HPLC法測定五黃養(yǎng)陰顆粒中姜黃素的含量

呂紫璇等

【摘 要】目的：建立HPLC法測定五黃養(yǎng)陰顆粒中姜黃素含量的方法。方法 色譜柱為C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為乙腈-0.4%冰醋酸（48：52），流速為1.0mL/min，檢測波長為430nm，柱溫35℃。結(jié)果：姜黃素進樣量在0.0239～0.478ug范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.9998），加樣回收率為99.14%，RSD為0.48%（n=6）。結(jié)論：本方法操作簡便準確，可用于五黃養(yǎng)陰顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】五黃養(yǎng)陰顆粒；高效液相色譜法；姜黃素

【文章編號】1004-7484（2014）04-2422-02

五黃養(yǎng)陰顆粒由黃連、黃芪、姜黃、地黃和黃芩5味中藥制成，是以石柱黃連為主藥治療2型糖尿病合并脂代謝異常的純中藥制劑。原標準未對主要藥物姜黃作質(zhì)量控制，不能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。筆者采用高效液相色譜法建立姜黃素的測定方法，該方法簡便準確，可以用于五黃養(yǎng)陰顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；Sartorius-ME215S電子天平。

姜黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110823-201004，含量98.8%）；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純；五黃養(yǎng)陰顆粒樣品由重慶東田藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.4%冰醋酸（48：52）；流速：1.0mL/min；檢測波長：430nm；柱溫：35℃；進樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取姜黃素對照品適量，加甲醇制成每1ml含 0.01195mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下2袋，研細，取0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超 聲處理（功率250W，頻率50kHz）20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 按照五黃養(yǎng)陰顆粒劑制備工藝，制備缺姜黃的陰性樣品，照供品溶液的方法制備，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性考察 取上述3種溶液，分別進樣，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對照品溶液在與對照品溶液色譜峰相應保留時間位置上未出現(xiàn)吸收峰，說明處方中其他成分對測定無干擾，專屬性好。理論塔板數(shù)按姜黃素計算大于3000，分離度大于1.5。見圖1。

2.3.2 線性關(guān)系考察 取姜黃素對照品溶液，分別進樣量2μL、4μL、10μL、20μL、40μL，按擬定的色譜條件測定峰面積，以進樣量（X）

2.3.3 精密度試驗：取姜黃素對照品溶液，連續(xù)測定6次，結(jié)果姜黃素的峰面積的RSD為0.1% （n=6）。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗：精密取同一批號樣品（批號為130503），按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液測定，姜黃素的含量的RSD為0.24% （n=6）。表明此方法重現(xiàn)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12，24 h進樣10μL，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果姜黃素峰面積的RSD分別為0.37%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號130504）6份，精密加入姜黃素對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定，計算回收率，結(jié)果姜黃素平均回收率為 99.14%，RSD%為0.48%（n=6）結(jié)果見表1。

2.4 樣品測定

取3批五黃養(yǎng)陰顆粒樣品，測定。結(jié)果批號為130502、130503、130504的樣品姜黃素含量分別為2.91，3.01，2.96mg/g.

3 討論

提取時間的考察： 參照《中國藥典》2010年版一部 “姜黃”項下的含量測定方法 ，采用甲醇為溶劑，超聲提取 ，考察了超聲20、30 、40分鐘對提取效率的影響，結(jié)果含量基本一致 ，因此提取時間定為20分鐘。

本實驗采用的處理方法簡便易行，姜黃素能達到較好的分離效果，結(jié)果準確可靠，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].中國醫(yī)藥科技出版，2010.

[2] 梁堅，梁藝堅，曹耘，陸瑋，廖偉成.HPLC法測定清肝敗毒丸中姜黃素的含量 [J] 臨床合理用藥雜志，2013，6（8）：33-34

作者簡介：

呂紫璇（1983-），女，理學學士，中藥師，執(zhí)業(yè)藥師，質(zhì)量工程師，主要從事藥品檢驗工作。