自身抗體檢測的質量控制和檢驗程序分析

李善姬

【摘要】自身抗體檢測時對自身免疫性疾病進行檢測的方法，由于自身組織在發生機體、自身抗原免疫反應而導致的疾病則被稱為自身免疫性疾病（AID），主要是采取免疫印跡法、間接免疫熒光法、酶聯免疫吸附法等多種檢測方法，對抗嗜中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）、抗可提取性核抗原體（ENA）、抗核抗體（ANA）等項目進行檢測。本文對檢測的質量控制、檢驗程序分析等進行了闡述，要求檢驗人員要嚴格按照程序要求，全面做好自身抗體的質量控制。

【關鍵詞】自身抗體檢測；質量控制；檢驗程序分析

【中圖分類號】R-0 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）04-0343-02

自身組織在機體對自身抗原發生免疫反應下發生損害而引起的疾病，稱之為自身免疫性疾病（AID）。臨床上沒有自身免疫性疾病的正常人也可能存在自身抗體，因此，從某種意義上來說，自身抗體的存在與自身免疫性疾病是兩種不同的概念。近年來，隨著現代檢測技術的不斷發展，自身抗體檢測在自身免疫性疾病的檢測和診斷，以及臨床用藥指導等方面都有了長足發展，并起到了重要的作用。

一、臨床常見的自身抗體檢測

自身抗體與疾病具有相關性，并存在與多數的自身免疫性疾病患者血清中，通過對自身抗體的檢測，可以對自身免疫性疾病進行診斷，以及預后評估，具有重要的臨床價值。隨著自身抗體的深入了解，已經逐漸成為臨床免疫檢測的重要實驗室指標，臨床中應用廣泛。有抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）、抗核抗體（ANA）、類風濕因子（RF）、抗環瓜氨酸肽抗體（CCP）、抗角蛋白抗體（AKA）、抗肝抗原自身抗體、抗可提取性核抗原抗體（ENA）等多種抗體檢測，下面介紹幾種抗體在臨床中的應用。

1.抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）

在DNA脫氧核糖磷酸框架上是抗體與細胞核的反應點，其靶抗原是雙螺旋DNA，又有天然DNA抗體之稱。是系統性紅斑狼瘡的主要臨床特征，有研究顯示，臨床中有30%-90%系統性紅斑狼瘡患者的抗雙鏈DNA抗體檢測為陽性。抗雙鏈DNA抗體隨著疾病活動的控制呈正相關，并可以作為系統性紅斑狼瘡疾病的治療效果的監測，以及預后的評價。呈陽性的患者發生腎炎的機率非常大，約為呈陰性的患者腎炎發生率的12倍。

2.抗核抗體（ANA）

自身真核細胞成分為靶抗原的各種細胞核的自身抗體統稱為抗核抗體，能夠與各種動物的細胞核發生反應，不具有種屬和器官特異性，其性質主要體現為IgG、IgD、IgA和IgM。ANA在診斷自身免疫性疾病中的臨床價值已經在多種疾病中得到證實，尤其是風濕性疾病、多發性動脈炎、重癥肌無力、橋本甲狀腺炎等疾病中診斷中具有重要意義。

3. 抗嗜中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）

ANCA 是系統性血管炎的血清標志性抗體，該抗體靶抗原為人嗜中性粒細胞胞漿成分，主要有細胞質型和核周型兩種類型。該抗體與臨床多種小血管炎性疾病關系密切，對于全身性血管炎和Wegener肉芽腫患者，細胞質型呈陽性，且特異性超過97%，初發非活動期患者敏感性為50%，活動期敏感性為100%；對于壞死性新月體型腎小球腎炎、變態反應性肉芽腫性脈管炎和多血管炎患者，核周型在顯微鏡下發現較多。

4.抗單鏈DNA抗體（ss-DNA）

該抗體以脫氧核糖或核糖為靶抗原，也有變性DNA抗體之稱。系統性紅斑狼瘡患者的ss-DNA檢出率通常在50%-60%之間，混合性結締組織疾病、硬皮病、類風濕性關節炎、皮肌炎、藥物誘導所致狼瘡等風濕性疾病患者的ss-DNA檢出率在10%-70%之間，另外，也可能在正常的老年人體內發現，但是不具有疾病特異性。

二、常用檢驗方法

臨床中應用較為廣泛的檢驗方法有：間接免疫熒光法（IIF）、酶聯免疫吸附法（ELISA）、免疫印跡法（WB）、放射免疫法（RIA）、免疫斑點法（IDA）。

三、自身抗體檢測的質量控制和檢驗程序

自身抗體檢測的質量控制（QC）實驗室檢測水平的一個重要衡量指標，是實驗結果準確性的重要保證。由于自身抗體檢測多為定性實驗或半定量實驗（以滴度報告），特別強調每次實驗中應同時設置檢測陽性對照，陰性對照，以監測結果的準確性。同時，也便于對實驗室內部、實驗室之間質量控制的可比性、重復性進行評估。

1.進行自身抗體檢測的要求

（1）實驗室應有充分的空間、良好的照明和空調設備；設施和設備配備合理，能滿足自身抗體檢測的要求；（2）檢測用試劑盒必須由具有相關資質的廠家提供，并按規定保存；（3）熒光顯微鏡的質量和熒光光源的強度是保證良好分辨率的基礎；（4）每家開展檢測的實驗室都應建立其自身抗體檢測項目的標準操作規程文件；（5）相對固定檢測人員，并嚴格按照SOP文件要求進行檢測。陽性結果最好與該患者過去檢測檔案進行復核后再發出結果；（6）開展自身抗體檢測的實驗室在保證室內質控的同時，應參加國家或國際權威組織的室間質量評價。（7）質控品與患者標本在同樣條件下進行測定，并要特別注意質控品的保存條件和保質期，不得使用保存不當和超過保質期的質控品；（8）微量加樣器必須定期進行校準， 從而使其保持有足夠的準確度和精密度；（9）每家開展檢測的實驗室都應對廠家推薦的熒光標記物的稀釋方法進行評價，應用已知滴度的陽性血清去滴定標記物，以建立操作過程中的正確稀釋方法；（10）酶標儀應定期校準，制定標準操作程序和嚴格的維護保養措施。

2.實驗基質的選擇要求

實驗基質的選擇實驗基質的質量在很大程度上取決于間接免疫熒光法對自身抗體進行測定的效果。自身抗體檢測中的實驗基質，一般用動物或人類的細胞或組織，須經一系列方法進行處理，如HEP-2 細胞的培養、吸附和固定，冰凍組織切片的制備、貼片等。越來越多的實驗室已經使用商品化的自身抗體間接免疫熒光檢測試劑盒。由于生產工藝先進，質控措施嚴格，從而保證了實驗結果準確的可信性。檢測不同的自身抗體應選擇不同來源的實驗基質， 如檢測ANA 一般用人上皮HEP-2 細胞和靈長類動物肝臟。而器官和組織特異性自身抗體則選用相應的抗原器官組織。

熒光標記二抗的選擇在自身抗體檢測中，熒光標記二抗的質量直接影響實驗的結果。熒光素與第二抗體的偶聯需要保持一定的摩爾比值（F/P，熒光素/抗體蛋白比值），F/P 值過高將產生明顯的非特異性熒光。

3. 檢驗程序

（1）標本處理：標本的處理首先保證檢測系統要具有完整性；常溫下進行標本處理操作；正確貯存試劑，保證日期。如二抗的貯存不合理，自身抗體效價則下降明顯。建議實驗室各自建立每種玻片的最佳容量并寫入SOP 中；為防止標本干燥，孵育過程要在潮濕箱內進行；加樣要準確，防止向鄰近區域溢漏；孵育、洗滌按要求進行；讀片后， 玻片置于冰箱， 可保存24 小時。對于24小時以上的保存，需要在零下20℃下密封放置。（2）血清稀釋按試劑說明書要求稀釋血清；結果為陽性的血清進行等比稀釋。（3）陽性和陰性質控品的操作與標本操作過程相同；對于重要的熒光圖型，每個一定間隔， 應采用疾病特異的自身抗體陽性質控品；具有商品化的陽性質控品，實驗室可以自己制備；理想化的是應用商品化或CDC的特定質控品；根據國家標準和指南， 參加獨立于供應商的室間質評。（4）采用顯微鏡判斷熒光強度；應重視有絲分裂， 判斷基本圖型； 更換燈泡后， 應對顯微鏡作一定的校準。

3.結果的判斷和解釋

檢驗報告中必須描述每個圖型及其滴度；有的圖型具有疾病相關性， 也可提示做特異性免疫檢測。通過自身抗體效價與滴度消長，可判斷疾病的活動性，觀察治療反應，指導臨床治療。檢驗報告中必須描述每個圖型及其滴度；有的圖型與疾病有相關性，也可提示做特異性免疫檢測。

結合患者年齡、自身抗體水平以及相應的熒光模式等方面對結果進行綜合分析和解釋。對于意義不明確、圖型不典型的情況，在檢驗報告中添加注解，便于臨床醫師充分了解患者情況；檢驗報告應由資深人員出具；各實驗室應建立自己的參考區間。

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