金銀花中綠原酸提取方法的研究進展

李杰 王學廷 吳銀萍 王利輝

摘要 金銀花為忍冬屬植物忍冬干燥花蕾，包含揮發油、黃酮類、綠原酸類等多種有效成分，其中綠原酸具有抗菌消炎、降血脂、升高白細胞等作用，目前常以綠原酸的含量評價金銀花的質量。該文綜述了金銀花中綠原酸的提取方法，為今后深入的研究提供參考。

關鍵詞 金銀花（FLOS LONICERAE JAPONICAE）；綠原酸；提取方法

中圖分類號 S567 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）16-04969-02

金銀花（FLOS LONICERAE JAPONICAE）為忍冬屬植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾。全世界忍冬屬約有200種，我國有98種，其中可供藥用的品種47種[1-2]。金銀花中含多種有效成分，如揮發油[3-4]、黃酮類[5-6]及綠原酸類[7-8]、三萜類[9-10]和微量元素[11]等。近年來化學和藥理研究證實，綠原酸是金銀花中藥理活性最強的成分之一，是金銀花的主要特征成分和藥用成分，通常以綠原酸的含量高低來評價金銀花質量的好壞[12-13]。

綠原酸是一種多酚類化合物，化學式為：C16H18O9。綠原酸對消化系統、血液系統和生殖系統具有較強的藥理活性，具有廣泛的抗菌消炎、降血脂和升高白細胞等作用[14]。筆者就金銀花中綠原酸的提取方法來進行總結，以期為今后的深入研究提供參考。

1 水提法

水提法是中藥提取中常見的提取方法。以水為提取劑，通過浸漬、煎煮、回流等方式提取中藥中的活性成分。王盈峰等[15]采用了水浸漬的方法提取金銀花中的綠原酸，當料液比為1∶40（g/ml），溫度為80 ℃，時間為15 min時，綠原酸的提取率最高為4.09%。

李榮[16]以總浸膏率和綠原酸含量為指標，采用水煎煮工藝提取綠原酸，認為金銀花粉末過50目篩，料液比為1∶30（g/ml），煎煮3次，每次30 min時，提取效果最佳，金銀花總浸膏得率為60.7%，綠原酸的含量為6.78%。程明川[17]認為水煎煮法可以最大限度的保留金銀花藥材中的化學成分，有利于建立金銀花藥材的HPLC特征圖譜。楊蓓蓓[18]采用水冷浸、超聲法和水回流法提取金銀花中的綠原酸，結果表明水回流法要優于水冷浸和超聲法。采用水提法提取綠原酸，成本低，操作簡單，但提取物中蛋白質、多糖、鞣質等雜質比較多，提取液易發霉，并且過濾、濃縮、純化等后續工作較困難[19]。

2 乙醇回流法

乙醇回流法是提取金銀花中綠原酸常用的方法。劉祥蘭[20]通過改變乙醇的濃度、回流時間以及料液比，發現乙醇濃度為75%，回流提取0.5 h，料液比為1∶10（g/ml）的情況下，提取綠原酸的效果最好，其中乙醇濃度是影響提取效果的主要因素，其次是回流時間，乙醇量影響最小。景曉明[21]、聶凌鴻[22]試驗結果與文獻[20]基本吻合，回流時間略有差異。林丹[23]對比了水提法、水提醇沉法、醇提法和酶解法4種方法提取金銀花中的綠原酸的收率，認為50%的醇提法綠原酸收率最高，可達15.28%。

綠原酸是由咖啡酸和奎尼酸形成的縮酚酸，在中性條件下容易水解，造成綠原酸損失。因此，閻巧娟等[24]研究了乙醇溶液酸堿度對綠原酸提取率的影響，在酸性條件下有利于綠原酸的提取，堿性條件下綠原酸的得率和質量分數都隨著pH值的增大而降低，在pH值約為4時，綠原酸的純度和得率最高，分別達到45.20%和36.59%。何德貴[25]、高春榮[26]、梁玉敏[27]、范遠景[28]的研究結果也表明乙醇溶液的pH值約為4時，回流提取的綠原酸收率最高。與水提法相比，乙醇回流法提取時要耗用大量乙醇，加大生產成本，但是提取物中水溶性的雜質少，且提取液不易發霉變質，后處理比較方便。

3 超聲波提取法

超聲波提取技術，是近年來新興的一種中藥活性成分提取方法。超聲波提取主要利用超聲波在溶劑和提取樣之間產生了聲波的空化作用，導致溶液內形成氣泡，氣泡不斷增大，造成壓縮爆破，致使固體樣品被分散，增大提取樣品與萃取溶劑間的接觸面積，提高了目標提取物從固相轉移進入液相的傳質速率。

府旗中[29]將超聲波法與傳統的水提法和乙醇回流法進行了對比，認為超聲波法的綠原酸提取率要高于水提法和乙醇回流法，60%的乙醇，用超聲波加載提取30 min的提取效果最佳，綠原酸的提取率可達4.18%。周軍[30]，曹淵[31]的試驗也證實了超聲波法要優于水提法和乙醇回流法這一結論。此外，周軍[30]考慮了乙醇溶液酸堿度對提取率的影響，發現乙醇溶液pH值為4時，綠原酸的提取率最高為9.41%。曹淵[31]進一步考慮了預浸時間的影響，結果表明金銀花預先浸泡12 h后，超聲提取的效果會更好。袁飛[32]對溶劑類型、預處理、提取時間和物料比進行了研究，認為溶劑類型是影響超聲提取的主要因素。采用微波預處理金銀花，一方面可以提高綠原酸的提取率，另一方面可以縮短超聲提取的時間。最終確定了超聲提取的最佳工藝，即60%乙醇為溶劑，微波處理1 min，物料比1∶30，提取時間45 min。樊銘聰[33]研究了超聲處理溫度對綠原酸提取率的影響，隨著超聲溫度的升高綠原酸的提取率先增加后減小，溫度為60 ℃時綠原酸的提取率最高。此外，還有許多研究學者[34-37]以甲醇溶液為提取劑來超聲提取金銀花中的綠原酸，也取得了良好的結果。

4 微波提取法

微波法具有操作簡單、提取時間短、安全可靠、無污染、節能環保等優點，而受到了廣大科技工作者的青睞。

郭振庫[38]認為乙醇濃度為35%，料液比為1∶30（g/ml），壓力為0.1 MPa，加熱時間為1 min，70%微波功率（最大功率850 W）時，綠原酸的提取率最高，為5.89%；并與超聲波提取法進行了對比，認為微波法的綠原酸提取率和重復性均高于超聲波法。張霞[39]采用響應曲面法優選出了微波輔助提取的最佳工藝：濃度43%的甲醇溶液為提取劑，料液比為1∶40（g/ml），微波功率400 W下提取8 min，綠原酸的提取率可以達到7.62%。舒孝順[40]把微波功率、料液比、提取次數、提取時間和溶劑的提取劑的酸堿度作為影響因素，來進行正交試驗，發現在料液比為1∶12（g/ml），pH為3的水溶液中進行微波提取2次，每次5 min，綠原酸的提取率可以達到4.54%，其中影響綠原酸的主要因素為微波功率，然后依次是提取次數、溶劑酸堿度和提取時間。

韋藤幼[41]采用微波預處理法提取金銀花中的綠原酸，即將樣品用乙醇溶液濕潤，然后微波預處理破壞細胞組織，再水提。結果表明金銀花經過微波預處理后，綠原酸的提取率比傳統醇提法提高了1%。何培[42]運用正交試驗對微波預處理法進行了優化，發現在微波預處理過程中，乙醇用量對綠原酸的提取影響最大，其次是乙醇濃度，最后是微波預處理時間。給出了綠原酸提取的最佳條件：4倍量濃度80%的乙醇，微波預處理60 s，15倍量的蒸餾水，水提溫度為70 ℃，水提時間為50 min。

5 酶解提取法

酶的作用具有高度專一性、極強的催化活性和反應條件溫和等特點。植物的細胞壁主要是由大分子的纖維素構成，酶制劑可以降解植物細胞壁中的纖維素，使其成為水溶性糖類物質，細胞壁的破壞有利于細胞內的成分溶出，同時也有利于提取溶劑進入。劉佳佳[43]用纖維素酶和果膠酶處理金銀花樣品。經過纖維酶處理后，提取物收率和綠原酸收率均有提高，綠原酸收率可以達到8.15%，比單獨乙醇回流法的收率提高了1.68%，但是果膠酶的加入對金銀花提取物收率有影響，對綠原酸的收率影響不大。

楊茉[44]以酶用量、酶解時間、酶解時溶液的酸堿度及酶解溫度為因素，進行正交試驗。發現對綠原酸提取率的影響程度依次為：酶解時間、酶用量、酶解溫度、酶解時溶液的酸堿度，認為酶解水提的最佳工藝為酶用量0.5%，酶解時pH值6.0，酶解時間1.5 h，酶解溫度40 ℃，水提溫度為70 ℃，水提2次，1次1 h。

6 其他提取方法

馮文宇[45]采用石硫醇法、異戊醇法和改良的醋酸乙酯法提取金銀花中的綠原酸，改良的醋酸乙酯法優于其他2種方法，該法可節約大量的乙醇原料，降低運行成本，認為實際生產應以改良的乙酸乙酯法為先。王秀玲[46]采用索氏提取法提取金銀花中綠原酸，結果表明，乙醇濃度為70%，pH值為4，虹吸次數為5時，綠原酸的提取率最高。乙醇的濃度是影響綠原酸提取率的主要因素，pH值次之，虹吸次數影響最小。

7 小結與展望

金銀花在中國作為藥物使用已有很長的歷史了，目前作為經濟植物在我國廣大地區都有大規模的人工種植。從金銀花中提取的綠原酸除了可以應用在醫藥工業外，還廣泛的應用在食品、保健和日用化工等領域。雖然我國有著豐富的富含綠原酸的植物資源如金銀花，但對綠原酸的提取、純化和開發利用技術等方面的研究仍遠落后發達國家，因此研究金銀花中綠原酸的提取分離工藝具有十分廣闊的應用前景和巨大的社會、經濟效益，同時對我國植物資源開發利用也具有重大的現實意義。

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責任編輯 石金友 責任校對 況玲玲