五味子 “生熟異用” 之補腎陰作用

高 慧, 佟 鑫, 裴啟洋, 賈天柱

1.遼寧中醫藥大學藥學院, 遼寧 大連116600； 2.國家中醫藥管理局中藥炮制原理解析重點研究室, 遼寧 大連 116600； 3.遼寧省中藥炮制工程技術研究中心, 遼寧 大連 116600）

五味子 “生熟異用” 之補腎陰作用

高 慧1,2,3, 佟 鑫1,2,3, 裴啟洋1,2,3, 賈天柱1,2,3

1.遼寧中醫藥大學藥學院, 遼寧 大連116600； 2.國家中醫藥管理局中藥炮制原理解析重點研究室, 遼寧 大連 116600； 3.遼寧省中藥炮制工程技術研究中心, 遼寧 大連 116600）

目的 比較五味子、醋五味子、酒五味子對腎陰虛小鼠的影響。方法 采用氫化可的松致小鼠腎陰虛模型，以六味地黃丸為陽性對照，以血清中環磷酸腺苷、環磷酸鳥苷、乙酰膽堿、肌酐的量，小鼠腎臟、肝臟、脾臟的臟器指數為評價指標。結果 五味子不同炮制品對腎陰虛小鼠均有一定治療作用，可改善小鼠激素水平，增加臟器指數。其中酒制品作用最好，劑量之間無顯著性差異。結論 臨床應用于治療腎陰虛時應首選酒五味子。

五味子;炮制;腎陰虛;氫化可的松

五 味子為木蘭 科 藤 本植物五 味 子 Schisandra chinensis（Turcz.） Baill的干燥成熟果實， 功能收斂固澀， 益氣生津， 補腎寧心［1］。 《本草綱目》 記載五味子 “入嗽藥生用，入補藥熟用”， 即五味子“生熟異用”。 前期實驗比較五味子不同炮制品對腎陽虛小鼠的影響發現，五味子對腎陽虛小鼠臟器指數、激素水平都有積極影響，且炮制后作用增強。因五味子既補腎陽又補腎陰，故本課題分別比較生熟五味子的補腎陽和補腎陰作用，以說明五味子 “入補藥熟用” 的炮制原理。 目前臨床常用炮制品種有醋五味子、酒五味子、蜜五味子等，醋五味子為藥典收載五味子唯一的炮制品種，但研究五味子的炮制沿革發現，醋五味子是近代新增的炮制品種，推測 “入補藥熟用” 中的五味子可能是酒五味子。所以本實驗比較五味子、醋五味子、酒五味子對腎陰虛小鼠的影響，為五味子 “生熟異用”研究及臨床合理應用提供依據。

1 材料

1.1 動物 KM小鼠雌雄各半 90 只， 體質量 18 ～22 g， 由大連醫科大學實驗動物中心提供， 動物合格證號為 ［SCXK （遼） 2008-0002］。普通飼料，定時定量喂食，自由飲水。

1.2 藥物與試劑 五味子購自遼寧鳳城五味子種植基地，由遼寧中醫藥大學藥用植物教研室王冰教授鑒定為北五味子。

醋五味子制備:取凈五味子加米醋拌勻，悶潤1.5 h， 蒸制 5 h， 50 ℃干燥至恒定質量。 五味子-米醋為100 ∶20。

酒五味子: 取凈五味子加黃酒拌勻， 悶潤1 h，蒸制 4 h， 50 ℃干燥至恒定質量。 五味子-黃酒為100 ∶20。

氫化可的松注射液 （哈藥集團制藥總廠，批號 H20023069）

六味地黃丸 （北京同仁堂藥業， 批號201209033）， 環磷酸腺 苷、 環磷酸鳥苷、 肌酐、乙酰膽堿試劑盒 （上海科興商貿有限公司 批號20120402B）。

1.3 儀器 離心機 （上海安亭科技公司 TGL-16C）， 分 析 天 平 （ 上 海 天 平 儀 器 廠 生 產FA1004B），酶標儀 （上海賽默飛世爾儀器有限公司 MK3）。

2 方法

2.1 藥物制備 五味子水提物的制備: 分別取一定量五味子不同炮制品粗粉，加8倍量的水浸泡0.5 h， 煎煮 3 次， 每次 1 h， 濾過，合并濾液， 濃縮， 制 成 低、 高 劑 量 組 （ 合 生 藥 量 45、 90 mg/mL）。

六味地黃丸藥液制備: 取六味地黃丸 18 g， 加入 100 mL純凈水制成 0.18 g/mL混懸液。

2.2 分組及給藥 將90 只 KM小鼠雌雄各半隨機分為9組，即空白對照組，模型對照組，陽性對照（六味地黃丸） 組、 生品低、高劑量組，醋制品低、 高劑量組， 酒制品低、 高劑量組， 每組10只。除空白組與模型組灌胃生理鹽水外，其他組灌胃相應藥液， 灌胃劑量均為 0.02 mL/g， 連續 11 d， 第7天開始除空白組外其他各組在灌胃同時腹腔注射氫化可的松注射液制造腎陰虛模型， 0.2 mL/只，連續4 d。 每3天稱定質量， 并記錄觀察精神行為狀況。

2.3 取材 第 10 天給藥后禁食不禁水 24 h， 第11 天末次給藥 1 h 后采取摘眼球法取血約 1 m L，放入 EP管中， 于 10 000 r/min 的離心機中離心 5 min， 取血清于 EP管中， -20 ℃保存備用。分離肝、脾、兩側腎臟，用生理鹽水洗凈，濾紙拍干，于分析天平稱定質量。

2.4 指標測量 激素指標測量: 嚴格按照試劑盒說明書提供方法檢測，經過稀釋、加樣、溫育、洗滌、 顯色后于 405 nm處測定吸光度，計算即得。臟器指數測量:臟器分析天平稱定質量，按照“臟器指數 = （臟器質量/體質量） ×1 000” 進行計算。

3 結果

3.1 對 cAMP、 cGMP及比值的影響 模型組環磷酸腺苷 （cAMP） 較空白組升高明顯， 環磷酸鳥苷（cGMP） 變化不明顯， cAMP/cGMP升高明顯，治療組較空白組 cAMP升高幅度較模型組減少，有顯著性差異， cGMP變化不明顯， cAMP/cGMP介于模型與空白之間，與模型組存在顯著性差異。各炮制品中酒制品最好，低、高劑量間無顯著性差距，低劑量略好。 結果見表1。

表1 不同炮 制 品對腎陰 虛 小鼠 cAM P、 cGM P水 平 的影響（， n=10）Tab.1 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on meliorating the cAMP， cGMP of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

表1 不同炮 制 品對腎陰 虛 小鼠 cAM P、 cGM P水 平 的影響（， n=10）Tab.1 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on meliorating the cAMP， cGMP of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

注: 與模型組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01。 下表同

組別 cAMP/（PM·mL-1）cGMP/（PM·m L-1）（cAMP/ cGMP）空白對照組 45.71 ±6.26**1.78 ±0.15 25.16 ±1.71**模型對照組 75.11 ±3.42 1.48 ±0.13 51.05 ±6.57**陽性對照組 55.02 ±11.73* 2.12 ±1.20 27.19 ±6.51**生品低劑量組 66.72 ±11.04* 1.73 ±0.17 37.33 ±5.26**生品高劑量組 67.15 ±9.40* 1.81 ±0.23 37.75 ±7.57**醋品低劑量組 60.84 ±9.40 1.52 ±0.15*39.21 ±7.00**醋品高劑量組 70.59 ±7.84* 1.80 ±0.21 39.24 ±4.52**酒品低劑量組 72.85 ±6.07 2.11 ±0.10 34.69 ±3.03**酒品高劑量組 72.88 ±6.54 2.12 ±0.20 35.88 ±6.35**

3.2 對 Ach、 Cr水平的影響 模型組較空白組乙酰膽堿 （ Ach） 降低， 肌苷 （ Cr） 升高， 差異明顯，治療組較模型組治療效果明顯，酒制品效果最好，高低劑量間無顯著性差異。結果見表2。

表 2 不同炮制品對腎陰虛小鼠 Ach、 Cr的影響 （，n=10）Tab.2 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on m eliorating the Ach， Cr of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

表 2 不同炮制品對腎陰虛小鼠 Ach、 Cr的影響 （，n=10）Tab.2 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on m eliorating the Ach， Cr of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

組 別 Ach/（ pg·m L-1） Cr/（ ng·m L-1）空白對照組 23.98 ±1.25** 13.17 ±0.70**模型對照組 18.49 ±2.29 18.82 ±0.69**陽性對照組 23.23 ±2.56** 14.71 ±0.79**生品低劑量組 20.32 ±1.04* 16.31 ±0.71**生品高劑量組 19.78 ±0.70 15.69 ±0.58**醋品低劑量組 20.66 ±1.43 15.63 ±0.69**醋品高劑量組 20.37 ±1.90* 15.95 ±0.73**酒品低劑量組 21.85 ±1.53** 15.67 ±0.70**酒品高劑量組 22.28 ±1.01** 14.46 ±0.74**

3.3 對臟器指數的影響 空白組與給藥組較模型組臟器指數高，酒品低劑量組效果最好，較其他組有顯著性差異。 見表3。

表3 不同炮制品對腎陰虛小鼠臟器指數的影響（，n=10）Tab.3 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on the viscera index of kidneys， liver， spleen of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

表3 不同炮制品對腎陰虛小鼠臟器指數的影響（，n=10）Tab.3 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on the viscera index of kidneys， liver， spleen of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

組 別 腎臟 /（ mg·g-1） 肝臟 /（ mg·g-1） 脾臟 /（ mg·g-1）空白對照組 12.36 ±1.14**60.06 ±3.83** 3.75 ±0.62**模型對照組 9.49 ±4.55 42.05 ±2.99 1.32 ±0.28陽性對照組 12.28 ±1.75**49.84 ±4.05** 1.87 ±0.46*生品低劑量組 11.10 ±2.24 44.50 ±2.76 1.48 ±0.19生品高劑量組 10.92 ±1.50 43.54 ±3.51 1.47 ±0.14*醋品低劑量組 10.53 ±1.08 53.55 ±1.50** 1.82 ±0.50醋品高劑量組 10.93 ±1.26 54.49 ±3.47** 1.56 ±0.12酒品低劑量組 10.91 ±0.96 49.65 ±3.89** 2.42 ±0.12**酒品高劑量組 11.29 ±1.40 47.42 ±4.05** 1.83 ±0.21*

4 討論

目前研究中 常用的 腎虛模 型有兩 種［2-6］， 即甲狀腺素腎虛模型和氫化可的松腎虛模型，對比發現甲狀腺素所致模型為腎陰不足，虛火內生的甲亢腎虛模型，并非五味子主治證，故本實驗采用注射氫化可的松造模。預實驗中以進食量，進水量以及小鼠大便狀態為指標［7］， 考察腹腔注射、 皮下注射、后肢肌肉注射造模效果，腹腔注射效果最好，注射一天后小鼠進食量明顯減小，進水量增加，大便干結，故選用腹腔注射。氫化可的松腎陰虛模型關鍵在于短程、大劑量，造模時間長容易由陰虛轉陽虛，劑量小則造模不能成功，預實驗過程中發現小鼠腹腔注射最大可承受劑量為 0.2 mL， 超過0.2 mL小鼠會出現立即昏厥， 抽搐， 甚至死亡，故劑量定為 0.2 mL。 大劑量注射氫化可的松會導致大量蛋白質、脂肪水解，是一種機體的生理應激反應，表現為小鼠體質量明顯下降，而治療組體質量下降趨勢較緩于模型組，五味子可減緩這種應激作用。大劑量給予氫化可的松可致全身過敏反應，實驗過程中表現為小鼠眼瞼腫脹，出水，模型組中6只小鼠雙眼腫脹，出水，治療組中兩組各出現一只，故五味子可以較好地緩解這種過敏癥狀。

環磷酸腺苷 （cAMP）、 環磷酸鳥苷 （cGMP）對細胞功能具有雙向調節作用，通過相互拮抗作用使細胞處于穩定狀態，與傳統醫學中的陰陽學說相似［8］， cAMP升 高， 說 明 機 體 處 于 陰 虛 狀 態，cGMP升高則為陽虛， 因此 cAMP/cGMP升高則為陰虛，降低則為陽虛，是目前比較常用，也比較權威的指標。

肝臟具有多種生理功能，為體內糖的重要貯備器官。從模型組與空白組肝臟臟器指數明顯差異說明采用氫化可的松造模可導致小鼠肝臟萎縮，但使用炮制品治療后小鼠肝臟增重，說明炮制后可增強小鼠對糖類的吸收，進一步說明了五味子炮制前后功效的差異。

氫化可的松是一種強的免疫抑制劑，強烈抑制淋巴細胞增殖，進一步導致脾臟萎縮，降低小鼠免疫功能［9-10］， 故選擇脾臟臟器指數作為對治療作用的評價指標，從實驗結果發現五味子能提高腎陰虛小鼠的免疫作用，酒制品高劑量組好［9-10］。

前期查閱文獻 ［11-14］發現腎陰虛型大鼠垂體及下丘腦處于受抑制狀態 （外源性激素的負反饋抑制作用），HPA軸功能下降， 主要表現為促腎上腺素釋放激素 （CRH） 減少， 進而影響 Ach 的分泌， 故采用 Ach 這一腎上腺指數為指標， 檢測腎陰虛小鼠的 HPA軸功能狀態。

本研究證明五味子能改善氫化可的松所致腎陰虛小鼠的激素水平，提高肝腎臟器指數，對腎陰虛有一定治療作用。其機制可能為減輕對腎臟的損害，從而使Cr水平降低， 腎臟臟器指數增加; 減小氫化可的松免疫抑制作用，保護肝脾功能;減小HPA軸抑制作用， 增加血清中 Ach 的量。 本研究實驗數據表明五味子低劑量組較高劑量組效果好，酒制品較其他炮制品效果好。

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Effect of processed Schisandrae chinensis Fructus on tonifying kidney yin

GAO Hui1，2，3， TONG Xin1，2，3， PEIQi-yang1，2，3， JIA Tian-zhu1，2，3
（1.College of Pharmacy， Liaoning University of TCM， Dalian 116600 ， China;2.Key Laboratory of Processing Theory Analysisof State Administration of TCM， Dalian 116600， China;3.Engineering Technology Research Center of TCM Processing of Liaoning Province， Dalian 116600， China）

AIM To make the comparison between raw， vinegar-steaming and wine-steaming Schisandrae chinensis Fructus to study the effects on tonifying kidney yin.METHODS Kidney-yin deficiency ratmodels induced by hydrocortisone were used and receiving three Schisandrae chinensis Fructus extracts compared to Liuwei Dihuang Pills as the positive control drug.The contentsofserum cyclic adenosinemonophosphate， cyclic guanosine monophosphate， acetylcholine， creatinine and the viscera index of kidney， liver， and spleen were adopted as the evaluation.RESULTS Three preparations of Schisandrae chinensis Fructus had certain therapeutic effects on kidney-yin deficiency rats， such asmeliorating the hormonal condition and raising the viscera index of kidney-yin deficiencymouse， ofwhich the wine-steaming preparation was the bestwithout dosage-effect.CONCLUSION The wine-steaming Schisandrae chinensis Fructus should be recommended as the clinic application in kidney-yin deficiency of choice.

Schisandra chinensis Fructus;processing;kidney-yin deficiency;hydrocortisone

R285.5

:A

1001-1528（2014）12-2471-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.006

2013-12-11

國家發改委 2011 年中醫藥行業科研專項項目 （20110700704）

高 慧 （1974—）， 女， 博士， 副 教 授， 碩 士 生 導 師， 研 究 方 向: 中 藥 炮 制 原 理。 Tel: （ 0411 ） 85890146， E-mail:gaohuitcm@163.com