子宮內膜癌中CDK4和ki67的表達及其意義

王雅楠，孔衛平，孫冬霞

子宮內膜癌為女性生殖道常見惡性腫瘤之一，其發病率在女性惡性腫瘤中居第二位。CDK4作為一種細胞周期正向調節因子已被證實是一種癌基因，在許多實驗性腫瘤的發生發展過程中起重要作用［1］。本研究采用免疫組化染色SP法檢測正常子宮內膜、子宮內膜癌組織中CDK4和ki67蛋白的表達情況，并分析CDK4和ki67在子宮內膜癌中的表達情況與生物學行為的關系，以期為臨床診斷、病情監測和預后評估提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2007年2月—2013年5月邯鄲市中醫院和邯鄲市婦幼保健院婦科收治的子宮內膜癌患者60例，年齡45～67歲，平均53.1歲。癌組織的病理分期:Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例;組織學分級:G1級36例，G2級13例，G3級11例。侵犯及浸潤深度:局限于黏膜層及浸潤≤1/2肌層44例，浸潤＞1/2肌層16例。所有患者留取標本前未行放、化療及激素治療。另外選取同期子宮肌瘤或子宮脫垂而手術切除子宮的正常子宮內膜標本 (均為分泌期子宮內膜)32例，年齡46～67歲，平均51.6歲。

1.2 儀器與試劑 儀器:切片機 (德國LAIKA)、光學顯微鏡 (日本OLYMPUS)、恒溫烤箱 (中國山東濰坊)、電熱恒溫培養箱 (余姚市遠東數控儀廠)、自動漂片儀 (中國安徽電子科學研究院)等。試劑:SP試劑盒、二硝基聯苯胺 (DAB)顯色液及CDK4多克隆抗體 (購自博士德公司)，ki67檢測試劑盒 (購自北京中杉金橋生物技術有限公司)。

1.3 方法 采用免疫組化染色SP法檢測CDK4和ki67的表達情況，陽性對照為乳腺癌組織切片，陰性對照以PBS緩沖液代替一抗，操作步驟嚴格按照試劑盒操作說明書進行。

1.4 結果判定 CDK4及ki67陽性染色均定位于腫瘤細胞核，在細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性細胞。陽性標準采用Parenti等［1］的計數標準，具體方法:每張切片隨機選5個高倍視野(×400)進行計數，陽性細胞數＜5%為 (－)，5% ～25%為(+)，26% ～50%為 (++)，＞50%為 (+++)。－為陰性表達，+～+++為陽性表達。

1.5 統計學方法 應用SPSS 13.0統計學軟件進行數據處理，計數資料采用χ2檢驗;CDK4與 ki67陽性表達的關系采用Spearman相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CDK4和ki67在正常子宮內膜、子宮內膜癌組織中的表達情況 子宮內膜癌組織中CDK4和ki67表達定位于細胞核，其在子宮內膜癌組織中陽性表達率分別為78.3%(47/60)、85.0%(51/60);CDK4和ki67在正常子宮內膜組織中的陽性表達率分別為25.0%(8/32)和12.5%(4/32)。CDK4和ki67在子宮內膜癌組織中的陽性表達率高于正常子宮內膜組織(P ＜0.05)。

2.2 CDK4和ki67在子宮內膜癌中的表達與臨床病理特征的關系 在組織學分級G2～G3級、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的患者中CDK4和ki67的陽性表達率分別高于組織學分級G1級、臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移患者 (P＜0.05);子宮內膜癌患者不同浸潤深度及病理類型間CDK4和ki67的陽性表達率比較，差異均無統計學意義 (P＞0.05，見表1)。

表1 子宮內膜癌患者CDK4和ki67的表達與臨床病理特征的關系Table1 Relationship of the expression of CDK4 and ki67 in endometrial carcinoma with clinicopathologic factor

2.3 CDK4和ki67在子宮內膜癌組織中的相關性 在子宮內膜癌組織中CDK4與ki67的表達呈正相關 (r=0.459，P＜0.05)。

3 討論

腫瘤可以認為是一類細胞周期病。細胞周期是一高度有序的分子事件，各時相嚴格按照G1－S－G2－M的順序進行。CDK是細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶 (cyclin－depend－entkinases，CDKs)家族的成員之一，CDK4基因定位于12q13染色體，含有3個外顯子及2個內含子，人類CDK4是由34個氨基酸組成的蛋白質，是細胞周期G1期的正調控因子［2］。作用機制為CDK4通過Cyclin D激活與之形成復合物，Rb蛋白發生磷酸化，釋放轉錄因子E2F，E2F使得幾個重要的DNA合成基因發生轉錄，使DNA合成得以進行，細胞由G1期進入S期，從而使細胞分裂、增殖，在細胞周期起到了正調節作用，CDK4是一種癌基因，相關報道證實在黑色素瘤［3］、大腸癌［4］、宮頸癌［5］、胃癌［6］等中 CDK4 的基因擴增和蛋白表達失調。本研究結果顯示，CDK4蛋白結果顯示其陽性表達主要位于細胞核內，CDK4的核表達可能有助于細胞的增殖過程，在子宮內膜癌組織中呈過度表達，在正常子宮內膜組織中低表達，表明在子宮內膜癌中CDK4的過度表達對腫瘤的發生起到了促進作用;CDK4的過度表達與子宮內膜癌的病理分期、組織學分級、淋巴結轉移有關，表明CDK4的過度表達在一定程度上可以反映子宮內膜癌的生物學特性，對子宮內膜癌的病程進展、腫瘤分化、發展起到促進作用，說明其表達水平越高、腫瘤的侵襲力越強、惡性度就越高。總之可以認為CDK4過度表達可加速細胞增殖，促進腫瘤細胞異常增生、浸潤和腫瘤復發而導致預后不良。

ki67是一種與細胞增殖密切相關的大分子蛋白，分布于細胞核內，屬于IgG家族，是目前臨床上廣泛應用的檢測細胞增殖的標志，是可靠而迅速地反映惡性腫瘤增殖率的指標，其高表達是細胞增殖活躍的重要標志。ki67在除了G0期之外的所有細胞周期中均有表達，在G1后期開始出現，S期、G2期升高，M期達高峰，其后迅速降解，ki67主要分布于增生性的或高轉化性的組織中，而在一些被認為是非增生性的或低轉化性的組織中，ki67幾乎不表達，說明ki67與細胞的合成代謝有關，其表達的高低反映了細胞增殖的程度。近年來ki67單克隆抗體已廣泛應用于研究腫瘤和非腫瘤組織細胞增生活性，有研究表明，其與惡性腫瘤的發展、轉移和預后高度相關，ki67與腫瘤惡性程度關系基本一致，隨著惡性程度的發展而增高。ki67抗原表達情況主要反映惡性腫瘤細胞的增殖活性，有關資料證實其與惡性腫瘤的發展、轉移和預后高度相關［7］。另外相關學者研究發現ki67的表達情況能夠體現出惡性腫瘤細胞分化低、增殖快的特點，可以認為ki67高表達是腫瘤發生發展的早期事件［8－9］。本研究結果顯示，在子宮內膜癌組織中ki67陽性表達主要定位于細胞核，呈過度表達，明顯高于正常內膜組織，ki67與子宮內膜癌的病理分期、組織學分級、淋巴結轉移有關。因此，子宮內膜癌中ki67的高表達可提示腫瘤細胞增殖活躍、侵襲性強、易發生轉移、預后不良。綜上所述，ki67能客觀反映子宮內膜癌的增殖活性，可以作為評價子宮內膜癌發生、發展和預后的重要指標之一。

同時，筆者對CDK4和ki67在子宮內膜癌組織中的表達進行相關性分析，發現CDK4和ki67的表達在子宮內膜癌中呈正相關，CDK4是細胞周期G1期的正調控因子，ki67在細胞周期G1期開始發揮作用，兩者在細胞增殖方面應該存在聯系，這種聯系會促進子宮內膜癌的發生、進展，兩者的監測工作對子宮內膜癌診斷治療、評價預后有重要參考價值，可以作為評價子宮內膜癌生物學行為的重要指標之一。聯合檢測CDK4和ki67在子宮內膜癌組織中的表達情況有助于指導臨床治療，為子宮內膜癌防治探索新思路。

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