HPLC法測定乳脂體中白藜蘆醇的含量

游國葉，李光霞，黃傳輝

(信陽職業技術學院 藥學院，河南 信陽 464000)

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HPLC法測定乳脂體中白藜蘆醇的含量

游國葉，李光霞，黃傳輝

(信陽職業技術學院 藥學院，河南 信陽 464000)

目的：建立HPLC法測定自制白藜蘆醇乳脂體中白藜蘆醇的含量。方法：采用Luna C18(5μm,250mm×4.6mm)柱，以甲醇∶水(75∶25)為流動相，流速1.0mL/min， 305nm波長處檢測。結果：白藜蘆醇在0.1～50μg/mL范圍內線性關系良好，線性回歸方程為：A=125 485.4C+8 407，R=0.999 9；平均回收率為99.1%，RSD為0.63%。結論：本法快速、準確，結果可靠，重現性好，適用于白藜蘆醇制劑的質量控制。

白黎蘆醇；HPLC；含量測定；乳脂體

白藜蘆醇(本文下稱RES)又名芪三酚，是含芪類結構的二苯乙烯芪類、非黃酮類多酚物質，文獻報道其對光敏感，在多種植物如虎杖、決明、葡萄中均有RES存在。多篇文獻報道[1]RES藥理作用較多，對心腦血管疾病有明顯的療效，還具有較強的抗突變、抗炎、抗氧化等生物活性，部分研究顯示它能夠抑制腫瘤生長，具有較強的抗腫瘤活性，有望成為新一代植物類抗腫瘤新藥物。 由于RES難溶于水，半衰期短，生物利用度低，本研究欲將其制備新劑型乳脂體，該劑型可將脂溶性藥物包裹其中，改善其在體內存留時間短的缺陷。制備過程中使用一些具有特殊功能的輔料，提高體內吸收程度，改善疾病治療效果。本實驗僅對含量測定進行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BP211D型半微量電子天平、Waters2695高效液相色譜儀，Waters2996紫外檢測器 (美國Waters公司)；100μL進樣針(江蘇漢邦科技有限公司)。

1.2 試藥

白藜蘆醇(湖北銀河化工廠，含量99.9%)、分析級甲醇及氯仿。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

2.1.1 波長選擇 取處方量RES標準品和不含藥的空白輔料混合物，分別置于25mL容量瓶中，甲醇溶解定容，備用。以甲醇為空白，分別取上兩溶液進行紫外掃描，由試驗可知在305nm處標準品有最大吸收峰，不含藥的空白輔料混合液無吸收，故選擇305nm為最佳波長,掃描圖譜見圖1。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：Luna C18(250mm×4.6mm ,5μm)；流動相：甲醇-水(75∶25)；流速：1.0mL/min；檢測波長：305nm；柱溫：室溫；進樣量：20μL。

圖1 波長掃描

2.1.3 儲備液制備 精密稱取白藜蘆醇對照品適量，用甲醇配制成200μg/mL的RES對照品儲備液。

2.1.4 干擾試驗 精密量取上儲備液7.5mL于100mL容量瓶，甲醇定容，得15μg/mL的RES對照品溶液；同上操作制備相當于含15μg/mL RES的空白乳脂體和含藥RES乳脂體。取上述三種溶液分別按照“2.1.2”項下色譜條件進樣測定，由試驗結果可見，在選定的色譜條件下，藥峰與雜質峰、溶劑峰均能有效分離且峰形穩定，保留時間約為6.3min，其它輔料均不影響RES測定。色譜見圖2。

圖2 白藜蘆醇色譜

2.2 線性關系考察

精密量取“2.1.3”儲備液5mL于100mL容量瓶中，流動相定容，搖勻，得濃度為10μg/mL的RES對照品溶液。分別精密吸取RES標準溶液適量于10mL容量瓶中，流動相定容，搖勻，得濃度分別為0.1、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、50.0μg/mL的系列溶液，進樣，以“2.1.2”項下色譜條件進樣測定峰面積，以峰面積A對濃度C作線性回歸，得標準曲線方程為A=125 485.4C+8 407 ，R=0.999 9，表明RES在0.1～50μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.3 精密度試驗

精密量取RES對照品儲備液適量配制濃度分別為5、15、50μg/mL的RES溶液3份，按“2.1.2”項下色譜條件進樣，每份樣品每隔4h測定1次，共測5次；每份樣品每天測1次，連續測定5天。分別計算RES的日內及日間精密度。可得日內精密度和日間精密度三濃度RSD分別為1.31%、0.91%、1.01%和1.40%、0.95%、1.25%，由此可知，精密度良好。

2.4 加樣回收率試驗

取已知含量的RES(99.9%)9份, 每份約0.1g，精密稱定，分別置于已標號的1～9號燒杯中,其中1、2、3號中加入RES對照品溶液50μg·mL-1,4、5、6號中加入RES對照品溶液100μg·mL-1,7、8、9號加入RES對照品溶液150μg·mL-1各10mL，得到9份加樣回收供試液。按“2.1.2”項下色譜條件測定,結果見表1。由表1可知：平均回收率為98．71%，表明用HPLC測定RES的含量準確度良好。

表1 回收率試驗結果

2.5 穩定性試驗

取同一供試品溶液,在放置時間為0、2、5、8、12h時進樣，測定峰面積，穩定性試驗RSD為1.46%，小于2%藥典標準，說明穩定性在此條件下良好。

2.6 樣品含量測定

按成熟的制備工藝和處方量制備三批含藥乳脂體(編號1、2、3)，精密吸取該制劑5mL置100mL容量瓶中，流動相定容，搖勻后過濾，取續濾液得約相當于；另精密量取濃度約為20μg/mL的RES對照品溶液，分別取供試液和對照品液進樣，用峰面積外標法計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果 (n=3)

3 討論

通過文獻查閱和反復預實驗，在紫外掃描的基礎上確定了主藥的測定波長，最終選擇了甲醇∶水(75∶25)為流動相，室溫條件下測定白藜蘆醇乳脂體的體外含量分析方法，以HPLC測定白藜蘆醇的含量，試驗條件下線性關系良好，精密度、回收率均符合藥典規定，重現性好，方法學考查表明此法可用來進行含RES的乳脂體制劑的含量測定。由試驗可知，由于RES對光敏感，自然光照下室溫放置16h，含量下降20%，棕色瓶室溫條件下放置72h后含量降低5%，所以在實驗過程中應避光操作。

白藜蘆醇屬于強脂溶性藥物，體內藥代不佳，消除半衰期短，難以達到有效治療的血藥濃度，不利于疾病的治療，而新劑型乳脂體類似于脂質體，可包封脂溶性藥物，使被包封的藥物性質不發生改變，毒性降低，提高利用度。

[1] 張文眾．白黎蘆醇雌激素作用研究[J].中國食品衛生雜志，2008，20(3)：214-216.

(責任編輯：宋勇剛)

2014-01-06

游國葉(1984- )，女，河南省信陽職業技術學院助教，研究方向為藥物新劑型與新技術。

R284.2

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1673-2197(2014)09-0031-02