主要經(jīng)濟林樹木鮮葉清除自由基活性比較研究

包錦芳

摘要該研究用二苯基苦基肼自由基試驗法對牯牛降30種主要經(jīng)濟林樹木鮮葉提取物的清除DPPH·活性進行了研究，發(fā)現(xiàn)供試的樹木鮮葉提取物都有一定的清除自由基活性，其中板栗和楊梅等葉子的甲醇提取物清除自由基能力較強，它們對DPPH·的半數(shù)清除濃度分別為0.36和0.39 mg/ml。研究還發(fā)現(xiàn)不同植物樣品的自由基清除能力與樣品的濃度都呈明顯的正相關(guān)，樣品濃度越高其自由基清除率越高；不同類經(jīng)濟林樹種鮮葉的自由基清除能力沒有明顯的規(guī)律，其中木本干果類、木本水果類、木本油料類、木本香料類等都分別有些高活性和低活性的樹種。比較甲醇和乙酸乙酯提取物的清除自由基活性可知，板栗葉中主要活性成分為極性較大的物質(zhì)，結(jié)合相關(guān)報道可初步推斷可能以鞣質(zhì)為主；楊梅葉中同時存在極性較大和較小物質(zhì)，可能以黃酮類物質(zhì)為主，但具體化合物組成尚需進一步研究。

關(guān)鍵詞經(jīng)濟林；清除自由基；1，1二苯基2苦基肼自由基

中圖分類號S759.3文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）21-07067-03

Radical Scavenging Activity Comparison of Extracts from Leaves of Economic Trees—A Case Study of Guniujiang Nature Reserve

BAO Jinfang（Management Committee of Scenic Spots for Guniujiang， Shitai， Anhui 245113）

Abstract A DPPH· assay was employed to test radical scavenging activity of extracts from leaves of economic trees in Guniujiang. The results showed that all extrats tested had radical scavenging activity， and extracts from Castanea mollissima and Myrica rubra had strong free radical scavenging activity. Their IC50 against DPPH radicals were 0.36 and 0.39 mg/ml. Tests showed that the free radical scavenging activities of different plants extracts were different and had positive relationship with their concentration. The scavenging activity differences between the tested economic trees exhibited no obvious rule. Comparison of methanol and ethylacetate extracts from Castanea mollissima revealed that its active constituent was polar compounds which could be deduced as tannins. The active constituents of Myrica rubra were flavones. The specific compounds still need futher research.

Key words Economic tree； Scavenging free radical； 1，1Diphenyl2picrylhydrazyl （DPPH·）

自由基是指含未配對電子的基團、原子或分子。自由基清除劑是指能與自由基反應(yīng)并使之還原成非自由基化合物的物質(zhì)。自由基清除劑常常也是抗氧化劑，由于自由基清除劑具有廣泛的生理活性，因而其有關(guān)研究受到世界各國的重視[1-12]。目前在發(fā)達國家，自由基清除劑篩選模型已成為藥物開發(fā)的常規(guī)篩選模型之一。篩選對象已從歐美常見藥用植物轉(zhuǎn)移到亞非傳統(tǒng)藥用植物；由陸生生物轉(zhuǎn)向海洋生物；由常見生物轉(zhuǎn)向稀有生物。目前已發(fā)現(xiàn)了大量的自由基清除劑，有些已開發(fā)成藥品、保健品和化妝品等。已發(fā)現(xiàn)的天然自由基清除劑主要包括酶和非酶兩大類，酶類如超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）等；非酶類如還原性谷胱甘肽、血漿銅藍蛋白、鐵傳遞蛋白等；其他類如尿酸、膽紅素、輔酶Q-10、硒等；外源性小分子化合物類如抗壞血酸、生育酚、胡蘿卜素、多酚類化合物、黃酮及類黃酮、甙類、生物堿及含氮雜環(huán)類、苯丙素類、萜類等[13-27]。其中大部分小分子自由基清除劑都是用DPPH·等法篩選出來。另外還有大量有關(guān)蔬菜、藥材等粗提物對DPPH有機自由基清除活性的一般比較研究。由于小分子化合物的產(chǎn)生常常涉及到多步生化反應(yīng)，涉及多個酶系，它們一般受多基因控制，目前還難以用分子生物學(xué)的手段進行構(gòu)建和生產(chǎn)，因此從天然植物中篩選仍必不可少。

該研究以經(jīng)濟林樹種為研究對象，分析樹木鮮葉提取物的清除DPPH自由基活性，以期為經(jīng)濟林樹種的選擇及應(yīng)用提供一定的參考資料。

1材料與方法

1.1供試材料

1.1.1植物樣品。供試樣品為2012年6月采自安徽石臺牯牛降30種主要經(jīng)濟林樹木鮮葉。樣品為成熟的新葉。

1.1.2化學(xué)藥品。1，1二苯基2苦基肼自由基（DPPH·）從Sigma公司購買；水為膜過濾純凈水；溶劑甲醇為國產(chǎn)分析純。

1.1.3主要儀器。Spectra Max M2全波長掃描酶標儀（美國Molecular Device公司）；KH5200數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器公司）；AE200梅特勒電子天平（上海分析儀器廠）。

1.2試驗方法

（3）不同樹種的自由基清除能力相差很大，但不同類經(jīng)濟林樹種鮮葉的自由基清除能力沒有明顯的規(guī)律，其中木本干果類、木本水果類、木本油料類、木本香料類等都分別有些高活性和低活性的樹種。

（4）比較甲醇和乙酸乙酯提取物的清除自由基活性可知，板栗葉中主要活性成分為極性較大的物質(zhì)，結(jié)合相關(guān)報道可初步推斷可能以鞣質(zhì)為主；楊梅葉中同時存在極性較大和較小的物質(zhì)，可能以黃酮類物質(zhì)為主，但具體化合物組成尚需進一步研究。

參考文獻

[1] CATELLE N.Antioxidant propecties of Hydroxyflavones [J].Free Radical Biology & Medicine，1996，20（1）：35-43.

[2] CHUNG K T，WONG T Y，WEI C I，et al.Tannins and human health：a review [J].Trends Food Sci Technol，1998（9）：168.

[3] COTELLE J A，BERNIER J L，CATTEAU J B，et al.Antioxidant properties of hydroxyflavones[J].Free Rad Biol Med，1996，20：35.

[4] HATANO T，OGAWA A N，AKIRA R，et al.Tannins of Cornaceous plants.I.Cornusiins A，B and C，dimeric monomeric and trimeric hydrolyzable tannins from Cornus officinalis，and orientation of valoneoyl group in related tannins[J].Chem Pharm Bull，1989，37（8）：1083-1090.

[5] HIRANO R.Antioxidant ability of various flavonoids against DPPH radicals and LDL oxidation[J].J Nutr Sci Vitaminol，2001，47（5）：357-362.

[6] HU F L，HAMBURGER M，LI Z Z.Radical scavengers from the entomogenous deuteromycete Beauveria amorpha[J].Planta Medica，2002，68：64-66.

[7] MANGURO L O，MIDIWO J O，KRAUS W.Phenolics of Moringa oleifera leaves[J].Nat Prod Res，2007，21（1）：56-68.

[8] NANJO F.Scavenging effects of tea catechins and their derivatives on 1，1diphenyl2picrylhydrazyl radical[J].Free Radic Biol Med，1996，21（6）：895-902.

[9] RIEDL K M，HAGERMAN A E.Tanninprotein complexes as radical scavengers and radical sinks[J].J Agric Food Chem，2001，49（10）：4917-4923.

[10] STEFFEN Y，GRUBER C，SCHEWE T，et al.MonoOmethylated flavanols and other flavonoids as inhibitors of endothelial NADPH oxidase[J].Arch Biochem Biophys，2008，469（2）：209-219.

[11] TAKAKO Y.In vitro and in vivo studies on the radical scavengering activity of tea[J].J Agric Food Chem，1998，46：2143-2150.

[12] YOKOZAWA T.Study on the inhibitory effect of tannins and flavonoids against the 1，1diphenyl2picrylhydrazyl radical[J].BiochenPharmacol，1998，56（2）：213-222.

[13] 方允中，鄭榮梁.自由基生物學(xué)的理論與應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2002.

[14] 高永貴.茶葉抗氧化劑的制備方法綜述[J].茶葉，1996，22（2）：44-47.

[15] 郭長江，韋京豫，葛玉章，等.堅果類食物清除ROO·的作用[J].食品科學(xué)，2000，21（1）：42-43.

[16] 郭劍利.從自由基學(xué)說看水果蔬菜的抗衰老作用[J].衛(wèi)生研究，1999，28（3）：190-192.

[17] 郝曉麗，許申鴻，杭瑚，等.用兩種方法評價四種食品抗氧化劑的抗氧化活性[J].食品科學(xué)，2003，24（2）：23-26.

[18] 胡豐林，陸瑞利.尼日利亞螫毛果（Cnestis ferruginca）中一種具有清除自由基活性的次生代謝產(chǎn)物的制備和結(jié)構(gòu)鑒定[J].武漢植物學(xué)研究，2000，20（4）：311-316.

[19] 林植芳，彭長連，林桂珠.兼性CAM植物長葉景天葉片在C3和CAM型時的光氧化作用[J].植物學(xué)報，2003，45（3）：301-306.

[20] 盧大用，陳恩鴻.自由基在生物體內(nèi)的功能和抑制劑[J].生物學(xué)雜志，1999，16（3）：48.

[21] 孟潔，杭瑚.柯子抗氧化作用的研究[J].食品科學(xué)，2000，21（2）：9-12.

[22] 唐霖，張莉靜，王明謙.楊梅中活性成分楊梅素的研究進展[J].中成藥，2006，28（1）：121-122.

[23] 石階平，韓雅珊，蔣修學(xué).桂皮抗氧化成分的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，1995（2）：36-39.

[24] 彭長連，陳少薇，林植芳.用清除有機自由基DPPH法評價植物抗氧化能力[J].生物化學(xué)與生物物理進展，2000，27（6）：658-661.

[25] 孫存普，張建中，段紹瑾.自由基生物學(xué)導(dǎo)論[M].合肥：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，1999.

[26] 肖純，張凱農(nóng).茶內(nèi)含物抗氧化作用機理的研究概況[J].福建茶葉，1994（2）：39-41.

[27] 鄭榮梁.自由基醫(yī)學(xué)與農(nóng)學(xué)基礎(chǔ)[M].北京：原子能出版社，2001.