金蓮花藥渣及發酵物總黃酮含量測定

錢 莊，周 哲，石雪靜，敖 楊，韓淑英，呂志偉

(河北聯合大學，河北 唐山 063000)

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金蓮花藥渣及發酵物總黃酮含量測定

錢 莊，周 哲，石雪靜，敖 楊，韓淑英*，呂志偉

(河北聯合大學，河北 唐山 063000)

目的：測定金蓮花藥渣及發酵物中總黃酮含量，為金蓮花藥渣資源的充分利用提供實驗依據。方法：分別以水和乙醇-水為溶劑提取金蓮花藥渣及其發酵物中總黃酮；采用UV法，以蘆丁為對照品，測定其中總黃酮含量。結果：金蓮花原藥材、金蓮花藥渣和藥渣發酵物的水提物中總黃酮含量依次為8.16%、1.93%和0.93%；乙醇提取物中總黃酮含量依次為13.93%、9.27%和3.51%。結論：金蓮花藥渣中仍具有較高含量的黃酮成分，應充分開發利用其價值。

金蓮花；藥渣；發酵；總黃酮；UV法

中草藥經藥廠提取有效成分后的藥渣仍含有一定量的活性成分，但多數中藥渣被廢棄掉，如何充分利用中藥資源，解決中藥渣環境污染，是亟待解決的問題。金蓮花(TrolliuschinensisBunge)為毛茛科植物金蓮花，富含黃酮類成分，如葒草苷、牡荊苷等[1]，具有抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化等作用[2]。目前，用金蓮花制備的中藥很多，用于治療上呼吸道感、扁桃體炎、咽炎等，因此，每年有大量金蓮花藥渣廢料。本文對金蓮花藥渣中主要成分總黃酮的含量進行了測定，旨在為金蓮花資源的充分利用提供參考依據。

1 材料

1.1 藥品及試劑

金蓮花藥渣(由唐山百善藥業提供)，蘆丁對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號0080-9705)，安琪高活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)，蛋白胨(北京奧博星生物技術有限公司)，葡萄糖(天津市北方天醫化學試劑廠)，無水乙醇為分析純，水為超純水。

1.2 儀器

電子天平(型號:FA2104N,上海菁海儀器有限公司)；恒溫箱(型號:TO-2123，上海尚域環境儀器有限公司)；DHG102型電熱干燥箱(山東濰坊醫療器械廠)；

水浴鍋(型號:H.H.S 21-4B，上海醫療器械五廠)；離心沉淀機(型號LXJ-Ⅱ，上海醫用分析儀器廠)；TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。

2 方法及結果

2.1 金蓮花藥渣發酵及總黃酮提取

2.1.1 金蓮花藥渣發酵[3-4]酵母菌活化增值：稱取7g安琪干酵母置于錐形瓶中，同時加入100mL蒸餾水、4g蛋白胨和4g葡萄糖，置37℃恒溫箱中培養24h。藥渣發酵：稱取30g干燥金蓮花藥渣粉末，置上述活化增值酵母菌液中，再加入30mL蒸餾水、4g蛋白胨和4g葡萄糖，置37℃恒溫箱中繼續培養48h，70℃烤箱干燥即得金蓮花藥渣發酵物。

2.1.2 發酵物中總黃酮提取[5-6]稱取10g干燥的金蓮花藥渣發酵物2份，分別以10倍量的70%乙醇和水為溶劑，70℃水浴提取2次，每次2h，離心除去不溶性雜質，合并提取液，將提取液置蒸發皿中，70℃水浴濃縮至浸膏狀，即得金蓮花藥渣發酵物的乙醇提取物(EELRT)和水提物(AELRT)，未發酵金蓮花藥渣和金蓮花原藥材的提取方法同上，即得金蓮花藥渣乙醇提取物(EERT)和水提物(AERT)以及金蓮花原藥材乙醇提取物(EET)和水提物(AET)。

2.2 UV法測定提取物中總黃酮含量[7-8]

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱定10mg蘆丁對照品于50mL容量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 精密稱定EET、AET、EERT、AERT、EELRT、AELRT各30mg于50mL容量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，搖勻即得。

2.2.3 測定波長選擇 精密量取一定量“2.2.1”項下的對照品溶液和“2.2.2”項下的供試品溶液，以30%乙醇為空白對照，在200～400nm波長范圍內測定總黃酮的紫外吸收光譜，結果顯示對照品和供試品在355nm波長附近均有最大吸收，故確定測定波長為355nm。見圖1。

圖1 對照品(a)和EET(b)吸收光譜

2.2.4 線性關系考察 精密量取“2.2.1”項下對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置25mL量瓶中，加30%乙醇定容至刻度，以30%乙醇為空白對照，用紫外分光光度計在355nm波長處測定吸收度, 以吸光度為縱坐標，質量濃度為橫坐標，計算得回歸方程為Y=21.164 3X+0.020 7(R2=0.999 2)，線性范圍為0.008～0.048mg/mL。

2.2.5 精密度考察 精密量取“2.2.1”項下對照品溶液1mL，置25mL容量瓶中，共5份，用30%乙醇定容，測定其吸光度，其RSD為1.7%，表明該方法精密度較好。

2.2.6 重復性考察 精密量取“2.2.2”項下的同一供試液1mL，置25mL容量瓶中，共5份，用30%乙醇定容，測定其吸光度，其RSD為1.2%，表明該方法重復性較好。

2.2.7 穩定性考察 精密量取“2.2.2”項下的同一供試液1mL，置于25mL容量瓶中，用30%乙醇定容，分別在0.5、1、2、4、8h測定其吸光度，其RSD為0.6%，表明該樣品在8h時內穩定性較好。

2.2.8 加樣回收率試驗 移取已知總黃酮含量的樣品溶液3mL，共9份，分別置25mL容量瓶中，再按低、中、高系列濃度分別加入“2.2.1”項下對照品溶液1mL、1.5mL、2.0mL，每種濃度各3份，用30%乙醇定容，測定其吸光度，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.2.9 提取物中總黃酮含量測定 精密量取“2.2.2”項下的供試液各3mL，置于25mL容量瓶中，用30%乙醇定容，測定其吸光度，依回歸方程計算提取物中總黃酮的含量，結果見表2。

表2 提取物中總黃酮含量測定結果

3 討論

本實驗采用金蓮花藥渣為原材料，首次研究了分別以水和70%乙醇為溶劑提取金蓮花藥渣及其發酵物中總黃酮，并與相同提取工藝下金蓮花原藥材中總黃酮含量進行比較，結果表明，金蓮花藥渣乙醇提取物中總黃酮含量為9.27%，金蓮花原藥材乙醇提取物的總黃酮含量13.93%，雖然藥渣中總黃酮含量低于原藥材，但只減少了1/3，說明藥渣中還有2/3的總黃酮沒有被提取出來；以水為溶劑提取金蓮花藥渣總黃酮含量較低。目前多數藥廠主要以水為溶劑提取金蓮花中藥用成分，故金蓮花藥渣中仍殘存較高含量的黃酮成分，由此說明金蓮花藥渣仍具有較高的利用價值。

本實驗利用中藥發酵技術[9]將金蓮花藥渣進行了發酵，結果表明，發酵后的藥渣中總黃酮含量明顯低于未發酵的藥渣，黃酮成分含量降低的原因可能是藥渣中部分黃酮類成分經過酵母菌代謝產生了新物質[9]，具體是什么物質有待進一步研究。

[1] 葛曉艷.淺析金蓮花的藥用研究概況[J].黑龍江醫藥,2012,25(3):444-445.

[2] 劉婉瑩,傅立新,任立楠.金蓮花的藥理活性研究[J].中國醫藥指南,2013,11(21):454-455.

[3] 桑秀妹,高華君,敖楊,等.金蓮花藥渣發酵物葡萄糖含量測定及影響因素[J].河北聯合大學學報：醫學版,2013,15(6):803-804.

[4] 王珊,桑秀妹,高華君,等.金蓮花藥渣發酵物對小鼠應激能力的影響[J].河北聯合大學學報：醫學版,2013,15(6):800-801.

[5] 孔慶蘭,韓志強,李薇,等.金蓮花提取工藝研究[J].遼寧中醫藥大學學報,2013,15(6):43-44.

[6] 薩楚拉圖,莎木嘎,趙智宏,等.芙蓉花中總黃酮的提取工藝研究[J].內蒙古農業大學學報,2012,33(5-6):306-308.

[7] 蘇連杰,張衛平,趙波,等.不同采收期金蓮花莖葉中總黃酮和葒草苷的動態變化研究[J].中草藥,2012,43(10):2058-2061.

[8] 嚴力群,丁萬隆,朱殿龍.壩上地區金蓮花及其莖葉總黃酮的測定[J].世界科學技術——中醫藥現代化,2009,11(3):407-409.

[9] 盧君蓉,王世宇,盛菲亞,等.中藥發酵研究概況[J].中藥與臨床,2012,3(4):47-49.

(責任編輯：宋勇剛)

2014-04-05

教育部大學生創新創業訓練計劃項目(201210081007)；唐山市“十二五”科技重點項目(10130203-3)；河北聯合大學大學生創新實驗計劃項目(X2013062)

錢莊(1991-)，男，河北聯合大學在讀生，研究方向為中藥藥理學。

韓淑英(1959-)，女，河北聯合大學教授，碩士生導師，研究方向為中藥防治心血管疾病。E-mail:shuyinghan59@126.com。

R284.2

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1673-2197(2014)15-0022-02