特征圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量分析中的應(yīng)用

秦紅霖 李永申

·實(shí)驗(yàn)研究·

特征圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量分析中的應(yīng)用

秦紅霖 李永申

綜述特征圖譜技術(shù)在中藥材和中藥制劑質(zhì)量控制方面的應(yīng)用, 目前, 以色譜法建立的特征圖譜是中藥化學(xué)特征圖譜的常用方法, 目的是為進(jìn)一步研制全面、綜合、準(zhǔn)確、有效的質(zhì)量控制方法提供參考。

特征圖譜技術(shù)；中藥；質(zhì)量控制

中藥特征圖譜是一種多指標(biāo)的質(zhì)量控制模式, 它可以比較全面的反映所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量, 從而能夠全面、綜合地反映和控制中藥的質(zhì)量。

目前中藥特征圖譜的測定方法種類較多,主要采用色譜法和光譜法為主,色譜法主要包括薄層色譜法［1］、氣相色譜法［2］、高效液相色譜法［3］、毛細(xì)管電泳法［4］、蛋白質(zhì)電泳法［5］等。光譜法主要包括紫外光譜法［6］、紅外光譜法［7］、熒光光譜法［8］等。其他還有核磁共振法［9］、X射線衍射法［10］等。其中, 高效液相色譜法以強(qiáng)大的分離功能、快捷的分析速度、廣泛的樣品適用性和多種類的檢測器配置多而成為目前研究中藥化學(xué)特征圖譜常用的方法。

1 薄層色譜法

薄層色譜(TLC)法是一種經(jīng)典的平面色譜法。由于該方法在中藥材及中藥制劑的品種鑒定、含量測定等方面能提供直觀形象的可見光或熒光圖譜, 并能進(jìn)一步配合色譜掃描或數(shù)碼處理得到不同層次輪廓圖譜和相應(yīng)的積分?jǐn)?shù)據(jù)等特點(diǎn),成為了中藥成分分析的一個(gè)主要方法。蔣軼倫等［11］利用薄層色譜技術(shù)對中藥材丹參的有效成分進(jìn)行了特征圖譜分析,以不同等級的中江丹參和不同采收期的丹參、南丹參為分析對象, 在254 nm波長下獲取脂溶性和水溶性成分共7個(gè)共有特征峰, 并進(jìn)行了主成分分析和聚類分析, 表明丹參藥材主要指標(biāo)成分含量分布情況十分相似, 可用于考察不同等級丹參的歸屬。楊先國等［12］對玉竹的黃酮類成分進(jìn)行薄層色譜特征圖譜研究, 建立了由10個(gè)特征熒光斑點(diǎn)構(gòu)成的玉竹黃酮類成分的薄層特征圖譜, 該特征圖譜不僅能反映玉竹的特征性成分, 同時(shí)還能反映不同來源藥材之間的差異, 可以用于玉竹藥材的質(zhì)量控制。

2 氣相色譜法

氣相色譜法是一種以氣體為流動(dòng)相的分離技術(shù)。主要用于中藥中揮發(fā)油成分、極性較小的成分的特征圖譜研究,具有樣品用量少、分析速度快、靈敏度高等特點(diǎn)。劉東輝等［13］采用氣相色譜法測定10批薄荷飲片揮發(fā)油成分, 標(biāo)示出13個(gè)共有峰, 相似度分析表明, 不同批次樣品的相似度較高, 對于薄荷飲片的質(zhì)量控制、臨床應(yīng)用均有較大的指導(dǎo)意義。閻正等［14］建立了東樂膏GC特征圖譜, 東樂膏是由大黃、乳香、沒藥、冰片等中藥材加工提取制成的橡膠膏劑, 作者測定了11批樣品, 共標(biāo)示出8個(gè)共有峰, 可作為東樂膏生產(chǎn)的輔助質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。劉紅等［15］采用氣相色譜法測定來自10個(gè)不同產(chǎn)地的益智揮發(fā)油成分, 并進(jìn)行聚類分析和相似度分析, 結(jié)果表明該方法可用于益智藥材的質(zhì)量評價(jià)。黃天來等［16］研究了生姜所含揮發(fā)油成分的氣相特征圖譜,結(jié)果顯示生姜揮發(fā)油GC特征圖譜由五組峰組成,分離度較好,為生姜的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。馬麗端等［17］建立了感冒清熱顆粒揮發(fā)油成分的氣相特征圖譜, 作者共標(biāo)定了6個(gè)特征峰, 并對復(fù)方制劑中的薄荷酮和胡薄荷酮進(jìn)行了含量測定,作者建立的氣相色譜特征圖譜及含量測定方法可從定性和定量兩方面控制感冒清熱顆粒中的揮發(fā)性成分, 方法準(zhǔn)確、可行、可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。聶小妮等［2］建立了不同產(chǎn)地土荊芥揮發(fā)油氣相色譜特征圖譜, 分別按相關(guān)系數(shù)和夾角余弦法對12個(gè)產(chǎn)地土荊芥揮發(fā)油的特征圖譜進(jìn)行了相似度計(jì)算, 結(jié)果表明12個(gè)產(chǎn)地的土荊芥揮發(fā)油特征圖譜與共有模式特征圖譜具有非常好的相似度。

3 高效液相色譜法

高效液相色譜法是依據(jù)樣品各成分在流動(dòng)相和固定相之間分配系數(shù)的不同而進(jìn)行分離的。HPLC法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制, 整個(gè)分離過程在相對封閉的環(huán)境中, 受外界影響較小, 系統(tǒng)穩(wěn)定性好, 是目前研究中藥化學(xué)特征圖譜常用的方法。朱砂等［18］采用HPLC法建立了巫山淫羊藿飲片的特征圖譜, 確定了5個(gè)共有峰, 采用國家藥典委員會開發(fā)的《中藥色譜特征圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)研究版(2004A)》進(jìn)行相似度評價(jià), 結(jié)果顯示巫山淫羊藿飲片生品和羊油炙品的平均相似度為0.91；巫山淫羊藿飲片與淫羊藿飲片的平均相似度為0.84, 二者特征圖譜差異明顯, 可作為飲片識別和鑒別的參考方法。黃月純等［19］采用HPLC法對澤蘭及其精制提取物的特征圖譜進(jìn)行了相關(guān)性研究, 標(biāo)出了20個(gè)共有峰, 相似度分析表明10批澤蘭飲片的相似度為0.961~0.998；10批澤蘭提取物的相似度為0.963~0.998；同批次飲片與提取物之間的相似度為0.9883~0.998。徐曉衛(wèi)等［20］采用HPLC法建立了艾迪注射液高效液相色譜特征圖譜, 確定了6個(gè)共有峰, 各共有峰的相對保留時(shí)間和峰面積均穩(wěn)定, 10批樣品的相似度均在0.90~1.00之間, 表明不同批號樣品間具有很高的相似度, 為艾迪注射液的質(zhì)量控制提供了有效依據(jù)。

隨著HPLC設(shè)備的普及以及儀器操作的可控性, HPLC與MS、NMR等技術(shù)聯(lián)用, 成為中藥特征圖譜的重要選擇。劉云飛等［21］采用HPLC-ESI-MS技術(shù)歸屬續(xù)斷特征圖譜中的化學(xué)成分, 通過正離子模式和負(fù)離子模式獲得精確分子量,推測出15個(gè)成分, 用對照品確認(rèn)了8個(gè)成分, 該研究比較全面的闡明了續(xù)斷的化學(xué)組成, 使特征圖譜的特征性更強(qiáng), 為續(xù)斷的鑒別與質(zhì)量評定奠定了基礎(chǔ)。羅丹等［22］采用HPLCESI-MS法建立當(dāng)歸的特征圖譜并對其中的8種成分進(jìn)行了定性研究, 為當(dāng)歸化學(xué)成分的進(jìn)一步研究及質(zhì)量控制提供參考。HPLC- MS聯(lián)用技術(shù)可以將液相色譜強(qiáng)大的分離功能和質(zhì)譜的定性優(yōu)勢相結(jié)合, 獲取更多的化合物結(jié)構(gòu)信息。

4 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法適合水溶性或醇溶性成分的分離分析,其具有柱效高、耗能低、對環(huán)境污染小、樣品前處理簡單等優(yōu)點(diǎn), 是進(jìn)行中藥質(zhì)量控制的綠色分析方法。鄧光輝［23］等建立了葉下珠藥材中黃酮的毛細(xì)管電泳特征圖譜, 確定了10個(gè)不同產(chǎn)地葉下珠藥材中黃酮的毛細(xì)管電泳特征圖譜為8個(gè), 實(shí)驗(yàn)證明, 各產(chǎn)地葉下珠的毛細(xì)管電泳特征圖譜與標(biāo)準(zhǔn)毛細(xì)管電泳特征圖譜的相似度較好。孫國祥等［24］建立了連翹藥材的毛細(xì)管電泳的特征圖譜, 將不同產(chǎn)地10批連翹藥材進(jìn)行比較, 按各電泳峰共有率fi≥70%作為選擇電泳指紋峰的依據(jù), 確定了29個(gè)特征峰, 可作為連翹內(nèi)在質(zhì)量評價(jià)的依據(jù)。

5 蛋白質(zhì)電泳法

高德民等［5］利用蛋白質(zhì)電泳技術(shù)對藥食兩用植物的5個(gè)生姜品種進(jìn)行了特征圖譜分析, 特征圖譜顯示, 5個(gè)樣品的蛋白質(zhì)PAGE特征圖譜具有一定差異, PAGE特征圖譜可用于生姜品種鑒定與質(zhì)量評價(jià)。

6 小結(jié)

中藥為多成分的復(fù)雜體系, 測定一種或幾種指標(biāo)成分,不足以保證其質(zhì)量。中藥特征圖譜具有整體性、特征性及可量化等特點(diǎn), 可用于鑒別中藥真?zhèn)巍⒃u價(jià)藥材的道地性以及制劑的一致性與穩(wěn)定性, 是一種有效的質(zhì)量控制模式［25］。其中GC和HPLC是目前中藥特征圖譜研究時(shí)的重要選擇。今后中藥特征圖譜的研究應(yīng)與藥效相關(guān)性研究相結(jié)合, 進(jìn)一步闡明指標(biāo)成分的作用機(jī)理, 達(dá)到中藥質(zhì)量控制保證和臨床藥學(xué)的有效對接, 從而真正達(dá)到應(yīng)用特征圖譜技術(shù)全面控制中藥材及其制劑的質(zhì)量。

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100071 北京軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所