青海半細毛羊血紅蛋白多態(tài)性及其與血清生化指標的相關性分析

王永科等

摘要[目的]探討青海半細毛羊的血紅蛋白多態(tài)性及其與7項血清生化指標間的相關性。[方法] 采用聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法對29只青海半細毛羊的血紅蛋白多態(tài)性及其與7項血清生化指標間的相關性進行分析。[結果] 青海半細毛羊血紅蛋白多態(tài)性存在HBA和HBB2種變異體，以HBB為優(yōu)勢基因。構成HBAA、HBAB和HBBB3種基因型，其基因型率分別為0.137 9、0.586 2和0.275 9。HBA和HBB基因頻率為0.431 0和0.569 0，基因雜合度為0.490 4。青海半細毛羊血液蛋白多態(tài)性與7項血清生化指標間均無顯著相關性（P>0.05）。[結論] 該研究可為青海半細毛羊種質資源、親緣關系以及品種選育和改良等方面的研究提供基礎試驗資料。

關鍵詞青海半細毛羊；血紅蛋白；多態(tài)性；生化指標

中圖分類號S826文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）14-04354-02

Polymorphism of Haemoglobin in Qinghai Semifine Wool Sheep and Its Correlation with Seven Serum Biochemical Indices

WANG Yongke et al（ Qinghai Vocational College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Huangyuan， Qinghai 812100）

Abstract [Objective] The research aimed to discuss the polymorphism of haemoglobin in Qinghai semifine wool sheep and its correlation with seven serum biochemical indices. [Method] The polymorphism of haemoglobin in 29 Qinghai semifine wool sheep and its correlation with seven serum biochemical indices were analyzed by using SDSPAGE. [Result] There were two variants （HBA and HBB） of polymorphism of haemoglobin in Qinghai semifine wool sheep， with HBB as the dominant gene. Three genotypes of HBAA， HBAB and HBBB were formed and their genotype frequency were 0.137 9， 0.586 2 and 0.275 9 respectively. The gene frequency of HBA and HBB were 0.431 0 and 0.569 0 respectively， and the gene heterozygosity was 0.490 4. The polymorphism of haemoglobin in Qinghai semifine wool sheep had no significant correlation with 7 serum biochemical indices（P>0.05）. [Conclusion] The research could provide basic test materials for studying the germplasm resources， genetic relation and selecting and improving varieties of Qinghai semifine wool sheep.

Key wordsQinghai semifine wool sheep； Haemoglobin； Polymorphism； Biochemical indices

青海半細毛羊是青海省培育的品種綿羊，具有對高原低氧環(huán)境適應性好、繁殖性能高、產(chǎn)毛量高、生長發(fā)育快、肉用性能好等優(yōu)點，深受牧民們喜愛。有關青海半細毛羊的血液蛋白多態(tài)性或血清生化指標測定的研究報道較多。賀曉龍[1]采用聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法對48只青海半細毛羊血清芳基酯酶多態(tài)性及其與血清蛋白質指標間的相關性進行了研究。郭朝輝等[2]對海北州海晏縣91只青海半細毛羊的血紅蛋白多態(tài)性進行了研究。張壽等[3]對青海河卡種羊場的青海半細毛羊妊娠期外周血液中孕酮和雌二醇含量。馬森[4]對青海半細毛羊血清NOS、NO、LDH、SOD、GSHPx和MDA進行了測定。但青海半細毛羊血液蛋白多態(tài)性與血清生化指標間相關性的報道甚少。基于此，筆者對青海半細毛羊的血紅蛋白多態(tài)性及其與血清生化指標間相關性進行分析，以期為青海半細毛羊種質資源、親緣關系以及品種選育和改良等方面的研究提供基礎試驗資料。

1材料與方法

1.1試驗動物青海省海晏縣哈勒景鄉(xiāng)牧民自繁的成年青海半細毛羊，共29只，要求臨床健康，試驗羊終年放牧飼養(yǎng)，冬季給予適量的草料補飼，試驗動物生活區(qū)的海拔高度為2 900～3 400 m。

1.2血樣采集出牧前從試驗羊頸靜脈采集非抗凝血和肝素鈉抗凝血各5 ml，對抗凝血樣進行血紅蛋白電泳，非抗凝血樣進行7項血清生化指標測定。

1.3測定項目與方法

1.3.1血液蛋白多態(tài)性的測定和判型。采用聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法進行HB變異體的分離，參考胡張才駿等[5]的方法進行，判型標準參考佐佐木清綱[6]的方法。

1.3.2血液生化指標的測定。采用磷酸苯二鈉比色法測定血清堿性磷酸酶（AKP）活性；采用酶法血清總膽固醇（CHO）和血清甘油三酯（TG）的含量；采用選擇性沉淀法測定血清高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）和血清低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）的含量；采用賴氏法測定血清谷丙轉氨酶（ALT）和血清谷草轉氨酶（AST）的活性。

以上所用的測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。所有比色項目均使用722紫外分光光度計（上海美譜達儀器有限公司生產(chǎn)）進行測定。

圖1青海半細毛羊HB電泳模式圖譜1.4數(shù)據(jù)處理試驗數(shù)據(jù)均使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計與分析，以平均值（）±標準差（SD）表示。不同血紅蛋白基因型間的7項血液生化指標的差異顯著性用t檢驗統(tǒng)計分析。可根據(jù)HB變異體受共顯性等位基因控制的假設推斷基因型，計算基因頻率。

按照以下公式計算基因雜合度：H=1-P2i。式中，Pi為某一位點第i個等位基因頻率。

2結果與分析

2.1青海半細毛羊血紅蛋白多態(tài)性從圖1可以看出，被檢青海半細毛羊血紅蛋白存在HBAA、HBAB和HBBB3種基因型而呈多態(tài)性，其中HBAB型為優(yōu)勢基因型；HBA和HBB的基因頻率分別為0.431 0和0.569 0，以HBB為優(yōu)勢基因，基因雜合度為0.490 4。

2.2青海半細毛羊不同血紅蛋白基因型7項血清生化指標含量青海半細毛羊不同血紅蛋白基因型7項血清生化指標的含量見表1。

3討論

血紅蛋白在動物體內(nèi)擔負著運送氧氣和二氧化碳的重要生理功能，是機體的重要生化遺傳標記，也是目前研究最多的血液蛋白質之一。自Harris等[7] 用紙電泳法鑒定出綿羊HBA和HBB2個類型以來，又相繼發(fā)現(xiàn)了HBC[8]、HBD[9]和 HBE[10]。該試驗結果表明青海半細毛血紅蛋白多態(tài)性只存在HBA和HBB2種變異體，構成HBAA、HBAB和HBBB 3種基因型，且HBA和HBB基因頻率分別為0.408 3和0.591 7。 張才駿等[5]對生活在不同海拔的藏綿羊的HB多態(tài)性進行了研究， 發(fā)現(xiàn)HBA的基因頻率隨著海拔高度的升高而增加（由0.290 3增至0.932 4）。該試驗中青海半細毛羊生活在海拔高度為2 900～3 400 m的地區(qū)，其HB位點的HBA基因頻率為0.431 0，低于生活在海拔3 500 m左右的歐拉型藏羊HB位點的HBA基因頻率0.799 0，這與以上研究結果相一致。

血液生理生化特性是動物長期進化的結果，是對棲息環(huán)境長期適應的反應，也是反映機體健康狀況的重要指標。血清中TG 、TCHO、HDL和LDL含量可反映機體對脂類的吸收及代謝程度[11]。AKP、ALT和AST是動物代謝過程中重要的調控酶，其活性不僅反映動物體內(nèi)成骨細胞活性及骨生成狀況的生成指標，同時也是反映鈣、磷代謝以及診斷心、肝功能的重要指標[12]。血液蛋白（酶）多態(tài)性作為一種重要的生化遺傳標記，已被廣泛用于探討畜禽品種的起源、進化及品種間的親緣關系，并利用這些標記作為遺傳檢測來進行早期選育的輔助標記。該試驗結果表明青海半細毛羊7項血清生化指標在不同血液蛋白多態(tài)性型間均無顯著差異（P>0.05），這與賀曉龍[1]、張才駿等[13]、王勇等[14]的研究結果相一致。

參考文獻

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[3] 張壽，王應安，張勤文，等.青海毛肉兼用半細毛羊妊娠期外周血液中孕酮和雌二醇含量的測定[J].中國獸醫(yī)科技，1999，1（3）：8-9.

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