瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫模型大鼠血清炎癥因子影響的實驗研究

卞 海， 宋 燕， 王雅娟， 李亞軍， 孫洪勝， 陳賽賽， 龍子江*

（1.安徽中醫藥大學藥理教研室， 安徽 合肥 230038； 2.安徽省中醫院，安徽 合肥 230038）

［科研報道］

瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫模型大鼠血清炎癥因子影響的實驗研究

卞 海1， 宋 燕2， 王雅娟1， 李亞軍2， 孫洪勝1， 陳賽賽2， 龍子江1*

（1.安徽中醫藥大學藥理教研室， 安徽 合肥 230038； 2.安徽省中醫院，安徽 合肥 230038）

目的 探討瓜蔞薤白白酒湯大、中、小劑量對硬膜下血腫模型大鼠血清中炎癥因子的影響。方法 建立硬膜下血腫大鼠模型， 隨機分為假手術組、 模型組、 陽性組 （華佗再造丸）、 瓜蔞薤白白酒湯大、 中、 小劑量組， 每組10 只， 各組連續灌胃 14 d 后， 腹主動脈取血， 以酶聯免疫吸附測定法 （ELISA） 檢測各組血清中 IL-2、 IL-6、 IL-8、TNF-α的水平。 觀察各項指標的差異性及瓜蔞薤白白酒湯大、 中、 小劑量組對硬膜下血腫的治療作用， 并對瓜蔞薤白白酒湯大、中、小劑量組的治療效果進行對比。結果 瓜蔞薤白白酒湯高、中劑量組能夠升高硬膜下血腫模型大鼠血清炎癥因子 IL-2 水平， 升高 IL-6、 IL-8 水平， 與模型組比較， 差異具有統計學意義 （ P＜0.01、 P＜0.05 ） 。 結論 瓜蔞薤白白酒湯能減小血腫面積起到有效的腦保護作用。

瓜蔞薤白白酒湯；硬膜下血腫；炎癥因子

硬膜下血腫是指顱內出血的血液積聚于硬腦膜下腔形成積液或血腫， 是臨床上的常見病之一［1］。 顱內 CSDH的病因機制尚未明確，由于其特殊的易患人群，死亡率達1.5% ～8%， 術后復發率達 9.2% ～26.5%［2］。 由于多種原因導致顱內出血聚集于硬膜下腔稱為硬膜下血腫 （Subdural Hematoma， SDH）， 為神經外科最常見的顱內血腫之一，可呈多發性、并常伴腦實質損傷或與別種血腫合并發生， 其發病率約占創傷性顱內血腫的 50%［3］。 硬膜下血腫一旦發生，不易自愈，通常需采用手術治療，但病殘率與死亡率較高［4］。 臨床癥狀不明顯、 不能手術或不愿手術的硬膜下血腫患者，則可采用包括中醫中藥在內的保守治療方法。中醫可采用活血化瘀法促進腦部積液的吸收治療硬膜下血腫［5］。 諸多研究證實， 白介素不僅參與缺血性腦損傷局部炎癥反應，而且在復雜的細胞因子網絡中處于中心地位［4］。 本實驗通過對大鼠 血清中炎癥 因子 IL-2、 IL-6、IL-8、 TNF-α水平的檢測以及抗凝血的研究， 探討瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫模型大鼠的作用及作用機制，為臨床用藥提供實驗依據。

瓜蔞薤白白酒湯出自東漢張仲景 《金匱要略》， 由瓜蔞、薤白、白酒組成。去白酒即為瓜蔞薤白湯，功用通陽散結、行氣祛痰，主治胸痹，癥見胸部隱痛，甚至胸痛徹背，喘息咳唾，短氣，舌苔白膩，脈沉弦或緊。方中以瓜蔞理氣寬胸，滌痰散結，為君藥。薤白溫通滑利，通陽散結，行氣止痛，為臣藥。兩藥相配，一祛痰結、二通陽氣，相輔相成，為治胸痹之要藥。佐以辛散溫通之白酒，行氣活血，增強薤白通陽之功。

1 材料與方法

1.1 實驗動 物與藥 物 健 康 SD大鼠 60 只， 體質量（200 ±20） g， 雄性， 由安徽醫科大學動物中心提供， 許可證號 SCXK （蘇） 2010-0004； 瓜蔞薤白白酒湯購自安徽中醫藥大學第一附屬醫院 ［制備方法： 瓜蔞實一枚 （24 g）、薤白半升 （12 g）、 白酒七升 （適量）。 三味同煮， 取二升，分溫再用］； 陽性藥為華佗再造丸 （廣州奇星藥業有限公司） 批號 9350。

1.2 實驗試劑與器材 水合氯醛， 天津市光復精細化工研究所， 批號 20110304； IL-2 試劑盒， 上海源葉生物技術有限公司， 批號 CK-E95459C； IL-6 試劑盒， 上海源葉生物技術有限公司， 批號 CK-E67489C； IL-8 試劑盒， 上海源葉生物技術有限公司， 批號 CK-E87059C； 牙骨粉， 上海二醫張江生物材 料 有限公司， 批號 120605； EDTA-Na2抗 凝 管，江西精致醫療器械有限公司， 批號 2012025； STRONG-204牙科鉆 （ Saeshin 公司）； ACS-6 電 子 計 價 秤 （ 華 鷹 衡 器 有限公司）； JW-3021HR低溫離心機 （安徽嘉文有限公司）；DK-420 電熱恒溫水槽 （上海三發科學儀器有限公司）； RT-6000 酶標分析儀 （深圳雷杜生命科學股份有限公司）。

1.3 動物模型制備 取 SD大鼠 60 只， 適應性飼養 7 d 后稱重， 腹腔注射 3.5%水合氯醛 （1 m L/100 g） 麻醉大鼠，將大鼠頭部剃去 3 cm×3 cm鼠毛， 消毒后用手術刀沿頭頂正中線切長3 cm的切口， 剝離右側的頭皮、 肌層及骨膜；眼眥取血約 600 μL， 吸入注射器， 用牙科鉆在大鼠頭頂前囟右 下 側 3.0 mm處 鉆 出直徑為 1.0mm的骨 孔， 向 硬 膜 下腔隙緩 慢 注射 300 μL自 體血 液， 留針 5 min 后 拔 出 并 用 牙科粉封閉骨孔，縫合頭皮，在縫合處滴加青霉素以防止感染。假手術組大鼠造模方法相同，但不注射自體血液。

1.4 動物分組及給藥 將造模完成后的大鼠隨機分為模型組、假手術組、陽性藥組、瓜蔞薤白白酒湯大劑量組、瓜蔞薤白白酒湯中劑量組、瓜蔞薤白白酒湯小劑量組，每組10只； 各組大鼠按設定劑量灌胃給藥， 其中陽性藥組為0.54 g/kg， 瓜蔞薤白白酒湯大劑量組 （ 所用藥物均為已制備好的 成 藥） 為 5.65 g/kg， 瓜 蔞 薤 白 白 酒 湯 中 劑 量 組 為2.83 g/kg， 瓜 蔞 薤白白酒 湯 小劑量組 為 1.41 g/kg， 模 型 組和假手 術 組灌胃給 同 等容量蒸 餾 水， 連 續 給藥 14 d。

1.5 動物處理 于第14 天各組大鼠末次灌胃給藥1 h 后， 用3.5%水合氯醛 （1.0mL/100 g體質量） 腹腔注射麻醉， 進行腹主動脈采血， 并將血液放入 EDTA-Na2抗凝管和軟管， EDTA-Na2抗凝管以 3 000 r/min 低溫離心 15min， 取血漿放入 EP管中， 軟管中的血 3 000 r/min 離心 15min 得血清。

2 實驗結果

2.1 瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫模型大鼠血清 IL-6、 IL-8水平影響 實驗結果見表1。

表 1 各 用藥組對 硬 膜 下 血 腫 模 型 大 鼠 血 清 IL-6、 IL-8 的影響 （， n=10）

表 1 各 用藥組對 硬 膜 下 血 腫 模 型 大 鼠 血 清 IL-6、 IL-8 的影響 （， n=10）

注： 與空白組比較，**P＜0.01； 與模型 組比 較，△△P＜0.01，△P＜0.05

組 別 劑量/（g·kg-1）IL-6/（ng·L-1）IL-8/（ng·L-1）假手術組- 169.46 ±15.03 497.22 ±76.29模型組 - 211.57 ±10.26** 710.51 ±22.49**瓜蔞薤白白酒湯高劑量組5.65 100.01 ±9.94△△ 362.25 ±35.48△△瓜蔞薤白白酒湯中劑量組2.83 173.74 ±14.19△ 380.01 ±32.87△△瓜蔞薤白白酒湯低劑量組1.41 188.76 ±13.17 476.69 ±45.93華佗再造丸組 0.54 152.56 ±14.56△△543.96 ±42.17△△

與空白組比較， 模型組血清 IL-6 水平上升， 差異具有統計學意義 （P＜0.01）， IL-8 水平上升 （P＜0.01）， 差異具有統計學意義。與模型組比較，華佗再造丸陽性對照組，IL-6， IL-8 水 平 下 降， 差 異 具 有 統 計 學 意 義 （ P＜0.01、P＜0.01）； 瓜蔞薤白白酒湯高劑量組、 中劑量組 IL-6 水平均下降， 差異具有統計學意義 （P＜0.01、 P＜0.05）； 瓜蔞薤白白酒湯高劑量組、 中劑量組 IL-8 水平均下降， 差異具有統計學意義 （P＜0.01）。

2.2 瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫模 型大鼠血清 IL-2、TNF-α水平影響 實驗結果見圖 1 ～2。

圖 1 各用藥組對硬膜下血腫模型大鼠血清 IL-2 水平的影響 （， n=10）

圖 2 各用藥組對硬膜下血腫模型大鼠血清 TNF-α水平的影響 （， n=10）

與空白組比較， 模型組血清 IL-2 水平下降， 差異具有統計學意義 （P＜0.01）。 與模型組比較， 瓜蔞薤白白酒湯高、 中劑量組 IL-2 水平上升， 差異具有統計學意義 （ P＜0.01）； 華佗再造丸陽性對照組 IL-2 水平上升， 差異具有統計學意義 （P＜0.01）。 與空白組比較， 模型組大鼠血清TNF-α水平升高， 差異具有統計學意義 （P＜0.01）。 與模型組比較， 瓜蔞薤白白酒湯高、 中劑量組 TNF-α水平下降， 差異具有統計學意義 （P＜0.01）。 華佗再造丸陽性對照組 TNF-α水平下降， 差異具有統計學意義 （P＜0.01）。

3 討論

以往 的 研 究 者 從 瓜 蔞 （ Trichosanthes kirilowii Maxim.）里分離出具有血球凝集活性的外源性凝集素。并且從種子油的不皂化部分里分離鑒定出了5 個羥基化甾醇， 10 個 D：C-異齊墩果烷型三萜， 2 個側鏈具有羥基四氫呋喃的環阿爾廷醇型三萜，2個葫蘆烷型三萜，它們都是新化合物，其中 7-氧代-10α-葫蘆二烯醇、 7-Oxoisomultiflorenol、 3-表栝樓仁二醇 （ 3-epikarounidiol） 、 3-Epibry-onolol等 對 TPA誘 導的小鼠耳部炎癥具有顯著抑制作用。 IL-8 生物學作用主要有激活中性粒細胞并釋放超氧化物和溶酶體酶、使其產生呼吸爆發、刺激中性粒細胞產生白三烯而增加血漿滲出，因此炎癥反應與其生物學活性密切相關［6］。 研究表明薤白（ Allium macrostemon Bunge） 含有以 下幾種 有效成分： 甲基大蒜氨酸、大蒜糖和大蒜氨酸。揮發油主要是甲基丙烯基三硫醚、甲基烯丙基三硫醚、二甲基三硫醚和甲基丙基三硫醚等硫醚類化合物。 N-反式阿魏酰酪胺和 N-香豆酰酪胺可以有效地抗人體血小板聚集［7］。 藥理數據顯示薤白苷有較強的抑制 ADP誘導的人血小板聚集作用。

TNF-α可促使星形 膠質細 胞中的 IL-6、 IL-8 等炎癥因子的 mRNA轉錄及表達， 起到協同致炎作用。 TNF-α還可誘導強效血管活性物質的釋放，從而引發血管收縮，減少局部腦血流量，增加毛細管通透性，進一步加重血腦屏障，促進腦缺血及水腫的發生［8］。 IL-6 與其受體特異性結合， 通過細胞內信號轉導促進炎癥反應和凝血。在機體感染、創傷等原因時 IL-6 參與了受傷部位的單核細胞和粒細胞的集聚和激活、血栓形成、血管擴張、血小板集聚，加重水腫和腦缺血等。 IL-2 主要由活化的 T淋巴細胞產生， 其生物學活性是自然殺傷細胞增殖和促進細胞毒性淋巴細胞，誘導淋巴因子激活殺傷細胞，促進B淋巴細胞的增殖和分化［9］。 本實驗中瓜蔞薤白白酒湯高劑量組、 中劑量組 IL-2高于模型組，由此可看出瓜蔞薤白白酒湯可以促進T淋巴細胞對 IL-2 的產生和釋放， 在硬膜下血腫疾病中具有一定的療效［10］。

硬膜下血腫中 IL-6、 IL-8 和 TNF-α的水平 與其術后復發有明顯的相關性。本實驗使用的復方瓜蔞薤白白酒湯能夠升高 大 鼠 血 清 中 IL-2 的水 平， 降 低 IL-6、 IL-8、 TNF-α水平，對大鼠血清中炎癥因子具有一定的調節作用。

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）05-1051-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.037

2013-08-15

安徽中醫藥大學 2013 年大學生創新創業基金項目 （201320）； 2013 年度安徽省高等學校省級自然科學研究項目（KJ2013A173）； 2014 年度安徽省自然科學研究項目 （1408085QH181）

卞 海 （1981—） ， 男， 碩士， 講師， 研究方向： 藥理學。 Tel： 13956062588， E-mail： bianhai410@126.com

*通信作者： 龍子江， 教授， 碩士生導師， 研究方向： 中藥藥理學。 Tel： （0551） 65169216， E-mail： lzjyls@163.com