宮頸癌中COX—2的表達(dá)與HPV16感染的關(guān)系

李芳

【摘要】目的： COX-2在宮頸鱗狀細(xì)胞癌變中的表達(dá)及與HPV16感染的關(guān)系進(jìn)行探討。方法：采用EliVisionTM plus兩步法，檢測COX-2在42例宮頸鱗狀細(xì)胞癌、17例正常宮頸鱗狀上皮的表達(dá)。原位雜交技術(shù)檢測宮頸鱗狀細(xì)胞癌、正常宮頸鱗狀上皮的表達(dá)。 結(jié)果：（1）COX-2在宮頸鱗狀細(xì)胞癌和正常宮頸上皮二者之間的陽性表達(dá)率存在明顯差異（P<0.01）。（2）HPVl6DNA 在宮頸鱗狀細(xì)胞癌、正常宮頸鱗狀上皮兩組存在著較大的差異<0.01）。（3）HPv感染和COX-2蛋白表達(dá)在宮頸鱗狀細(xì)胞癌表達(dá)呈正相關(guān)，在正常宮頸上皮組織中無相關(guān)性。結(jié)論： COX-2在正常宮頸上皮和宮頸鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)存在明顯差異。與此同時(shí)，COX-2的與HPV協(xié)同作用和蛋白表達(dá)上調(diào)對于治療中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌極為有效。

【關(guān)鍵詞】宮頸鱗狀細(xì)胞癌；COX-2；HPV16感染

【中圖分類號】R 737. 33 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）03-0105-01

宮頸鱗狀細(xì)胞癌是一種較為常見的女性惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展通常是由多種因素導(dǎo)致。環(huán)氧合酶-2（COX-2）在多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中都被普遍過表達(dá)，是一種典型的限速酶，由催化前列腺素合成。Masferrer [1]等發(fā)現(xiàn)，COX-2高表達(dá)很容易導(dǎo)致癌癥發(fā)生。從目前來看，HPV（人類乳頭瘤狀病毒）是高危因素，特別是HPV16/18[3]。本文就COX-2在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及與HPV16感染的關(guān)系進(jìn)行探討。

材料與方法

1.材料：選取2011—2012年保定市第二醫(yī)院醫(yī)院病理科所保存的59例石蠟包埋標(biāo)本。其中，42例為宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織，17例非腫瘤患者的正常宮頸鱗狀上皮為對照組。標(biāo)本切片厚度4μm，石蠟包埋， 4%中性甲醛固定。

2.免疫組織化學(xué)：采用EliVisionTM plus兩步法。福州邁新試劑公司生產(chǎn)的DAB顯色試劑盒、EliVisionTM plus檢測試劑盒、兔抗人COX-2單克隆抗體。操做步驟主要參照試劑盒說明書進(jìn)行。

3.原位雜交主要步驟：切片經(jīng)烤片后脫蠟；微波加熱脫水干燥；每張切片滴加25山地高辛標(biāo)記HPVl6探針，并加蓋玻片；95℃變性8 min于37℃濕盒（含雜交增強(qiáng)液）中孵育過夜（<16 h）；加50山抗地高辛抗體，37℃濕盒中孵育30 min后加二抗；DAB顯色；蘇木精對比染色，中性樹膠封片。

4.結(jié)果判斷：染色結(jié)果由兩位專業(yè)的病理專家進(jìn)行評估。參照Kim YB[4]等的方法來改進(jìn)染色結(jié)果，半定量的綜合計(jì)分根據(jù)胞漿陽性染色強(qiáng)度和細(xì)胞百分比進(jìn)行，分為2組（-，+）。對陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行觀察，陽性細(xì)胞百分比≥75%計(jì)4分，陽性細(xì)胞百分比51～75%計(jì)3分，陽性細(xì)胞百分比26～50%計(jì)2分，陽性細(xì)胞百分比≤25%計(jì)1分，無陽性細(xì)胞計(jì)0分；染色強(qiáng)度按照所呈現(xiàn)出來的染色計(jì)分，3分為深褐色， 2分為棕黃色，1分為淡黃色，0分為無著色；將著色強(qiáng)度+陽性細(xì)胞百分比的計(jì)分進(jìn)行相加，≥3分為陽性（+），0～2分為陰性（-）。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件。

結(jié)果

1.COX-2的表達(dá)：在正常宮頸鱗狀上皮中，COX-2為陰性表達(dá)（0/17）。宮頸鱗狀細(xì)胞癌中，COX-2的陽性表達(dá)率為57.14%（24/42）。宮頸鱗狀細(xì)胞癌和正常宮頸上皮二者之間的陽性表達(dá)率存在明顯差異（P<0.01）。

2.HPVl6DNA的表達(dá)：在宮頸鱗狀細(xì)胞癌、正常宮頸鱗狀上皮中，HPV l6DNA的陽性表達(dá)率分別為78.57%（33/42）、17.65%（3/17）。兩組存在著較大的差異 （P<0.01）。

3.HPV l6DNA和COX-2的相關(guān)性：在42例宮頸鱗狀細(xì)胞癌中，24例共同表達(dá)； 17例宮頸低級別上皮內(nèi)瘤變中，有2例HPVl6DNA和COX-2共同表達(dá)。相關(guān)分析表明，HPv感染和COX-2蛋白表達(dá)在高級別宮頸鱗狀細(xì)胞癌和上皮內(nèi)瘤變呈正相關(guān)，在正常宮頸上皮組織中無相關(guān)性。

討論

Cox-2在正常組織不表達(dá)，但是在受到促瘤劑、細(xì)胞因子、生長因子的刺激之后，會出現(xiàn)較大的表達(dá)，屬于典型的誘導(dǎo)型酶 [5]。我們發(fā)現(xiàn)COX-2在正常宮頸鱗狀上皮呈陰性表達(dá)，而在和宮頸鱗狀細(xì)胞癌中COX-2陽性表達(dá)率明顯增高。這表明COX-2在宮頸鱗狀細(xì)胞癌形成中起到重要作用。同時(shí)，原位雜交研究結(jié)果顯示，在正常宮頸鱗狀上皮到宮頸鱗狀細(xì)胞癌，HPVl6DNA的陽性表達(dá)率遞增較為明顯， HPV感染可以充分發(fā)揮出其較為有效的作用。與此同時(shí)，COX-2的與HPV協(xié)同作用和蛋白表達(dá)上調(diào)對于治療中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌極為有效。

參考文獻(xiàn)

[1]Masferrer JL，et al.Antiangeogenic and anti-tumor activities of COX-2 inhibibrs[J].Cancer Res，2000；60（5）：1306-1311

[2]李寶康，趙純?nèi)?病毒感染與宮頸癌的相關(guān)性研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué)，2010，36（5）；476-478

[3]薛景，余文菊.宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中HPV16/18感染與Ki-67、P16表達(dá)的關(guān)系[J].浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2010，14（2）：89-106

[4] Kim YB， et al. COX-2 expression in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the uterine cervix.Int J Radiat Oncol Biol Phys， 2004， 60（3）：822-829

[5]徐萍，榮風(fēng)年.COX-2、MMP-9在宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2008，16（8）；1385-1387

[6] Boyer SN，Wazer DE，Band V. E7 protein of HPV16 induces degration of retinoblastoma protein through the ubiquitin proteasoma pathway.Cancer Res，1996，56（20）：4620-4624