北柴胡醋制前后對抑郁癥小鼠腦內DA和NE含量的影響

王麗娜，汪 巍，賈天柱,2

(1.遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600；2.遼寧省炮制工程中心， 遼寧 大連 116600)

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北柴胡醋制前后對抑郁癥小鼠腦內DA和NE含量的影響

王麗娜1，汪 巍1，賈天柱1,2

(1.遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600；2.遼寧省炮制工程中心， 遼寧 大連 116600)

目的：通過比較柴胡醋制前后對抑郁癥小鼠腦內DA、NE的影響，探討柴胡疏肝解郁作用機制。方法：ELISA法測定抑郁癥模型小鼠腦內DA和NE的含量。結果：柴胡可使抑郁癥小鼠腦內NE、DA含量明顯增加，且醋柴胡作用強于生柴胡，納入復方逍遙散后，可增強此作用。結論：柴胡與醋柴胡均具有抗抑郁作用，作用機理可能與其增加腦內單胺類遞質NE、DA含量有關。

北柴胡；抗抑郁；多巴胺；去甲腎上腺素

柴胡具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣之功效，尤長于情志不舒、郁怒憂思等肝氣郁結證，臨床用于治療精神分裂癥及抑郁癥等神志性疾病[1-3]。傳統認為醋制可增強柴胡疏肝解郁作用，如柴胡疏肝散(《景岳全書》)、逍遙散(《處方集》)等方均用醋柴胡。

抑郁癥與腦內兒茶酚胺類物質失調有關，包括5-羥色胺、5-羥吲哚、去甲腎上腺素和多巴胺等，是一類調節機體生理活動的重要物質，這些物質在腦內的含量可反映神經系統功能變化。本實驗以小鼠腦內DA、NE為指標，探討柴胡治療抑郁癥的作用機制，同時將柴胡與醋柴胡納入復方比較醋制前后作用的差異。

1 材料

1.1 藥品

柴胡：購于遼寧正大祥和藥業集團有限公司，批號：201105245，產地遼寧，經遼寧中醫藥大學藥學院鑒定教研室翟延君教授鑒定為柴胡(BupleurumChinense DC.)；醋柴胡為生柴胡加入定量米醋(每 100 kg用米醋20 kg)拌勻，稍燜潤，待醋被吸盡后，置炒制容器內，用文火加熱，炒干，取出晾冷[4]。樣品：分別將生柴胡、醋柴胡水煎煮后濃縮至每mL折合生藥1g，備用。

自制逍遙散：柴胡(生或醋制)15g，當歸15g，白芍15g，白術15g，茯苓15g，生姜15g，薄荷6g，甘草6g，上述八味藥混合粉碎，備用。臨用前配置成每毫升折合生藥1.5g的混懸液。

小鼠多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、ELISA試劑盒購于上海研域商貿有限公司。

1.2 儀器

FSH-2電動勻漿器(江蘇佳美)， Multiskan Mk3酶標儀 (Thermo，國產)。

1.3 動物

BACL小鼠40只，體重(18±2)g，購于大連醫科大學實驗動物中心，清潔級(CL)。

2 方法與結果

2.1 動物造模方法

小鼠隨機分為正常組、模型組、柴胡組、醋柴胡組、生柴胡逍遙散組和醋柴胡逍遙散組，每組6～7只。采用慢性溫和不可預知應激(chronicunpredictable mild stress，CUMS)結合利血平給藥造模。CUMS抑郁模型組按照文獻[5-6]略加改進，將30min行為限制、4℃冰水游泳5min、停水24h、停食24h、夾尾1min、明暗顛倒24h、搖晃5min(160 Hz)、40℃環境5min、噪音5min等9種刺激隨機安排到3周內，每天1種，使動物不能預料刺激的發生。正常對照組不予干預。造模 1周后灌胃給藥，劑量為1mL/20g體重，空白組給予等劑量生理鹽水。造模2周后，除正常組外各組動物腹腔注射利血平0.25mg/kg，每日1次，連續1周。造模 3周。

2.2 小鼠懸尾實驗 (tail suspension test)

末次給藥后，參照文獻[7]將小鼠尾部固定頭向下懸掛，測定6min內小鼠不動的時間，比較各組差異。結果見表1。

2.3 ELISA法測定小鼠腦內DA和NE

表1 對抑郁癥小鼠不動時間、腦內DA和NE含量的影響 ±s)

注：與正常組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05。

柴胡和醋柴胡均可縮短小鼠不動時間，說明柴胡與醋柴胡均具有抗抑郁作用。柴胡可使小鼠腦內NE、DA含量明顯增加，且醋柴胡作用強于生柴胡，納入復方逍遙散后，可增強此作用，推測柴胡治療抑郁癥的作用機理可能與其增加腦內單胺類遞質NE、DA含量有關。

3 討論

抑郁癥屬中醫“郁證”范疇。中醫認為，郁證是由于情志不舒、氣機郁滯所引起的一類病癥，表現為心情抑郁、情緒不寧、脅肋脹痛或易怒善哭，以及咽中如有異物、失眠等癥狀。抑郁癥的病機是情志所傷、肝氣郁結逐漸引起五臟氣機不和所致，特別是肝、脾、心三臟受累以及氣血失調而成。郁證的治療原則為理氣開郁、調暢氣機、怡情易性，以達到解郁安神，調理體內陰陽平衡，最終改變患者心境。

懸尾實驗作為行為絕望模型具有簡單、快速、敏感等特點，常用于抗抑郁藥物的快速篩選[9]。懸尾小鼠為克服不正常體位而掙扎活動，但活動一定時間后，出現間斷性不動，顯示“絕望”狀態，多數抗抑郁藥可有效縮短小鼠的不動時間[8]。本實驗結果提示：模型組小鼠的不動時間明顯長于正常組，說明造模成功，通過給藥可縮短小鼠的不動時間，說明柴胡與醋柴胡均有一定抗抑郁作用。

抑郁癥與腦內兒茶酚胺類物質失調有關。多巴胺(dopamine,DA)控制著認知、情感、攝食和內分泌調節等許多功能。NE合成減少可引發抑郁癥及其相關癥狀，后者包括嗜睡、精神運動性阻滯、認知障礙和快感缺失等。目前研究認為[10-13]，腦內去甲腎上腺素(NE)和DA之間的平衡失調，即DA和(或)NE一種或數種神經遞質(生物胺)出現了神經生化上的失衡或功能缺陷，導致傳遞功能受損，從而引起抑郁。利血平可耗竭或使去甲腎上腺素失活而產生抑郁作用，因此造模時采用應激刺激加利血平結合法。

本試驗研究結果發現，模型組小鼠腦內DA/NE均明顯下降，說明抑郁癥模型可使小鼠神經遞質間的平衡失調。各藥物均可以升高抑郁癥小鼠腦內DA/NE含量，對抑郁狀態亦有一定的改善作用，且作用強度逍遙散>醋柴胡>柴胡，提示醋制可增強柴胡抗抑郁作用，與傳統認為柴胡醋制后疏肝解郁作用增強一致。

柴胡為疏肝解郁常用藥。許多學者對肝郁證實質進行的研究發現，肝郁患者抑郁時腦內NE含量顯著降低[14]，且DA含量也較正常偏低。有實驗表明肝郁證模型小鼠腦內NE和DA與對照組比較下降明顯[15]，說明柴胡的疏肝解郁作用機制可能是與增加腦內受體部位的DA/NE含量有關。盡管柴胡與醋柴胡對DA/NE含量也有調節作用，但效果不如逍遙散，可能在復方中各味藥通過配伍增強了此作用。

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(責任編輯：宋勇剛)

Before and after Bupleurum Processed With Vinegar Influence on the Content of DA and NE in the Mouse Brain Suffering from Depression

Wang Lina1,Wang Wei1, Jia Tianzhu1,2

(1.Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine University, DaLian 116600,China;2.Chinese Material Medica Processing Engineering Center of Liaoning province, DaLian 116600,China)

Objective:By comparing the Bupleurum and vinegarish Bupleurum influence on the content of DA and NE in the mouse brain suffering from depression, investigate the mechanism on soothing liver-qi stagnation. Methods:Determine the content of DA and NE in the mouse brain suffering from depression by ELISA.Results:Bupleurum abled to significantly increased the content of DA and NE in the mouse brain suffering from depression, the effect of vinegarish Bupleurum is better than Bupleurum, after inclusion compound XiaoTaoSan, this effect will be enhanced.Conclusion:Both of the Bupleurum and vinegarish Bupleurum have antidepressant effects, and the mechanism of action may be related to an increase of the content of monoamine neurotransmitters NE,DA.

BupleurumChinense DC.;Antidepressant; DA;NE

2014-01-10

國家中醫藥管理局中醫藥行業科研專項項目(201107007)

王麗娜(1979-)，女，遼寧中醫藥大學講師，研究方向為中藥化學。

R285

A

1673-2197(2014)09-0004-02