HPLC法測定維藥神香草及混淆品大苞荊芥中齊墩果酸與熊果酸

帕麗達·阿不力孜, 阿提坎木·瓦合甫, 叢媛媛, 米仁沙·牙庫甫, 李新霞, 熱娜·卡斯木

（新疆醫科大學藥學院, 新疆 烏魯木齊 830011）

HPLC法測定維藥神香草及混淆品大苞荊芥中齊墩果酸與熊果酸

帕麗達·阿不力孜, 阿提坎木·瓦合甫, 叢媛媛, 米仁沙·牙庫甫, 李新霞, 熱娜·卡斯木*

（新疆醫科大學藥學院, 新疆 烏魯木齊 830011）

目的 建立維藥神香草及習用品大苞荊芥中主要活性成分齊墩果酸和熊果酸定量測定方法。 方法 采用 HPLC法， 色譜柱為 YMC-ODS-A C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）; 流動相為甲醇 -0.05 mol/L乙酸銨 （85 ∶15）， 體積流量1.0 mL/min; 檢測波長 210 nm; 柱溫 45 ℃。 結果 神香草中熊果酸與齊墩果酸在 80 ～480 μg（r=0.999 7）、 3.5 ～51.8 μg（r=0.999 5） 范圍內， 大苞荊芥中在 5 ～100 μg（r=0.999 7）、 2 ～64 μg（r=0.999 8） 范圍內兩者均有良好的線性關系， 平均回收率與 RSD均符合要求。 結論 該方法簡單、 快捷、 準確可靠， 可為神香草及混淆品藥材的質量控制提供依據。

神香草;大苞荊芥;齊墩果酸;熊果酸;高效液相色譜法

維藥神香草為唇形科植物硬尖神香草 Hyssopus cuspidatus Boriss.的干燥地上部分， 分布于我國新疆北部、 前蘇聯、 蒙古［1-2］。 在我國新疆地區神香草作為維吾爾族民間習用草藥，維吾爾語名為“祖發”， 被維醫廣泛用于治療咳嗽、 氣喘、 支氣管炎、 外傷和風濕等癥［3］。 具有清除異常黏液質、溫肺平喘、祛寒止咳、燥濕祛痰、發汗解毒、消炎退腫的功能［4］，主治濕寒性和黏液質性呼吸器官疾病，如寒性哮喘、咳嗽感冒、濕性痰多、胸膜炎、 氣管炎、 肺 炎及水腫等病［5-9］。 全草 含有黃酮類、三萜類、烷烴類、甾體類和揮發油等成分［10-13］。 維藥 市 場 上 有 時 由 于 神 香 草 貨 源 短 缺，于是出現了其混淆品，主要為大苞荊芥。大苞荊芥為唇形科植物大苞荊芥 Nepeta bracteata Benth.的干燥全草， 維吾爾語名也稱 “祖發”， 為新疆維吾爾醫院的一種進口藥材，具有鎮咳平喘、清熱利濕的作用，用于治療氣管炎癥見咳嗽氣喘、感冒發燒、 小便不利［14］。 由 于 2 種 藥材維 語名稱 相同，極易引起混用。但兩者是同科不同屬植物，而且化學成分和藥性各不相同。為確保臨床用藥安全、有效，本實驗建立了同時測定神香草及混淆品大苞荊芥中齊墩果酸與熊果酸的 HPLC方法。 研究結果將為神香草及混淆品大苞荊芥藥材的鑒定質量評價提供科學依據。

1 儀器與試藥

日本島津 LC-20AB高效液相色譜儀， SPD-20A紫外雙波長檢測器;KQ-700DE型數控超聲波清洗器 （昆明市超聲儀器有限公司）; 梅特勒AL104 電子分析天平。

神香草藥材采自新疆阿勒泰地區，大苞荊芥購自新疆維吾爾醫醫院，由新疆農業大學林學院王兵教授鑒定， 均為唇形科 植 物硬尖神香 草 Hyssopuscuspidatus Boriss. 和 大 苞 荊 芥 Nepeta bracteata Benth.。 齊墩果酸 （批號 110709-201206），熊果酸（批號 110742-201220）購自中國藥品生物制品檢定所。 甲醇、 乙腈均為色譜純 （SIGMA-ALDRICH） 。

2 方法與結果

2.1 色 譜 條 件 YMC-ODS-A C18色 譜 柱 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， 柱溫 45 ℃; 流動相為甲醇-0.05 mol/L乙酸 銨 （ 85 ∶15）， 體積流量 1.0 mL/min; 檢測波長 210 nm; 進樣體積 20 μL。

2.2 對照品混合溶液的制備 分別精密稱取齊墩果酸對照品13.31mg與熊果酸對照品15.1mg， 置同一10 mL量瓶中， 用甲醇定容至刻度， 搖勻， 即得齊墩果酸與熊果酸對照品混合貯備液。

2.3 供試品溶液的制備 分別精密稱取神香草藥材粉末0.3 g（過 30 目篩）（編號 HcB1）， 大苞荊芥 0.5 g（過30 目篩） （編號 NbB1）， 分別置于具塞錐形瓶中， 各自加入15 m L甲醇， 稱定質量， 超聲 （700 W， 40 kHz） 提取 20 min， 放冷， 再稱定質量， 用甲醇補足減失的質量， 搖勻， 0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關系試驗 神香草: 精密量取 “2.2”項下 對 照 品 混 合 貯 備 液 0.8、1.2、 1.8、 2.3、2.9、3.6 mL，分別置于 10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，即得到不同質量濃度的對照品混合溶液。 大苞荊芥: 精密量取 “2.2” 項下對照品貯備 液 0.04、0.08、 0.2、0.3、 0.8mL分 別 置 于10 mL量瓶中， 甲醇定容至刻度， 搖勻，即得不同質量濃度的對照品混合溶液。分別精密吸取上述兩種藥材不同質量濃度的對照品混合溶液各 20 μL，按照上述色譜條件，分別進樣，測定峰面積，以對照品齊墩果酸與熊果酸的質量濃度X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，進行線性回歸分析，得神香草藥材齊墩果酸與熊果酸回歸方程分別為 Y= 13 500 874.491 7X+647 559.091 4 （r=0.999 5），Y=8 856 200X+658 719.33 （r=0.999 7）， 線性范圍為 3.5 ～51.8 μg， 80 ～480 μg。 大苞荊芥藥材齊墩果酸與熊果酸回歸方程分別為 Y= 28 667 780.890 8X+174 775.020 4 （r=0.999 8），Y=16 514 436.458 3X+472 226.432 3 （ r= 0.999 7）， 線性范圍為 2 ～64 μg， 5 ～100 μg。

2.5 精密度試驗 分別精密取 “2.2” 項下制備的對照品混合溶液 20 μL， 連續進樣 6 次， 分別測得峰面積值，計算出神香草齊墩果酸與熊果酸RSD分別為 2.2%和 2.7%; 大苞荊芥 RSD分別為2.6%和 2.4%， 表明儀器性能良好。

2.6 重復性試驗 分別精密稱取神香草 （HcB1）與大苞荊芥 （NbB5） 同一樣品 6 份， 按 “2.3”項下方法制備供試品溶液， 按 “2.1” 項色譜條件進行測定，結果神香草樣品中齊墩果酸與熊果酸含有量均值為0.001 6%（ RSD為2.6%） 和0.018 1%（RSD為 1.3%）; 大苞荊芥中齊墩果酸與熊果酸含有量均值為 0.000 4% （RSD為 3.5%） 和0.000 2%（RSD為 3.3%）。

2.7 穩定性試驗 分別取同一神香草與大苞荊芥供試品溶液，分別于 0、 2、 6、8、 12、 24、 48 h進樣測定， 神香草 RSD分別為 1.6%和 2.4%; 大苞荊芥 RSD為 3.6%和 4.3%， 結果表明該供試品溶液穩定性良好。

2.8 系統適用性試驗 精密量取神香草與大苞荊芥供試品溶液與對照品混合溶液各 20 μL， 按上述色譜條件， 分別進樣， 記錄色譜圖， 結果見圖1。齊墩果酸與熊果酸達到基線分離，分離度均大于1.5， 兩者理論塔板數都大于 8 000， 拖尾因子小于 1.5。

2.9 加樣回收試驗 分別精密稱取已測知齊墩果酸與熊果酸劑量的樣品神香草 （HcB1） 約 0.3 g，大苞荊芥 （NbB5） 0.5 g共 3 份， 按低、 中、 高質量濃度分別加入齊墩果酸與熊果酸對照品貯備液，按供試品溶液的制備方法及色譜條件項下操作，計算回收率， 結果見表1和2。

表1 神香草加樣回收試驗結果Tab.1 Results of recovery tests for Hyssopus cuspidatus

圖 1 溶劑空白 （a）， 對照品 （b）， 神香草供試品 （c）， 大苞荊芥供試品 （d） 色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of blank solvet（ a） ， reference substances（b） ， Hyssopus cuspidatus（ c） ， and Nepeta bracteata （ d）

表2 大苞荊芥加樣回收率試驗結果Tab.2 Results of recovery tests for Nepeta bracteata

2.10 樣品測定 取不同產地的神香草藥材 0.3 g和大苞荊芥藥材 0.5 g， 按 “2.3” 項下的供試品溶液制備方法進行樣品前處理， 按 “2.1” 項色譜條件進樣測定，按標準曲線法分別計算樣品中齊墩果酸與熊果酸的量。 結果見表3。

3 討論

本實驗建立了測定神香草與習用品大苞荊芥藥材中齊墩果酸和熊果酸 HPLC方法， 該方法操作簡單，具有較好的重復性和穩定性。神香草藥材中齊墩果酸平均總質量分數 0.103 3%， 熊果酸的平均總質量分數 0.934 9%， 習用品大苞荊芥中齊墩果酸平均總質量分數 0.015 6%和熊果酸的總質量分數 0.037 6%， 結果顯示神香草中齊墩果酸、 熊果酸量高于大苞荊芥中齊墩果酸、熊果酸量。因此，可用于神香草及其習用品大苞荊芥藥材的鑒定以及質量控制。

表3 樣品測定結果Tab.3 Determ ination resu lts

本實驗參考 《中國藥典》 2010 年版， 考察了乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨 （67 ∶12 ∶21）、 甲醇-水-冰醋酸-三乙胺 （265 ∶35 ∶0.1 ∶0.05）、 甲醇-0.1mol/L乙酸銨 （85 ∶15 ） 以及甲醇-0.05 mol/L乙酸銨 （85 ∶15 ） 的 流 動 相， 結 果 以 甲 醇-0.05 mol/L乙酸銨 （85 ∶15） 時，神香草與大苞荊芥樣品分離度和峰形都達到實驗要求，出峰時間也比較適宜，為最佳色譜條件。

在提取溶劑中考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯對神香草和大苞荊芥中齊墩果酸和熊果酸的提取率，結果發現乙酸乙酯提取物中熊果酸與齊墩果酸量比甲醇、乙醇高，不過峰形差、分離度不好，因此選擇了甲醇為提取溶劑。

［1］ 國家中醫藥管理局 《中華本草》 編委會.中華本草: 維吾爾藥卷［M］.上海: 上海科學技術出版社， 2005.

［ 2 ］ 中國科學院 《中國植物志》 編委會.中國植物志: 第 66卷［M］.北京: 科學出版社， 1977:243.

［3］ 衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準: 維吾爾藥分冊［S］.烏魯木齊: 新疆科技衛生出版社， 1999.

［ 4 ］ 劉勇民， 沙吾提·伊克木.維吾爾藥志: 上冊［M］.烏魯木齊: 新疆人民出版社， 1986.

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Determ ination of oleanolic acid and ursolic acid in Uygur m edicine Hyssopus cuspidatus Boriss.and its adulterant Nepeta bracteata Benth.by HPLC

PALIDA·Abulizi， ATIKANMU·Wahefu， CONG Yuan-yuan， MIRENSHA·Yakufu， LI Xin-xia，RENA·Ksimu*

（ College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China）

Hyssopus cuspidatus Boriss.;Nepeta bracteata Benth.;oleanolic acid;ursolic acid;HPLC

R284.1

:A

1001-1528（2014）12-2570-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.028

2013-12-03

新疆維吾爾自治區 “十二五” 重大科技專項 （201130105）

帕麗達·阿不力孜（1962—）， 女， 博士， 教授， 研究方向: 維藥生藥學及質量控制。 Tel: （0991） 4363345

*通信作者: 熱娜·卡斯木（1962—）， 女， 教授， 博士生導師， 研究方向: 新疆特色藥材資源的開發利用。 Tel: （0991） 4362473