xì)胞核清晰，胞漿均勻染色。荷瘤無(wú)干預(yù)組：肝細(xì)胞排列疏松，肝板界限不清晰，細(xì)胞腫脹，可見細(xì)胞核縮破碎，并伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞呈現(xiàn)空泡樣變，壞死。荷瘤黃連素干預(yù)組：細(xì)胞排列相對(duì)規(guī)則，細(xì)胞仍有部分腫脹，無(wú)空泡樣變，大部分細(xì)胞核清晰可見，極少細(xì)胞核出現(xiàn)固縮及破碎。見圖3。

A B C

A：正常對(duì)照組；B：荷瘤無(wú)干預(yù)組；C：荷瘤黃連素干預(yù)組

圖3 各組小鼠肝組織光鏡觀察（HE×400）

2.5.2 腎組織 正常對(duì)照組：腎小球和腎小管細(xì)胞漿及細(xì)胞核染色清晰，無(wú)病變。荷瘤無(wú)干預(yù)組：可見部分腎小球內(nèi)胞質(zhì)外溢，部分腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，少量細(xì)胞呈現(xiàn)核固縮現(xiàn)象，偶見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。荷瘤黃連素干預(yù)組：腎小球和腎小管細(xì)胞染色均勻，細(xì)胞核及胞漿著色清晰，偶見上皮細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核少見固縮現(xiàn)象。見圖4。

2.6 各組小鼠細(xì)胞凋亡情況

2.6.1 肝細(xì)胞凋亡指數(shù) 正常對(duì)照組肝細(xì)胞凋亡指數(shù)為（5.46±0.50）%，荷瘤無(wú)干預(yù)組為（24.01±2.01）%，荷瘤黃連素干預(yù)組為（19.19±5.79）%，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖5。

2.6.2 腎細(xì)胞凋亡指數(shù) 正常對(duì)照組腎細(xì)胞凋亡指數(shù)為（2.22±0.59）%，荷瘤無(wú)干預(yù)組為（16.20±3.91）%，荷瘤黃連素干預(yù)組為（11.80±1.89）%，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖6。

A B C

A：正常對(duì)照組；B：荷瘤無(wú)干預(yù)組；C：荷瘤黃連素干預(yù)組

圖5 各組小鼠肝組織細(xì)胞凋亡（HE×400）

A B C

A：正常對(duì)照組；B：荷瘤無(wú)干預(yù)組；C：荷瘤黃連素干預(yù)組

圖6 各組小鼠腎組織細(xì)胞凋亡（HE×400）

3 討論

惡病質(zhì)是癌癥晚期常見的綜合征，由于長(zhǎng)期能量攝入不足，需消耗體內(nèi)各種組織器官的蛋白質(zhì)供能，致使其所含蛋白質(zhì)的量下降，細(xì)胞合成DNA受阻，各種組織和器官生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，甚至停止，并發(fā)生嚴(yán)重萎縮和脂肪變性，造成臟器功能障礙[3]。黃連素是從毛茛科如黃連、黃柏、三顆針等植物根莖中提取的異喹啉類生物堿，具有清火燥濕、瀉火解毒的功效，臨床長(zhǎng)期用于解熱、解毒、抗腸道細(xì)菌感染[4]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)黃連素還有多種藥理活性，如擴(kuò)張冠狀血管、降血壓、降血脂、降血糖、抗心律失常、抗腫瘤等[5]。

CT-26結(jié)腸腺癌惡病質(zhì)動(dòng)物模型是一個(gè)比較理想的模型，它所表現(xiàn)出的炎癥、糖代謝異常、胰島素抵抗、肌肉蛋白及脂肪組織合成減少、分解增加、體質(zhì)量進(jìn)行性下降、臟器功能損害和全身衰竭等與癌癥惡病質(zhì)患者的表現(xiàn)相似[6]。本研究應(yīng)用黃連素干預(yù)小鼠CT-26結(jié)腸腺癌惡病質(zhì)動(dòng)物模型，提示黃連素能明顯抑制小鼠的體重下降，增加攝食量、飲水量，改善小鼠的一般狀況。

癌性惡病質(zhì)往往伴有多臟器功能損害，終末期常出現(xiàn)多臟器功能障礙[7]。研究表明，多臟器功能損害與惡病質(zhì)誘發(fā)正常器官細(xì)胞凋亡有關(guān)[8]。引起凋亡主要有兩條途徑：細(xì)胞外的死亡受體途徑及細(xì)胞內(nèi)的線粒體途徑。前者主要是刺激因素激活細(xì)胞內(nèi)P53、Fas、Bcl-2、NF-κB等基因，由TNF受體家族介導(dǎo)，使Caspase-8激活；后者是通過刺激因素影響細(xì)胞內(nèi)線粒體的膜電位，導(dǎo)致線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C釋放， 胞內(nèi)Ca2+濃度升高，pH值下降，使Caspase-9激活。兩個(gè)途徑最后都導(dǎo)致效應(yīng)性Caspase-3活化，效應(yīng)性Caspase-3、Caspase-6、Caspase-7激活內(nèi)切核酸酶，使DNA鏈斷裂，最終細(xì)胞結(jié)構(gòu)的全面解體[9]。文獻(xiàn)報(bào)道，TNF-α、NF-κB、泛素蛋白酶體參與了癌癥惡病質(zhì)的發(fā)生，且持續(xù)作用貫穿整個(gè)疾病過程[10]。黃連素能抑制NF-κB活性[11]。本文研究表明，黃連素能明顯減低血清TNF-α水平，減輕惡病質(zhì)小鼠模型肝腎病理?yè)p害程度，減少肝腎組織細(xì)胞凋亡，改善惡病質(zhì)小鼠肝腎功能，提高肝臟儲(chǔ)備能力。其機(jī)制可能為黃連素抑制調(diào)控因子NF-κB活化，NF-κB可進(jìn)一步調(diào)控凋亡相關(guān)基因，致使肝腎細(xì)胞凋亡減少。NF-κB抗細(xì)胞凋亡是一個(gè)涉及多個(gè)信號(hào)通路的復(fù)雜過程，但其主要方式是通過誘導(dǎo)或上調(diào)抗凋亡基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。這些基因調(diào)節(jié)位點(diǎn)上有NF-κB的結(jié)合位點(diǎn)，他們的表達(dá)產(chǎn)物通過抑制細(xì)胞凋亡的死亡受體途徑或線粒體途徑發(fā)揮作用。到目前為止，研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡抑制蛋白（IAPs）、Bcl-2家族、TRAF1、TRAF-2、JNK、c-FLIP、IEX-1L等都參與NF-κB激活后的抗細(xì)胞凋亡過程[12]。

本研究表明，黃連素口服能改善惡病質(zhì)小鼠狀態(tài)，改善食欲，降低體重丟失，減少肝腎細(xì)胞凋亡，保護(hù)肝腎功能。確切分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 馬穎杰，馬妮娜，曹邦偉.腫瘤惡病質(zhì)的分子機(jī)制與其改善的策略與方法[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，12（1）：73-75.

[2] 王海燕，李玉清，王啟會(huì).黃連素抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2007，29（10）： 1500-1502.

[3] 張紅欣，姜達(dá)，張富同，等.實(shí)驗(yàn)性癌性惡病質(zhì)藥物干預(yù)研究[J].臨床薈萃，2012，27（24）：2149-2152.

[4] 柴惠，余軍偉，馬建龍.黃連素對(duì)腫瘤壞死因子TNF-α介導(dǎo)的炎癥作用機(jī)理研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011， 35（4）：489-491.

[5] 楊萍.黃連素臨床應(yīng)用及研究的新進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2011，23（3）：69-72.

[6] 史海嶺，劉芬，郭曉軍，等.黃連素對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移與黏附的影響[J].中國(guó)癌癥雜志，2009，19（12）：910-914.

[7] 吳國(guó)豪.惡性腫瘤病人惡病質(zhì)發(fā)生機(jī)制及營(yíng)養(yǎng)治療[J].外科理論與實(shí)踐，2012，17（2）： 98-101.

[8] 周開國(guó)，何桂珍.腫瘤惡病質(zhì)的機(jī)制及可能的治療[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，31（1）： 104-107.

[9] Mustafa K，Zafer F. Adipokines and ghrelin in gastric cancer cachexia [J] .World Journal of Gastroenterology，2008，（6）：454-456.

[10] Jiang SM，Wu JH，Jia L. Intervention of Mirtazapine on gemcitabine-induced mild cachexia in nude mice with pancreaticcarcinoma xenografts [J]. World Journal of Gastroenterology，2012，（6）：137-138.

[11] 孟曉軍，曾映娟，孔紅娟，等.黃連素對(duì)新診斷2型糖尿病患者內(nèi)皮功能、白介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J].中國(guó)慢性病預(yù)防與控制，2011，19（5）：504-505，508.

[12] 劉善浩，汪興洪.細(xì)胞凋亡抑制蛋白-2研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2009，13（1）：54-56.

（收稿日期：2013-12-22 本文編輯：程 銘）

2.6 各組小鼠細(xì)胞凋亡情況

2.6.1 肝細(xì)胞凋亡指數(shù) 正常對(duì)照組肝細(xì)胞凋亡指數(shù)為（5.46±0.50）%，荷瘤無(wú)干預(yù)組為（24.01±2.01）%，荷瘤黃連素干預(yù)組為（19.19±5.79）%，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖5。

2.6.2 腎細(xì)胞凋亡指數(shù) 正常對(duì)照組腎細(xì)胞凋亡指數(shù)為（2.22±0.59）%，荷瘤無(wú)干預(yù)組為（16.20±3.91）%，荷瘤黃連素干預(yù)組為（11.80±1.89）%，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖6。

A B C

A：正常對(duì)照組；B：荷瘤無(wú)干預(yù)組；C：荷瘤黃連素干預(yù)組

圖5 各組小鼠肝組織細(xì)胞凋亡（HE×400）

A B C

A：正常對(duì)照組；B：荷瘤無(wú)干預(yù)組；C：荷瘤黃連素干預(yù)組

圖6 各組小鼠腎組織細(xì)胞凋亡（HE×400）

3 討論

惡病質(zhì)是癌癥晚期常見的綜合征，由于長(zhǎng)期能量攝入不足，需消耗體內(nèi)各種組織器官的蛋白質(zhì)供能，致使其所含蛋白質(zhì)的量下降，細(xì)胞合成DNA受阻，各種組織和器官生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，甚至停止，并發(fā)生嚴(yán)重萎縮和脂肪變性，造成臟器功能障礙[3]。黃連素是從毛茛科如黃連、黃柏、三顆針等植物根莖中提取的異喹啉類生物堿，具有清火燥濕、瀉火解毒的功效，臨床長(zhǎng)期用于解熱、解毒、抗腸道細(xì)菌感染[4]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)黃連素還有多種藥理活性，如擴(kuò)張冠狀血管、降血壓、降血脂、降血糖、抗心律失常、抗腫瘤等[5]。

CT-26結(jié)腸腺癌惡病質(zhì)動(dòng)物模型是一個(gè)比較理想的模型，它所表現(xiàn)出的炎癥、糖代謝異常、胰島素抵抗、肌肉蛋白及脂肪組織合成減少、分解增加、體質(zhì)量進(jìn)行性下降、臟器功能損害和全身衰竭等與癌癥惡病質(zhì)患者的表現(xiàn)相似[6]。本研究應(yīng)用黃連素干預(yù)小鼠CT-26結(jié)腸腺癌惡病質(zhì)動(dòng)物模型，提示黃連素能明顯抑制小鼠的體重下降，增加攝食量、飲水量，改善小鼠的一般狀況。

癌性惡病質(zhì)往往伴有多臟器功能損害，終末期常出現(xiàn)多臟器功能障礙[7]。研究表明，多臟器功能損害與惡病質(zhì)誘發(fā)正常器官細(xì)胞凋亡有關(guān)[8]。引起凋亡主要有兩條途徑：細(xì)胞外的死亡受體途徑及細(xì)胞內(nèi)的線粒體途徑。前者主要是刺激因素激活細(xì)胞內(nèi)P53、Fas、Bcl-2、NF-κB等基因，由TNF受體家族介導(dǎo)，使Caspase-8激活；后者是通過刺激因素影響細(xì)胞內(nèi)線粒體的膜電位，導(dǎo)致線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C釋放， 胞內(nèi)Ca2+濃度升高，pH值下降，使Caspase-9激活。兩個(gè)途徑最后都導(dǎo)致效應(yīng)性Caspase-3活化，效應(yīng)性Caspase-3、Caspase-6、Caspase-7激活內(nèi)切核酸酶，使DNA鏈斷裂，最終細(xì)胞結(jié)構(gòu)的全面解體[9]。文獻(xiàn)報(bào)道，TNF-α、NF-κB、泛素蛋白酶體參與了癌癥惡病質(zhì)的發(fā)生，且持續(xù)作用貫穿整個(gè)疾病過程[10]。黃連素能抑制NF-κB活性[11]。本文研究表明，黃連素能明顯減低血清TNF-α水平，減輕惡病質(zhì)小鼠模型肝腎病理?yè)p害程度，減少肝腎組織細(xì)胞凋亡，改善惡病質(zhì)小鼠肝腎功能，提高肝臟儲(chǔ)備能力。其機(jī)制可能為黃連素抑制調(diào)控因子NF-κB活化，NF-κB可進(jìn)一步調(diào)控凋亡相關(guān)基因，致使肝腎細(xì)胞凋亡減少。NF-κB抗細(xì)胞凋亡是一個(gè)涉及多個(gè)信號(hào)通路的復(fù)雜過程，但其主要方式是通過誘導(dǎo)或上調(diào)抗凋亡基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。這些基因調(diào)節(jié)位點(diǎn)上有NF-κB的結(jié)合位點(diǎn)，他們的表達(dá)產(chǎn)物通過抑制細(xì)胞凋亡的死亡受體途徑或線粒體途徑發(fā)揮作用。到目前為止，研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡抑制蛋白（IAPs）、Bcl-2家族、TRAF1、TRAF-2、JNK、c-FLIP、IEX-1L等都參與NF-κB激活后的抗細(xì)胞凋亡過程[12]。

本研究表明，黃連素口服能改善惡病質(zhì)小鼠狀態(tài)，改善食欲，降低體重丟失，減少肝腎細(xì)胞凋亡，保護(hù)肝腎功能。確切分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 馬穎杰，馬妮娜，曹邦偉.腫瘤惡病質(zhì)的分子機(jī)制與其改善的策略與方法[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，12（1）：73-75.

[2] 王海燕，李玉清，王啟會(huì).黃連素抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2007，29（10）： 1500-1502.

[3] 張紅欣，姜達(dá)，張富同，等.實(shí)驗(yàn)性癌性惡病質(zhì)藥物干預(yù)研究[J].臨床薈萃，2012，27（24）：2149-2152.

[4] 柴惠，余軍偉，馬建龍.黃連素對(duì)腫瘤壞死因子TNF-α介導(dǎo)的炎癥作用機(jī)理研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011， 35（4）：489-491.

[5] 楊萍.黃連素臨床應(yīng)用及研究的新進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2011，23（3）：69-72.

[6] 史海嶺，劉芬，郭曉軍，等.黃連素對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移與黏附的影響[J].中國(guó)癌癥雜志，2009，19（12）：910-914.

[7] 吳國(guó)豪.惡性腫瘤病人惡病質(zhì)發(fā)生機(jī)制及營(yíng)養(yǎng)治療[J].外科理論與實(shí)踐，2012，17（2）： 98-101.

[8] 周開國(guó)，何桂珍.腫瘤惡病質(zhì)的機(jī)制及可能的治療[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，31（1）： 104-107.

[9] Mustafa K，Zafer F. Adipokines and ghrelin in gastric cancer cachexia [J] .World Journal of Gastroenterology，2008，（6）：454-456.

[10] Jiang SM，Wu JH，Jia L. Intervention of Mirtazapine on gemcitabine-induced mild cachexia in nude mice with pancreaticcarcinoma xenografts [J]. World Journal of Gastroenterology，2012，（6）：137-138.

[11] 孟曉軍，曾映娟，孔紅娟，等.黃連素對(duì)新診斷2型糖尿病患者內(nèi)皮功能、白介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J].中國(guó)慢性病預(yù)防與控制，2011，19（5）：504-505，508.

[12] 劉善浩，汪興洪.細(xì)胞凋亡抑制蛋白-2研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2009，13（1）：54-56.

（收稿日期：2013-12-22 本文編輯：程 銘）

2.6 各組小鼠細(xì)胞凋亡情況

2.6.1 肝細(xì)胞凋亡指數(shù) 正常對(duì)照組肝細(xì)胞凋亡指數(shù)為（5.46±0.50）%，荷瘤無(wú)干預(yù)組為（24.01±2.01）%，荷瘤黃連素干預(yù)組為（19.19±5.79）%，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖5。

2.6.2 腎細(xì)胞凋亡指數(shù) 正常對(duì)照組腎細(xì)胞凋亡指數(shù)為（2.22±0.59）%，荷瘤無(wú)干預(yù)組為（16.20±3.91）%，荷瘤黃連素干預(yù)組為（11.80±1.89）%，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖6。

A B C

A：正常對(duì)照組；B：荷瘤無(wú)干預(yù)組；C：荷瘤黃連素干預(yù)組

圖5 各組小鼠肝組織細(xì)胞凋亡（HE×400）

A B C

A：正常對(duì)照組；B：荷瘤無(wú)干預(yù)組；C：荷瘤黃連素干預(yù)組

圖6 各組小鼠腎組織細(xì)胞凋亡（HE×400）

3 討論

惡病質(zhì)是癌癥晚期常見的綜合征，由于長(zhǎng)期能量攝入不足，需消耗體內(nèi)各種組織器官的蛋白質(zhì)供能，致使其所含蛋白質(zhì)的量下降，細(xì)胞合成DNA受阻，各種組織和器官生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，甚至停止，并發(fā)生嚴(yán)重萎縮和脂肪變性，造成臟器功能障礙[3]。黃連素是從毛茛科如黃連、黃柏、三顆針等植物根莖中提取的異喹啉類生物堿，具有清火燥濕、瀉火解毒的功效，臨床長(zhǎng)期用于解熱、解毒、抗腸道細(xì)菌感染[4]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)黃連素還有多種藥理活性，如擴(kuò)張冠狀血管、降血壓、降血脂、降血糖、抗心律失常、抗腫瘤等[5]。

CT-26結(jié)腸腺癌惡病質(zhì)動(dòng)物模型是一個(gè)比較理想的模型，它所表現(xiàn)出的炎癥、糖代謝異常、胰島素抵抗、肌肉蛋白及脂肪組織合成減少、分解增加、體質(zhì)量進(jìn)行性下降、臟器功能損害和全身衰竭等與癌癥惡病質(zhì)患者的表現(xiàn)相似[6]。本研究應(yīng)用黃連素干預(yù)小鼠CT-26結(jié)腸腺癌惡病質(zhì)動(dòng)物模型，提示黃連素能明顯抑制小鼠的體重下降，增加攝食量、飲水量，改善小鼠的一般狀況。

癌性惡病質(zhì)往往伴有多臟器功能損害，終末期常出現(xiàn)多臟器功能障礙[7]。研究表明，多臟器功能損害與惡病質(zhì)誘發(fā)正常器官細(xì)胞凋亡有關(guān)[8]。引起凋亡主要有兩條途徑：細(xì)胞外的死亡受體途徑及細(xì)胞內(nèi)的線粒體途徑。前者主要是刺激因素激活細(xì)胞內(nèi)P53、Fas、Bcl-2、NF-κB等基因，由TNF受體家族介導(dǎo)，使Caspase-8激活；后者是通過刺激因素影響細(xì)胞內(nèi)線粒體的膜電位，導(dǎo)致線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C釋放， 胞內(nèi)Ca2+濃度升高，pH值下降，使Caspase-9激活。兩個(gè)途徑最后都導(dǎo)致效應(yīng)性Caspase-3活化，效應(yīng)性Caspase-3、Caspase-6、Caspase-7激活內(nèi)切核酸酶，使DNA鏈斷裂，最終細(xì)胞結(jié)構(gòu)的全面解體[9]。文獻(xiàn)報(bào)道，TNF-α、NF-κB、泛素蛋白酶體參與了癌癥惡病質(zhì)的發(fā)生，且持續(xù)作用貫穿整個(gè)疾病過程[10]。黃連素能抑制NF-κB活性[11]。本文研究表明，黃連素能明顯減低血清TNF-α水平，減輕惡病質(zhì)小鼠模型肝腎病理?yè)p害程度，減少肝腎組織細(xì)胞凋亡，改善惡病質(zhì)小鼠肝腎功能，提高肝臟儲(chǔ)備能力。其機(jī)制可能為黃連素抑制調(diào)控因子NF-κB活化，NF-κB可進(jìn)一步調(diào)控凋亡相關(guān)基因，致使肝腎細(xì)胞凋亡減少。NF-κB抗細(xì)胞凋亡是一個(gè)涉及多個(gè)信號(hào)通路的復(fù)雜過程，但其主要方式是通過誘導(dǎo)或上調(diào)抗凋亡基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。這些基因調(diào)節(jié)位點(diǎn)上有NF-κB的結(jié)合位點(diǎn)，他們的表達(dá)產(chǎn)物通過抑制細(xì)胞凋亡的死亡受體途徑或線粒體途徑發(fā)揮作用。到目前為止，研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡抑制蛋白（IAPs）、Bcl-2家族、TRAF1、TRAF-2、JNK、c-FLIP、IEX-1L等都參與NF-κB激活后的抗細(xì)胞凋亡過程[12]。

本研究表明，黃連素口服能改善惡病質(zhì)小鼠狀態(tài)，改善食欲，降低體重丟失，減少肝腎細(xì)胞凋亡，保護(hù)肝腎功能。確切分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 馬穎杰，馬妮娜，曹邦偉.腫瘤惡病質(zhì)的分子機(jī)制與其改善的策略與方法[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，12（1）：73-75.

[2] 王海燕，李玉清，王啟會(huì).黃連素抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2007，29（10）： 1500-1502.

[3] 張紅欣，姜達(dá)，張富同，等.實(shí)驗(yàn)性癌性惡病質(zhì)藥物干預(yù)研究[J].臨床薈萃，2012，27（24）：2149-2152.

[4] 柴惠，余軍偉，馬建龍.黃連素對(duì)腫瘤壞死因子TNF-α介導(dǎo)的炎癥作用機(jī)理研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011， 35（4）：489-491.

[5] 楊萍.黃連素臨床應(yīng)用及研究的新進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2011，23（3）：69-72.

[6] 史海嶺，劉芬，郭曉軍，等.黃連素對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移與黏附的影響[J].中國(guó)癌癥雜志，2009，19（12）：910-914.

[7] 吳國(guó)豪.惡性腫瘤病人惡病質(zhì)發(fā)生機(jī)制及營(yíng)養(yǎng)治療[J].外科理論與實(shí)踐，2012，17（2）： 98-101.

[8] 周開國(guó)，何桂珍.腫瘤惡病質(zhì)的機(jī)制及可能的治療[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，31（1）： 104-107.

[9] Mustafa K，Zafer F. Adipokines and ghrelin in gastric cancer cachexia [J] .World Journal of Gastroenterology，2008，（6）：454-456.

[10] Jiang SM，Wu JH，Jia L. Intervention of Mirtazapine on gemcitabine-induced mild cachexia in nude mice with pancreaticcarcinoma xenografts [J]. World Journal of Gastroenterology，2012，（6）：137-138.

[11] 孟曉軍，曾映娟，孔紅娟，等.黃連素對(duì)新診斷2型糖尿病患者內(nèi)皮功能、白介素-6、腫瘤壞死因子-α的影響[J].中國(guó)慢性病預(yù)防與控制，2011，19（5）：504-505，508.

[12] 劉善浩，汪興洪.細(xì)胞凋亡抑制蛋白-2研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2009，13（1）：54-56.

（收稿日期：2013-12-22 本文編輯：程 銘）