HPLC在中藥有效成分分析中的應用

周啟仲

(廣州市婦女兒童醫療中心，廣東 廣州 510120)

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HPLC在中藥有效成分分析中的應用

周啟仲

(廣州市婦女兒童醫療中心，廣東 廣州 510120)

目的：分析HPLC在中藥及其制劑有效成分分析中的應用。方法：應用HPLC分析法，對中藥及其制劑中有效成分的含量進行分析，研究HPLC法的應用效果。結果：白花蛇舌草中齊墩果酸含量測定的平均回收率為97.04%，RSD為2.09%；而熊果酸含量測定的平均回收率為96.79%，RSD為2.66%。采用醇提取法與酸解法分別提取中藥，經HPLC分析，兩種提取法提取的中藥及其制劑的有效成分含量比較差異無統計學意義(P<0.05)。結論：HPLC法具有靈敏度高、選擇性強、分離效果好等特點，是測定中藥有效成分的有效方法。

HPLC；中藥；有效成分分析

HPLC即高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography ，HPLC)，是以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等泵入裝有固定相的色譜柱中，各成分在柱內被分離后，進入檢測器中進行檢測的分析方法。近年來，隨著HPLC的不斷完善，其在工業、農學、化學、醫學等方面的應用也越來越普遍[1]。本文具體分析了HPLC在中藥有效成分分析中的應用，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

儀器：高效液相色譜分析儀LC-3000(艾倫分析儀器有限公司)，色譜數據工作站V4.0+，磁力加熱攪拌器(國華企業，79-1型)。

中藥：中藥材有枇杷葉、毛冬青、澤蘭、女貞子、紫蘇、茵陳、白花蛇舌草等；對照品有齊墩果酸、熊果酸(中國食品藥品檢定研究院)。

實驗用水為二次蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

色譜條件：色譜柱：CLC-ODSC18(150mm×6.0mm，5μm)，流動相：甲醇∶水∶冰乙酸∶三乙胺(87∶13∶0.04∶0.02)，檢測波長：210mm。在上述色譜條件下，齊墩果酸與熊果酸的拖尾因子均小于1.5，理論塔板數大于5 000。

(1)酸解法。精密稱取山楂、枇杷葉、毛冬青、澤蘭、女貞子、紫蘇、茵陳、白花蛇舌草、連翹、三七等藥材粉末各1.0g，并將其分別置于100mL燒瓶內，于燒瓶中加入適量鹽酸及乙醇，回流提取2h。將燒瓶內溶液定量轉移到容量瓶中，滴加飽和NaOH調節pH值至5.0，再采用乙醇定容、過濾，取續濾液1mL離心，取上清液進樣分析。

(2)醇提法。精密稱取山楂、枇杷葉、毛冬青、澤蘭、女貞子、紫蘇、茵陳、白花蛇舌草、連翹、三七等藥材粉末各1.0g，并將其分別置于100mL燒瓶中，加入50mL無水乙醇，采用水浴法加熱回流2h，提取液冷卻后過濾，取續濾液進樣測定分析。

(3)對照品溶液制備。本研究選擇的對照品為齊墩果酸與熊果酸，精密稱取齊墩果酸10mg和熊果酸15mg，分別置于50mL容量瓶中，加無水乙醇溶解稀釋至刻度。

1.3 系統適應性試驗

系統適應性試驗包括精密度試驗、重復性試驗、線性試驗與穩定性試驗。

(1)精密度試驗。精密稱取6等份白花蛇舌草粉末，按醇提法提取后進樣測定，結果：白花蛇舌草樣品中齊墩果酸峰面積RSD為1.46%，熊果酸峰面積RSD為1.89%，表明該法精密度良好。

(2)線性試驗。分別精密吸取齊墩果酸和熊果酸對照溶液各0.3、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0mL，置于50mL容量瓶中，采用無水乙醇稀釋至刻度，分別進樣測定峰面積。以對照品濃度為橫軸對峰面積積分進行線性回歸。線性回歸方程如下所示[2]：

A=1.513 677 7C+3.737 683 4(r=0.999 5)

A=2.353 940 09C-7.404 378 2(r=0.999 2)

(3)重復性試驗。精密稱取白花蛇舌草粉末適量，按照醇提法制備樣品溶液，連續進樣6次測定峰面積積分，結果表明齊墩果酸含量RSD為2.68%，熊果酸含量RSD為2.95%，表明該方法重復性良好。

(4)穩定性試驗。采用醇提法制備白花蛇舌草樣品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、16、18、24h進樣測定，結果表明齊墩果酸峰面積RSD為1.086%，熊果酸峰面積RSD為1.78%，表明樣品溶液在24h內穩定性良好。

2 結果

2.1 加樣回收率測定結果

精密稱取已測得有效成分含量的白花蛇舌草6份，分別加入一定量的齊墩果酸與熊果酸，采用醇提法提取后進樣測定，計算有效成分含量和加樣回收率。結果表明，齊墩果酸的平均回收率為97.04%，RSD為2.09%，而熊果酸的平均回收率為96.79%，RSD為2.66%，均符合要求，如表1所示。

表1 回收率檢測結果分析

2.2 兩種提取法樣品測定結果比較

分別采用醇提法與酸解提取法對本研究所選中藥進行提取，并采用HPLC法測定有效成分含量，結果表明，兩種方法提取所得的齊墩果酸和熊果酸含量無統計學差異(P<0.05)，如表2所示。

表1 兩種提取法對樣品測定結果比較 (mg/mL)

3 討論

“色譜法”和“色譜圖”這一概念首次由俄國植物化學家茨維特于1903年提出，其于研究文章中寫道：“一植物色素的石油醚溶液從一根主要裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管上端加入，沿管濾下，后用純石油醚淋洗，結果按照不同色素的吸附順序在管內觀察到它們相應的色帶，就象光譜一樣，稱之為色譜圖”。之后，隨著時代的不斷演變和科技的快速發展，相繼又出現了薄層色譜、紙色譜、離子交換色譜等技術。直至到1990年以后，生物工程和生命科學在國內外迅速發展，高效液相色譜技術更廣泛地應用于分離、純化、制備課題中，應用前景愈加廣闊[3]。

近年來，隨著分離技術的發展，HPLC在中藥及其制劑有效成分分析中的應用也越來越廣泛。由于中藥及其制劑化學成分非常復雜，為保證臨床應用中藥的合理性與安全性，很有必要對中藥及制劑的有效成分、作用機理、特點、藥物反應等進行全面、綜合、科學的分析。HPLC法具有操作方便、適用范圍廣、分離速度快、重現性好、靈敏度高、柱效高等特點，對衡量中藥及其制劑的質量是否達到要求，產品是否穩定具有十分重要的作用[4-5]。

本研究分別采用酸解提取法與醇提法提取枇杷葉、毛冬青、澤蘭、女貞子、紫蘇、茵陳、白花蛇舌草等中藥材中的有效成分齊墩果酸和熊果酸，結果表明，兩種提取方法所得的有效成分含量差異無統計學意義(P<0.05)。

綜上所述，HPLC法具有高靈敏度、高選擇性、高效性等優點，在測定中藥及其制劑有效成分含量方面優勢明顯，是最常用的含量測定方法。雖然其仍存在色譜柱易污染、柱容量小等缺點，相信隨著分離技術的發展，HPLC技術將會更加完善、高效、靈敏。

[1] 朱桃花,范璐,錢向明,等.HPLC分析植物油脂甘油三酯結構組成的研究現狀[J].中國油脂,2011,36(5):59-63.

[2] 湯君,何彩玉,程杰,等.恩曲他濱對映異構體的合成、表征及HPLC分析[J].化學研究與應用,2014,2(2):294-297.

[3] 李南薇,鐘銀鏈.木瓜葉氨基酸提取工藝優化及組成成分的HPLC分析[J].廣東農業科學,2012,11(11):119-121.

[4] 李岑,肖遠燦,楊紅霞,等.HPLC分析不同來源藏藥當佐中4種指標成分的含量[J].中國中藥雜志,2011,8(8):162-164.

[5] 顏軍,侯賢燈,徐開來.柱前衍生HPLC分析銀耳多糖的單糖組成[J].中國測試,2011,37(1):44-47.

(責任編輯：尹晨茹)

2014-06-04

周啟仲(1968-)，男，廣東省廣州市婦女兒童醫療中心主管中藥師，研究方向為中藥材鑒定和保管。

R284.1

A

1673-2197(2014)18-0025-02