酶聯免疫吸附法檢測乙肝表面抗原弱陽性結果分析與報告

蘇立瑩

【摘 要】目的：對酶聯免疫吸附（ELISA）法測定乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）弱陽性結果進行分析與探討。方法：對ELISA法檢測的1025例HBsAg陽性標本中出現的110例弱陽性標本分別用膠體金法與化學發光法進行鑒別與定量分析。結果：110例弱陽性標本中有50例為后帶效應導致，膠體金法檢測強陽性，HBsAg化學發光法定量檢測均>250IU/mL；15例為真弱陽性，膠體金法檢測陰性，化學發光法定量檢測結果在0.05-5.00IU/mL之間；45 例為假陽性，膠體金法與化學發光法均為陰性，假陽性率為4.39%。結論：加強檢驗前、中、后質量管理，避免假陽性結果的報告；對HBsAg弱陽性結果用膠體金法與化學發光法進行復查，并加強與臨床醫患的溝通。

【關鍵詞】酶聯免疫吸附法；乙型肝炎病毒表面抗原；弱陽性

【中圖分類號】R 512162 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）04-2464-01

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法是臨床進行乙型肝炎病毒（HBV）診斷的主要方法之一，其試驗靈敏度高，特異性好，操作簡便，在國內廣泛應用。但在工作中常常會遇到弱陽性標本，為了防止假陽性結果的報告，本院采用膠體金法與化學發光法進行鑒別，可避免不必要的醫患糾紛。同時，通過對我院1025例HBsAg陽性標本中出現的110 例弱陽性標本進行分析與探討，查找產生假陽性結果的影響因素，找到行之有效的解決辦法；對于真正處于窗口期感染的弱陽性結果及由后帶現象影響的弱陽性結果，及時與臨床醫患溝通，便于對乙型肝炎的診斷與治療。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選擇2013年6月至11月在白城中心醫院申請檢查HBsAg的住院及門診患者，用真空負壓管取被檢者清晨空腹靜脈血3mL，3000轉/分離心10分鐘，要求無脂血、溶血標本。在1025例ELISA法檢測HBsAg陽性標本中選擇110例弱陽性標本，同時進行膠體金法與化學發光法的檢測。

1.2 試劑 初檢用上海科華公司生產的HBsAg診斷試劑盒（ELISA法）；復檢用杭州艾博公司生產的HBsAg檢測試劑盒（膠體金法）；最后確診用美國雅培公司生產的HBsAg診斷試劑盒（化學發光法）。

1.3 儀器 上海科華KHB ST-360酶標儀，美國雅培i2000全自動化學發光免疫分析儀。

1.4 方法 在ELISA法測定的1025例HBsAg陽性標本中，以吉林省臨床檢驗中心頒發的HBsAg弱陽性質控品（0.2IU/mL）在我室測定的 +2s為標準，選定結果S/CO <5.0的110例弱陽性標本，分別用膠體金法與化學發光法進行鑒別并定量檢測HBsAg。所有檢測步驟均按儀器及試劑說明書要求操作，標本在用化學發光法檢測前均再次用離心機10000轉/分離心10分鐘后上機，避免體內嗜異性抗體的干擾。

1.5統計學處理 采用SPSS 21.0統計軟件。計量數值以均數±標準差（ ）表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

由表1可見，在1025例ELISA法檢測的HBsAg陽性標本中，有50例弱陽性標本三種方法均為陽性，其中膠體金法顯示為強陽性，用美國雅培i2000全自動化學發光免疫分析儀檢測結果均>250IU/mL，將50例弱陽性標本5倍稀釋后再次進行ELISA法檢測，S/CO比值在23.25±3.56，顯示強陽性；有45例弱陽性標本經膠體金法與化學發光法最后鑒別為假陽性；有15例弱陽性標本經化學發光法最后鑒定為真弱陽性，結果為1.63±1.27IU/mL。ELISA法檢測假陽性組與真弱陽性組之間差異無統計學意義（P>0.05），假陽性組與后帶效應組、真弱陽性與后帶效應組之間存在顯著性差異（P<0.05）。此外，假陽性結果在所有陽性標本中占4.39%（45/1025），在弱陽性標本中占40.91%（45/110）；真弱陽性標本在所有陽性標本中占1.46%（15/1025），在弱陽性標本中占13.64%（15/110）；后帶效應標本在所有陽性標本中占4.88%（50/1025），在弱陽性標本中占45.45%（50/110）。

3 討論

ELISA法檢測HBsAg出現弱陽性結果實際有三種情況，即后帶效應、真弱陽性、假陽性。雖然三種結果中后帶效應組與其他兩組存在顯著性差異（△P<0.05），但假陽性組與真弱陽性組無顯著性差異（*P>0.05），因此要對弱陽性結果予以慎重對待。由于抗原抗體發生可見反應需遵循一定的量比關系，只有抗原抗體濃度比例適當時才出現可見反應，當抗原過剩時稱為后帶效應，過剩的抗原不能與包被抗體充分結合形成抗原抗體復合物，而是形成小網格復合物，影響顯色反應，甚至可出現假陰性[1]。將上述50例后帶效應導致的弱陽性標本進行5倍稀釋后再次進行ELISA法檢驗，S/CO比值可達23.25±3.56，用化學發光法檢測結果均>250IUmL。后帶效應導致的弱陽性結果在所有弱陽性標本中占45.45%，三種方法中，膠體金法能有效避免后帶效應，直接報告強陽性，省時、準確、方便。ELISA法受影響因素眾多，其中不僅包括標本采集、處理不當；試劑因素；儀器因素；操作因素等，還包括患者本身因某種疾病或其他原因存在嗜異性抗體等影響因素。此次調查是嚴格按照標準操作規程執行，從檢驗前質量控制開始，對采集的標本要求新鮮采集、及時分離血清，要求無溶血、脂血標本。操作中注意加樣量的準確；試劑的準備；孵育溫度及時間的控制；洗滌反應板的方式等；檢驗后質量控制，我們也嚴格掌握顯色的溫度及時間，利用酶標儀判讀結果，并認真核對檢驗標本及結果。盡管如此，仍有45假陽性標本，總結45例假陽性結果產生的原因，發現分別是由洗滌不充分、反應板底部污染、患者體內存在嗜異性抗體等原因導致。在用洗板機洗滌反應板的過程中，如板孔中酶試劑殘留，會出現假陽性現象，這與于洋[2]的報道相符合；酶標儀是ELISA試驗所必須的儀器，它是對反應孔進行垂直比色，當反應板底部有污染時，容易出現吸光度值升高，導致假陽性的結果[3]；有些患者在患某些疾病（類風濕性關節炎、肝硬化等）過程中，其體內含有一些非特異性抗體成分，這些特殊成分在反應過程中有一定的吸附作用，產生假的顯色反應而出現假陽性。由于假陽性標本與真弱陽性標本，分別占弱陽性標本的40.91%與13.64%，兩者的鑒別尤為重要，在通過膠體金法判定陰性后，需通過化學發光法對HBsAg進行定量檢測做出最后報告。對于15例真弱陽性結果，雖然占所有陽性標本的1.46%，但能提示臨床醫生及早診斷并治療。對于所有弱陽性結果均需要與臨床及時溝通，必要時在檢驗報告備注欄中加以解釋說明。

4 結論

在實際工作中，我們會遇到HBsAg弱陽性標本，為避免假陽性報告的發出而導致不必要的醫患糾紛，我們應謹慎對待。首先我們要加強檢驗前標本的質量管理，因溶血標本影響檢驗結果，所以溶血標本要聯系相應科室重新采集[4]，對于新生兒因血管脆弱導致的溶血標本，可聯系臨床醫生進行必要的溝通與解釋說明，并在檢驗報告備注中注明。其次，加強檢驗中的質量管理，嚴格按照操作規程完成每一步檢測，尤其注重洗滌效果與酶標儀判讀的監測。最后，對于弱陽性標本要及時用膠體金法或化學發光法進行復查，并加強臨床溝通，慎重報告檢驗結果。后帶效應導致的弱陽性結果，在檢驗報告的備注中，應注明：抗原過剩導致弱陽性。真弱陽性結果，在檢驗報告的備注中，應注明：結果已經發光法復查，建議定期復查。

參考文獻：

[1] 王蘭蘭，吳健民.臨床免疫學與檢驗[M].4版，北京；人民衛生出版社，2007：19

[2] 于洋，周誠，祁自柏，等.丙型肝炎病毒抗體診斷試劑的質量檢測[J].中國生物制品雜志，2003，16（2）：108

[3] 彭明喜.酶聯免疫吸附試驗檢測梅毒抗體假陽性的原因分析[J].現代實用醫學雜志，2006，18（2）：127-128.

[4] 龔顯恩.探討標本溶血對酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎表面抗原的影響[J].實用醫技雜志，2008，15（14）：1821-1822.