差異淺析ELISA法與膠體金試紙條檢測HbsAg

唐興華

【摘要】目的：采取差異式的方法探究膠體金試紙條與ELISA法檢測HBsAg的I臨床應用價值及優點和特點，為臨床積累寶貴資料。

【關鍵詞】 ELISA法 膠體金試紙條檢測HBsAg 差異分析

【中圖分類號】R446.6 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）03-0349-02

我國是世界公認的乙肝大國，乙肝病毒人群攜帶率約10% ，乙型肝炎是目前流行最廣泛、危害最嚴重的病毒性肝炎診部從2009年主動來檢測乙肝五項指標的4183人中，對未感染者實施預防接種，以降低人群發病率；對406陽性標本進行了膠體金試紙條與ELISA法進行比較，分析二者在結果上的差異性，并將強陽性的20份標本做倍比稀釋分析二者的靈敏度。

1 ELISA法特點

1.1靈敏性高

該測定法的靈敏度來自作為報告集團的酶。眾所周知， 酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導大量的催化反應 ，產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實現了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。

1.2特異性強

其特異性來自抗體或抗原的選擇性。抗原抗體的結合實質上只發生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系，所以抗原抗體反應具有高度的特異性。

膠體金試紙條診斷技術

2膠體金試紙

膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層 析技術研制而成，該技術是90 90年代初在免疫 析技術研制而成，該技術是90年代初在免疫 滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免 疫學檢測技術， 疫學檢測技術，最先用于人絨毛膜促性腺激 HCG） 素 （ HCG） 的測定和乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg）等檢測。 （HBsAg）等檢測。gold） 膠 體 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸 的水溶膠， （HAuCl4）的水溶膠，氯金酸在還原劑的作 用下，聚合成特定大小的金顆粒， 用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜 電作用成為一種穩定的膠體狀態。 電作用成為一種穩定的膠體狀態。

3膠體金的質量判定標準

質量好的膠體金：溶液呈紅色， 質量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球 大小均一，無棱角。 形，大小均一，無棱角。 質量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一， 質量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀 各異。 各異。

4膠體金標記的原理：

膠體金標記的原理：膠體金在堿性條件下帶 負電荷， 負電荷，與蛋白質分子的正電荷基團藉靜電 吸引而形成牢固結合。 吸引而形成牢固結合。 膠 體 金 標 記 技 術 （ Immunogold labeling technique） technique） 是以膠體金作為示蹤標記物應 用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。 用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。

6膠體金試紙條診斷技術的原理

以硝酸纖維素膜為載體， 以硝酸纖維素膜為載體 ， 利用了微孔膜 的毛細血管作用， 的毛細血管作用 ， 滴加在膜條一端的液體慢 慢向另一端滲移， 通過抗原抗體結合， 慢向另一端滲移 ， 通過抗原抗體結合 ， 并利 用膠體金呈現顏色（紅色）反應，檢測抗原/ 用膠體金呈現顏色（紅色）反應，檢測抗原/ 抗體。 抗體。

7資料與方法

試紙條為英科新創（廈門）科技有限公司乙肝病毒表面抗原（HBsAg）膠體金法診斷試劑，酶聯免疫吸附試驗試劑為3v生物工程集團有限公司乙肝病毒表面抗原診斷試劑，所有試劑均在有效期內。標本來源：2009年門診部檢測的4183人中，將用ELISA法篩查出的406例乙肝陽性標本，再行膠體金試紙法檢測，并取HBsAg強陽性標本20例，用生理鹽水做倍比稀釋（原液1：2、1：4～1：512）。

8方法：

兩種方法均嚴格按照試劑說明書進行操作。結果判斷：①膠體金試紙條：按說明書判斷結果。②ELISA法：樣品A值s/C.O≥1.0者HBsAg為陽性。

9結果

用ELISA法檢測出的406份HBsAg條檢測HBsAg，僅有3份標本未檢出，檢出率99.01%。將倍比稀釋后的標本再行膠體金試紙條檢測HBsAg，結果一致。

10討論

ELISA法具有靈敏度較高、特異性強、重復性好、可進行定量和半定量測定等優點，可以在酶免疫分析儀上做批量檢測，是目前實驗室最常用的檢測HBsAg的方法，但是該方法易受加樣、反應溫度、反應時問、洗滌徹底性等諸多因素的影響，而且操作步驟較多，整個試驗過程至少需要2小時左右，因此不適用于急診及無償獻血現場篩查。膠體金試紙條法是在ELISA法基礎上發展起來的一種快速檢測技術，具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設備等優點，也廣泛應用于臨床對HBsAg進行初篩，對急診及無償獻血的現場的篩查有其實用價值，可避免無效采血所造成的浪費，節省了大量的人力、物力。目前，國產的HBsAg膠體金試紙條檢測靈敏度已達到1ng/ml。但是膠體金試紙條在HBsAg檢測中也有一定的欠缺。由于膠體金顯色需要較高濃度的標記物，故其靈敏度會受到一定限制，在HBsAg濃度較低時易出現假陰性。因此，盡管該操作簡便、快速、無需特殊設備，肉眼可以直接觀察結果，但對于低滴度HBsAg感染者極易造成漏檢。為避免假陰性的產生，最好用ELISA法進行HBsAg測定，另外溶血標本也會影響到試紙條的檢測結果。ELISA法與膠體金試紙條法各自具有一定的優缺點，在臨床檢驗工作中，可根據具體情況進行選擇。

從以上結果可以看出，與ELISA法相比，存在一定的漏檢率，不能完全代替ELISA法，ELISA法仍是臨床免疫學診斷的主要依據[2]。造成膠體金試紙條法漏檢的原因主要有原理及方法學上的差異、試劑本身的靈敏度較ELISA法低、個別標本可能存在HBsAg亞型以及溫度、觀測結果的時間短等[1]。筆者建議在使用膠體金試紙條檢測HBsAg觀察結果時，若陰性，應適當延長反應時間再觀察結果，以60 min為宜，以免造成HBsAg弱陽性的漏檢。

11結論

綜合性醫院一般不宜使用膠體金試紙條法檢測患者的HBsAg，對于膠體金試紙條法篩查陰性的臨床標本，建議用ELISA復檢，以防漏檢造成人為差錯而延誤診斷甚至引起醫患矛盾或醫療糾紛。

參考文獻

[1]紅.ELISA法與膠體金試紙條檢測Hb—sAg差異分析.公企醫刊，2010：O1.

[2]陳向陽.膠體金免疫層析法與ELISA檢測HbsAg的比較.上海醫學檢驗雜志，2001：05.

[3] 楊靜.抗乙型肝炎病毒藥物靶標的篩選和驗證.中國人民解放軍軍事醫學科學院，2005.經