超濾在燈盞花素注射液中的應用研究

張巖巖,黃 寧,田京京,馮玉康,孫勝斌,姜國志

(1.神威藥業集團有限公司, 河北 石家莊 051430；2.河北省中藥注射劑工程技術中心，河北 石家莊 051430)

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超濾在燈盞花素注射液中的應用研究

張巖巖1,2,黃 寧1,田京京1,馮玉康1,孫勝斌1,2,姜國志1,2

(1.神威藥業集團有限公司, 河北 石家莊 051430；2.河北省中藥注射劑工程技術中心，河北 石家莊 051430)

目的：考察4種不同規格的超濾膜對燈盞花素注射液的細菌內毒素和化學成分的影響，選擇適合生產使用的超濾膜。方法：分別選取10KD聚醚砜、10KD纖維素、30KD聚醚砜、30KD纖維素超濾膜對燈盞花素注射液進行超濾，測定不同超濾過程前后細菌內毒素、含量、有關物質以及膜通量變化，篩選適宜燈盞花素注射液使用的超濾膜。結果：不同截留相對分子質量的超濾膜對燈盞花素注射液的過濾效果存在差異：10KD超濾膜對藥液燈盞花素含量及有關物質截留率較高，相應的水通量恢復率較低；聚醚砜超濾膜膜通量大于纖維素超濾膜，過濾時間短。結論：10KD聚醚砜超濾膜能有效去除細菌內毒素，保留有效成分并去除雜質分子，同時能保證較高的膜通量，適用于燈盞花素注射液的生產。

燈盞花素注射劑； 超濾膜； 細菌內毒素；含量測定

燈盞花素注射液是從燈盞細辛中提取分離得到的燈盞花素而制得的中藥注射劑。燈盞花素注射液具有保護心臟、腎組織、糖尿病性肝臟，活血化瘀、抗血栓形成、心律失常，減少腦組織缺血及再灌注損害，改善糖尿病腎病血液流變學，通絡止痛的功效[1-2]，被廣泛應用于中風及其后遺癥、冠心病、心絞痛等的治療[3]。

本文主要通過對燈盞花素注射液超濾前后的細菌內毒素、含量、有關物質以及膜通量的變化綜合考慮超濾對燈盞花素的質量影響。對細菌內毒素的控制作為中藥注射劑一項安全性指標至關重要。注射劑中的熱原主要是細菌內毒素，為革蘭陰性菌外壁層的脂多糖物質，此類物質具有耐熱性和化學穩定性，不易被除滅。傳統的熱原去除法是活性炭吸附法，但因部分有效成分也被吸附，而使其適用性受到限制[4]。并且由于操作復雜，影響因素較多，重現性不好。近年來，超濾技術的應用日趨成熟，由于其無相變、能耗低、操作簡便、對環境無污染的特點，在醫藥行業逐步得到應用推廣。

本實驗采用不同材質、不同截留分子量的超濾膜，對燈盞花素注射液過濾效果進行考察，選出適宜用燈盞花素注射液生產使用的超濾膜[5]。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilen 1260 高效液相色譜儀；UV-2550紫外可見分光光度計；Millipore 蠕動泵；10KD聚醚砜超濾膜、30KD聚醚砜超濾膜、10KD纖維素超濾膜、30KD纖維素超濾膜(密理博(上海)貿易有限公司提供)。

1.2 材料

燈盞花素注射液藥液(神威藥業集團有限公司，批號1303011)，燈盞花乙素對照品(批號110842-201106，中國食品藥品生物制品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純；水為注射用水。

2 方法

2.1 樣品制備

取燈盞花素注射液中間體，加注射用水稀釋，制成與實際生產藥液相當的樣品。

2.2 超濾試驗

取燈盞花素溶液適量，平均分成4份，分別選擇10 KD聚醚砜超濾膜、10KD纖維素超濾膜、30 KD聚醚砜超濾膜、30KD纖維素超濾膜過濾。藥液溫度30℃，操作壓力0.06MPa，泵轉速180r/min。藥液經超濾膜過濾后進行循環，待藥液平衡后，收集濾過液。藥液快過濾完時，加補入適量注射用水。超濾結束后，收集濾過液，并記錄其體積。

2.3 樣品指標成分測定

2.3.1 動態濁度法測定細菌內毒素 依照細菌內毒素檢查法[6]進行動態濁度法測定細菌內毒素。通過燈盞花素注射液干擾試驗結果，樣品在稀釋20倍后得到很好的回收率，故此次測定取40倍的稀釋液即可。

2.3.2 燈盞花素含量測定 色譜條件與系統適用性實驗 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1%磷酸溶液(40：60)為流動相；流速為1.0mL/min；柱溫40℃；檢測波長為335nm。理論塔板數按燈盞乙素峰計算應不低于5 000[7]。

(1)對照品溶液制備。 取燈盞乙素對照品10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)45min，取出，放置室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

(2)供試品溶液制備 。取本品5mL，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

(3)測定法。 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3.3 有關物質[8]色譜條件及系統適用性試驗色譜柱：Zorbax SB-C18，4.6×250mm，5μm；流動相：A:0.5%甲酸，B乙腈，C甲醇。梯度洗脫。流速：1mL/min；檢測波長：335nm；柱溫：30℃。理論塔板數按燈盞花乙素計算應不低于30 000。

(1)對照溶液制備。精密稱取105℃干燥至恒重的燈盞花乙素對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

(2)供試品溶液的制備。精密吸取供試品溶液適量，加水稀釋成每1mL含燈盞花乙素0.2mg的溶液，搖勻，通過0.45μm的微孔濾膜，取續濾液，即得。

(3)測定法。精密吸取對照溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

將本品圖譜縱坐標調整為燈盞乙素峰峰高的10%,此條件下能檢出的色譜峰均要求積分(溶劑峰不積分)，計算燈盞花乙素峰以外的雜質峰總面積占總峰面積的比例。

表1 梯度洗脫

2.4 超濾過程膜通量的測定

超濾前，用注射用水清洗膜至pH值為中性，測定膜純水通量；超濾過程中分別測定超濾開始、超濾液體積為原液總體積1/2 時及超濾結束前的膜通量，計算超濾過程平均膜通量。超濾結束后，先用注射用水循環洗去殘存料液，再用0.1mol/L NaOH循環30min后，最后用注射用水清洗膜至中性，測定膜純水通量恢復率[9]。

3 結果與分析

3.1 樣品指標性成分變化

表2 4種不同超濾膜超濾前后燈盞花素注射液指標性成分變化結果

3.2 不同超濾膜對燈盞花素注射液的影響

結果表明不同規格的超濾膜過濾后，燈盞花素注射液中細菌內毒素、燈盞花素含量、相關物質均有不同程度降低。超濾后細菌內毒素值降低率為96.8%～99.2%，根據質量標準，完全符合注射劑內毒素的要求。燈盞花素含量的降低率為1.5%～5.6%，而有關物質的降低為46%～73%，綜合比較有關物質降低率與燈盞花素含量降低率，發現有關物質降低率大于燈盞花素含量降低率，即四種超濾均可在保留燈盞花素的同時除去雜質。不同材質超濾膜截留效果不同，聚醚砜對燈盞花素注射液的截留效果稍好于纖維素超濾膜。超濾膜孔徑對截留效果影響較大，10KD超濾膜對細菌內毒素及有關物質的截留率明顯大于30KD超濾膜。

3.3 超濾膜膜通量變化

表3 樣品對4種超濾膜通量的變化情況 (mL/min)

3.4 燈盞花素注射液對不同超濾膜的影響

不同規格超濾膜清洗后膜通量恢復率為75%～90%，大于75%，即燈盞花素注射液對超濾膜污染低，清洗后可繼續使用。對比膜通量數據發現，聚醚砜超濾膜超濾過程中平均膜通量大于纖維素超濾膜，且膜通量恢復率也高于纖維素膜，30KD超濾膜膜通量及膜通量恢復率明顯大于10KD超濾膜，所以生產過程使用聚醚砜材質過濾時間短于纖維素材質，30KD截留分子量過濾時間短于10KD截留分子量超濾膜。

4 結論

超濾膜可有效去除燈盞花素注射液細菌內毒素，并且能在保留有效成分的同時去除雜質。不同材質超濾膜對燈盞花素注射液效果差異不大，不同截留分子量效果差異較大。10KD膜包對燈盞花素注射液截留效果優于30KD超濾膜，聚醚砜材質過濾時間短于纖維素材質，故10KD聚醚砜材質超濾膜更適合燈盞花素注射液生產使用。

5 討論

超濾膜截留分子量小的，對細菌內毒素及有關物質截留率高，但膜通量較低，造成過濾時間延長，影響生產效率，同時增加藥液污染的風險。超濾應用于燈盞花素注射液生產中應綜合評估截留效果與生產時間的風險與收益，并采取相應措施保證產品質量。

超濾應用于生產還應進行工藝參數優化，一方面選擇合適的藥液濃度，減少或避免濃度極化現象；另一方面通過細化超濾操作壓力、泵轉速等參數，確保較大的膜通量，提高生產效率，降低污染風險，滿足生產需要。

[1] 楊淑艷，鐘秀宏，張以忠，等．燈盞花素藥理作用研究進展[J]．吉林醫藥學院學報，2008，29(6)：360-363．

[2] 林雄，褚克丹．燈盞花素的藥理學研究進展[J]．海峽藥學，2005，17(6)：5-8．

[3] 張曉丹，劉婧，張衛兵，等．燈盞花素心血管藥理及臨床研究進展[J]．中國藥業，2007，21(16)：3-5．

[4] 尹楠,李紅陽,彭國平,等. 超濾法去除中藥注射液中的細菌內毒素[J]. 中國醫藥工業雜志,2008(12):927-929.

[5] 孫晶波,姜國志,劉鑫. 超濾在冠心寧注射液工藝中的應用及對有效成分的影響 [J]. 河北化工,2011(7):18-21.

[6] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄VIII D.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：378-380.

[8] 代勇,劉三康,付春梅,等. 燈盞花素注射液的含量測定及有關物質的檢查[J]. 華西藥學雜志,2005(2):147-149.

[9] 韓麗. 應用逆流提取與膜分離技術的中藥注射劑新工藝研究[D].成都：成都中醫藥大學,2003.

(責任編輯：宋勇剛)

Applicationon Dengzhanhuasu Injectionin the Process of Ultrafiltration

Zhang Yanyan1,2, Huang Ning1, Tian Jingjing1, Feng Yukang1, Sun Shengbin1,2, Jiang Guozhi1,2

(1.Shineway Pharmaceutical Co．，Ltd．， Hebei 051430 ，China；2.Hebei Engineering Center for Chinese medicine injections,Hebei 051430,China)

Objective:To inspect the influence on Dengzhanhuasu Injection by using four different ultrafiltration membranes and select one applicable for manufacturing.Methods:Determining the bacterial endotoxin,content,related substance and membrane flux before and after Dengzhanhuasu Injection was filtered respectively by 10KD PES membrane,10KD cellulose membrane,30KD PES and 30KD cellulose membrane.Results:The filtering effects of four membranes are different.Membrane of 10KD owed higher retention rate of content and related substance but lower pure water flux recovery rate.PES membranes owed higher membrane flux and faster speed than cellulose.Conclusion:10KD PES membrane is applicable for manufacturing Dengzhanhuasu Injection with effectively removing the bacterial endotoxin and impurity,retaining effective components and higher membrane flux.

Dengzhanhuasu;Ultrafiltration Membrane;Bacterial Endotoxin;Content Determination

2014-02-10

張巖巖(1986-)，男，神威藥業集團有限公司助理工程師，研究方向為中藥工藝技術。

R284.2

A

1673-2197(2014)09-0023-02