新疆石河子地區豬場呼吸與繁殖障礙綜合征免疫抗體水平檢測與分析

王禮偉 夏小偉 屈勇剛* 王葦 楊亞東 楊一鳴 梁晏 楊蓓

（1石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2新疆生產建設兵團第八師石河子總場北泉鎮獸醫站，新疆石河子 832011；3新疆生產建設兵團第八師石河子疾病預防控制中心，新疆石河子 832000）

新疆石河子地區豬場呼吸與繁殖障礙綜合征免疫抗體水平檢測與分析

王禮偉1夏小偉2屈勇剛1*王葦1楊亞東1楊一鳴1梁晏3楊蓓1

（1石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2新疆生產建設兵團第八師石河子總場北泉鎮獸醫站，新疆石河子 832011；3新疆生產建設兵團第八師石河子疾病預防控制中心，新疆石河子 832000）

為了解新疆石河子地區豬呼吸與繁殖障礙綜合征（PRRS）免疫抗體水平及其消長的規律，采集周邊不同地區13個豬場共726份血清，采用間接ELISA方法檢測PRRS免疫抗體水平并進行分析。結果顯示，該地區PRRS免疫抗體陽性率平均為87.33%，免疫抗體陽性率超過80%的豬場占全部豬場的76.92%，同時，母豬、種公豬、育肥豬免疫抗體的整體水平均超過85%，而仔豬的免疫抗體水平較低，僅為71.11%。結果表明當地應用的PRRS疫苗的免疫原性較好，免疫效果確實；仔豬免疫抗體水平較低的具體原因尚不清楚。該結果可為進一步了解石河子周邊地區豬場PRRS免疫抗體的現狀，制定合理的治療措施和免疫程序提供參考。

豬呼吸與繁殖障礙綜合征；抗體水平；ELISA；陽性率

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS），又稱豬藍耳病，是由PRRS病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）所引起的一種高度接觸性傳染病，主要以母豬的繁殖障礙和各年齡段仔豬的呼吸道疾病為主要特征。1990年，該病相繼在德國、荷蘭、西班牙等地暴發流行。1992年國際獸醫局（OIE）將其列為B類疫病，也是我國規定的二類動物疫病。1993年在我國部分地區暴發流行，隨后中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所從病豬體內分離到該病毒，確定了豬繁殖與呼吸障礙綜合征在我國的存在[1]。由于該病的傳染性強、傳播迅速、危害廣泛，給我國的畜牧業造成了巨大的經濟損失[2]。

宋剛華等[3]對新疆庫車縣部分豬場藍耳病的血清抗體調查研究表明，庫車縣全縣的藍耳病血清抗體陽性合格率僅為74.4%，存在一定的隱患。為進一步了解石河子地區藍耳病免疫抗體水平的現狀，采集石河子周邊不同地區豬場、不同類別豬群的血樣，通過間接ELISA檢測方法檢測PRRS免疫抗體水平并進行分析，可為豬場制定合理有效的治療措施及免疫程序提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源

2013年10月至2014年1月期間，采集石河子周邊13個豬場（母豬存欄量在400頭及以上的2個、100～400頭的豬場7個、100頭以下的4個）不同類別的豬血清共726份。其中，母豬血清254份、種公豬血清110份、仔豬血清135份、保育豬血清227份（根據豬場豬群的實際數量，按照接近10%的比例進行采集）。根據豬群的日齡不同，進行前腔或耳緣靜脈采血，每頭豬采集血液2～5 mL，室溫靜置30～60分鐘。待血清析出以后，吸取1 mL血清于1.5 mL EP管中，如果血液凝固不良，可以4000轉/分鐘離心10分鐘，收集上清液。收集的血清應清亮、無溶血現象。將盛有血清的EP管放置于-20℃冰箱保存備用。采集的樣品編號要與豬的耳號對應，以便于后期有針對性地提供合理有效的治療措施。

1.1.2 材料和儀器

豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物制品有限責任公司，批號：130911）、獸用一次性采血盛血器5 mL(浙江民生醫藥器材有限公司)、8道微量移液槍（美國GILSON公司）、自動酶標儀（美國BioTek公司）、恒溫培養箱（天津東泥沽設備儀器廠）、平板震蕩儀、1.5 mL EP管及一次性槍頭若干。

1.2 試驗方法

1.2.1 間接ELISA方法

根據試劑盒的操作步驟，對待檢血清進行一定倍比稀釋，同時洗滌抗原包被板。將稀釋好的血清按照對應的量加入到洗滌好的抗原包被板中，同時設定陰陽對照組，均勻震蕩后，置于37℃溫浴30分鐘。然后棄去抗原包被板中的液體，對抗原包被板進行洗滌。再在每孔中加入羊抗豬酶標二抗，置于37℃溫浴30分鐘，隨后棄掉廢液，再次洗滌。將洗滌好的抗原包被板每孔加入底物A、底物B，混勻，室溫避光顯色10分鐘。最后，每孔加入終止液。在10分鐘內，用酶標儀在630 nm波長下對樣品的OD值進行測定，根據OD值的大小，判定樣品血清抗體的水平。

1.2.2 結果判定

試驗成立的條件是陽性對照孔OD值的均值≥0.7，陰性對照孔OD值的均值＜0.3。

根據酶標儀測定OD值的大小，利用office軟件進行KQ值的計算。KQ值=樣品OD值×100/陽性對照平均值。若KQ值≥20，判定為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性；若KQ值＜20，判定為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陰性。

1.2.3 統計分析

利用office軟件對試驗數據進行統計并分析。

2 試驗結果

2.1 各個豬場PRRS免疫抗體水平ELISA檢測結果

2.3 兩組不良反應發生率比較 A組患兒中出現了腹瀉8例，皮疹7例，不良反應發生率為30.00%，B組患兒中出現了皮疹、腹瀉各1例，不良反應發生率為4.00%。B組患兒的不良反應發生率顯著低于A組，差異有統計學意義(χ2=11.970，P<0.05)。

由表1可知，A～M這13個豬場之間的免疫抗體水平存在較大的差異，豬場免疫抗體陽性率最高的可達到100%，最低的為55.00%，免疫抗體陽性率達到80%以上的有10個豬場，占全部豬場的76.92%。初步統計，石河子周邊地區豬場PRRS免疫抗體陽性率平均為87.33%，樣品KQ值均值為56.64。由抗體水平的變異系數可知各個豬場PRRS免疫抗體水平的離散程度，13個豬場PRRS抗體水平的變異系數范圍在0.15～0.84，數據整體比較平穩。

表1 13個豬場PRRS免疫抗體水平ELISA檢測結果

2.2 各個類別豬群PRRS免疫抗體水平ELISA檢測結果

由表2可知，不同豬群之間的免疫抗體水平也存在較大的差異，母豬的免疫抗體水平最高，達到94.88%，其次為種公豬的88.18%，育肥豬的88.11%，三者免疫抗體的整體水平均超過85%，而仔豬的免疫抗體水平最低，僅為71.11%。

3 分析與討論

3.1 豬群免疫抗體陽性率整體較高

對石河子周邊地區13個豬場血清中PRRS抗體水平的檢測結果表明，PRRS免疫抗體陽性率整體較高，最高的豬場陽性率已達到100%，最低的豬場陽性率也達到了72.09%，說明目前應用的PRRS疫苗的免疫原性較好，免疫抗體產生迅速、高效，達到了豬場免疫預防的目的，抗體的平均水平均達到了農業部《2012年國家動物疫病強制免疫計劃》規定的抗體合格率在70%以上的要求[4]。同時，與王偉丞等[5]對貴州部分豬場免疫豬群中PRRS血清抗體水平的檢測結果相比，本研究結果中石河子地區PRRS血清抗體水平整體偏高，表明該地區PRRS的免疫程序整體良好。但是，也有部分豬場的抗體水平低于80%，應當引起高度重視。鑒于該病的高度傳染性，從業人員應加強控制力度，制定治療措施及調整免疫程序。

3.2 不同類別豬群抗體陽性率存在較大差異

表2 3類豬群PRRS免疫抗體水平ELISA檢測結果

3.3 科學合理使用疫苗

疫苗免疫是豬場疾病防治的重要途徑之一，目前，國內外已經研制出弱毒苗和滅活苗。弱毒苗的臨床應用效果更佳，但是弱毒苗存在著一定的散毒和返祖現象，因此，從業人員應當根據自己豬場的實際情況選擇疫苗，切忌盲目跟風[6]。通過對石河子周邊地區豬場免疫抗體水平的分析，一些抗體水平較低的豬場，我們應當加強疫苗免疫；針對仔豬抗體水平低下的情況，我們可以通過提高母源抗體水平來保護剛出生的仔豬，在仔豬母源抗體消失前進行首免，母源抗體消失后進行二免；對種公豬和妊娠母豬，應慎重使用弱毒苗。

盡管該地區PRRS免疫抗體水平整體較好，但仍有一些規模豬場的抗體水平并不理想。因此需要提高豬場的管理水平和疾病的防范意識，做到防微杜漸，從源頭上杜絕疫病的入侵。

[1] 謝英,單天錫.豬繁殖與呼吸綜合征研究進展[J].中國獸醫雜志,2001,37(1):29-32．

[2] 權中會,陰明亮,權鳳英,等.我國豬繁殖障礙性疾病的流行狀況和綜合防制[J].畜禽業,2003(4):7-9．

[3] 宋剛華,陳創夫.新疆庫車縣豬繁殖障礙性疾病血清學調查與分析[J].當代畜牧,2013(8):83-86．

[4] 劉志勇,韓慶安,劉乃強,等.規模養豬場主要疫病免疫效果評估模型建立[J].中國獸醫雜志,2011(7):88-90．

[5] 王偉丞,曾智勇,劉志杰.貴州省幾種豬繁殖障礙性疫病抗體水平檢測[J].貴州農業學報,2013,41(5):118-120．

[6] 馬興樹,朱美霞,韓改英,等.冀南地區3種豬病毒血清抗體的檢測與分析[J].中國畜牧獸醫,2011,38(1):204-205．

S858.28

A

1673-4645(2014)06-0046-03

2014-04-24

王禮偉（1989-），男，江蘇淮安人，碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作

*通訊作者：屈勇剛（1971-），男，陜西人，副教授，主要從事重要人獸共患病致病機理研究，E-mail:quyonggang@shzu.edu.cn